Возбудитель дизентерии ягнят

(С/, perfringens тип В (L-D-Bacilius). Вызывает остропротекающее заболевание у ягнят в пер­вые дни после рождения. В лабораторию посылают кишечное со­держимое. Порядок и методика исследования такие же, как при злокачественном отеке. Для установления типовой принадлежно­сти ставят пробу нейтрализации токсина молодой культуры С. perfringens типовой антитоксической сывороткой.

Возбудитель брадзота овец

(С. perfringens типа С, С. septicam, С. novyL). Анаэробные клостридии. Брадзот —остропротекаю­щее септическое заболевание овец, характеризующееся судо­рожными явлениями и высокой смертностью. Характеристика названных микробов изложена выше. Обнаружение возбудите­лей служит основанием для установления диагноза. В лаборато­рию направляют кровь из сердца, слизистую оболочку сычуга, тонкого отдела кишечника, инфильтрат подкожной клетчатки, некротические очаги в печени. Порядок и методика исследова­ния такие же, как при диагностике злокачественного отека и дизентерии ягнят. Выделенную чистую культуру идентифици­руют по характерным морфологическим и культурально-биохи-мическим свойствам.

Возбудитель энтеротоксемии овец

(С. perfringens типа D). Вызы­вает брадзотоподобное заболевание у овец всех возрастов с быст­рым течением и смертельным исходом. В лабораторию отправля­ют содержимое кишечника и пораженную «размягченную» почку.

Для биопробы заражают морских свинок, которые погибают в те­чение суток. Порядок проведения исследования тот же, что и при исследовании данной группы микробов.

При выявлении бацилл перфрингенс можно использовать ме­тод флуоресцирующих антител.

Возбудитель эмфизематозного карбункула (эмкар)

(С. chauvoei). Вызывает инфекционное остропротекающее заболевание преиму­щественно у крупного рогатого скота, редко у овец и коз. Зараже­ние происходит главным образом алиментарным путем. В местах, богатых мышечной тканью (бедро, подгрудок), образуется газовый отек (карбункул) — опухолевидное образование, при надавлива­нии слышен звук (шум, треск, крепитация) лопающихся пузырь­ков газа, образующихся при разложении ткани под влиянием фер­ментов бактерий.

Бактериологическое исследование. Направ­ляют кусочки пораженной мышечной ткани из карбункула, наре­занные в виде полосок. Если кусочки мышц нельзя быстро доста­вить в свежем виде, их консервируют в 40 %-м водном растворе глицерина, высушивают на воздухе завернутыми в марлю или об­рабатывают раствором NaCl. В лаборатории присланный материал растирают в стерильной стулке с дробленым стеклом или кварце­вым песком, а материал, консервированный в глицерине, предва- ' рительно отмывают стерильным физиологическим раствором, а затем растирают.

Бактериологическое исследование включает микроскопирова-ние, посев на питательные среды, выделение чистой культуры и биопробу.

Микроскопирование. С. chauvoei — толстая, крупная, грамположительная, подвижная спорообразующая палочка; перит-рих. Споры располагаются центрально, терминально и субтерми­нально. Диаметр споры превышает диаметр вегетативной клетки.

Культурально-биохимические свойства. Оптимальная температура роста 36...38°С. Рост в жидких средах проявляется в виде равномерного помутнения с газообразовани­ем, затем микробная масса оседает на дно, среда просветляется. Желатину разжижает. В глубине сывороточного агара образует че-чевицеобразные колонии. Молоко свертывает, образуя мелкие хлопья казеина. На глюкозно-кровяном агаре колонии сходные с виноградным листом или в виде перламутровой пуговицы. Интен­сивно ферментирует с образованием кислоты и газа глюкозу, саха­розу, лактозу и мальтозу.

Патогенность. Проверяют внутримышечным заражени­ем морских свинок (с внутренней стороны бедра). Гибель наступа­ет через 24...96 ч. Перед заражением животным вводят 1...2 %-й раствор молочной кислоты или исследуемый растертый материал инъецируют вместе с кварцевым песком или дробленым стеклом. Молочная кислота, песок, стекло вызывают некроз ткани, что способствует более быстрому проникновению в ткани микроба и размножению его в организме.

С. chauvoei продуцирует термолабильный экзотоксин на марте­новском бульоне. Другим фактором вирулентности данного мик­роба является способность продуцировать агрессины (в организме и на питательных средах). Агрессины можно получить при фильт­рации воспалительного экссудата или старой бульонной культуры.

Возбудитель столбняка (С. tetani). Чистую культуру впервые вы­делил Китазато (1889). Инфицирование происходит, как правило, при ранениях.

Если клинические признаки столбняка типичные, то необхо­димости в микробиологическом исследовании патологического материала нет. В сомнительных случаях в лабораторию направля­ют раневой экссудат.

Основное в диагностике столбняка — обнаружение специфи­ческого токсина. Раневой воспалительный экссудат засевают пас­теровской пипеткой в среду Китта — Тароцци, посевы инкубиру­ют в термостате 5...7сут. Полученную культуру фильтруют через асбестовые фильтровальные пластинки Зейтца. Фильтрат вводят подкожно белым мышам или морским свинкам, которые погиба­ют с выраженной клинической картиной столбняка. Параллельно исследуемый материал микроскопируют, высевают на глкжозно-кровяной агар.

При исследовании почвы взвесь из пробы прогревают при 80 °С в течение 30 мин, затем засевают в среду Китта — Тароцци, культивируют в термостате. Далее культуру фильтруют и ставят биопробу.

С. tetani — тонкая грамположительная палочка длиной 4...8 мкм, подвижная (перитрих), образует концевую спору (тер­минально). Анаэроб. Споры сферической формы, их диаметр зна­чительно превышает диаметр вегетативной клетки, вследствие чего микроб приобретает вид барабанной палочки. Оптимальная температура роста 37 °С, рН 7,4...7,9. В среде Китта — Тароцци (и других жидких средах) растет, вызывая равномерное помутнение с последующим оседанием клеток на дно пробирки и просветлени­ем бульона (через 3...4 сут). Висмут-сульфит-агар и мозговая среда чернеют. На глюкозо-кровяном агаре растет в виде небольших ко­лоний с неровными краями. Зона гемолиза проявляется не у всех штаммов. В процессе роста на питательных средах происходит ферментация белковых веществ с образованием газообразных продуктов, имеющих неприятный запах. Медленно разжижает же­латину. Углеводы почти не ферментирует.

С. tetani продуцирует сильный экзотоксин, чем и обусловливает патогенное действие. Токсин включает две фракции — тетано-спазмин, вызывающий поражение нервной ткани, судорожное со­кращение мышц, и тетанолизин — лизирующий эритроциты. Из лабораторных животных для биопробы используют морскую свинку или белую мышь, кролика, белых крыс. В естественных условиях к токсину чувствительны все виды животных и человек.

Возбудитель ботулизма (С. botulinum). Ботулизм — кормовая (пищевая) токсикоинфекция, проявляющаяся параличом глотки, гортани и конечностей. Смертность — 100 %.

Морфология. С. botulinum — крупная подвижная грампо­ложительная палочка. Образует расположенную терминально спо­ру, расширяющуюся к наружному концу в виде теннисной ракет­ки. Строгий анаэроб. На среде Китта — Тароцци дает равномер­ное помутнение с последующим просветлением и осаждением микробной массы на дне пробирки. На кровяном агаре возбуди­тель образует колонии с отростками и зоной гемолиза.

Восприимчивы все виды животных и человек. Действие на организм оказывает продуцируемый экзотоксин. По антигенной структуре различают несколько типов токсинов: А, В, С, D и Е. Каждый из них нейтрализуется типоспецифической антитокси­ческой сывороткой. С. botulinum типа А и В обладает протеолити-ческими свойствами, разжижает желатину, продуцирует сероводо­род, аммиак и масляную кислоту. Молоко пептонизирует с обра­зованием газа. Ферментирует глюкозу, глицерин и мальтозу.

Ботулизм у человека обычно вызывают типы А, В и Е; у лоша­дей — чаще тип В, реже тип С, у крупного рогатого скота — тип D и С, у овец и птиц — тип С. Для лабораторного анализа направляют остатки корма, вызвавшего отравление (у крупных животных), рвотные массы (у собак, кошек). После гибели животного иссле­дуют содержимое желудка, кишечника, лимфоузлы, головной мозг, селезенку. Чтобы избежать инактивации токсина, каждую пробу помещают в отдельную банку темного стекла (или оберты­вают банку черной бумагой), герметично закрывают. Поступив­ший в лабораторию материал исследуют бактериологически с це­лью выделения культуры и обнаружения токсина возбудителя.

Для выделения культуры производят посевы на жидкие и плот­ные питательные среды. Помимо этого каждую пробу материала заливают физиологическим раствором NaCl (1". 2) для экстрагиро­вания токсина. Через 1...2ч полученный экстракт фильтруют че­рез пластинки Зейтча. Фильтрат делят на три порции: одну вводят лабораторным животным (при наличии токсина животные гиб­нут); вторую порцию прогревают при 80 "С 30 мин, затем инъеци­руют морским свинкам — животные должны остаться живыми (токсин термолабильный); третью порцию смешивают с полива­лентной антитоксической антиботулинической сывороткой и вы­держивают в термостате 1...2 ч, затем смесь вводят подкожно мор­ским свинкам. Токсин ботулинуса нейтрализуется специфически­ми антителами сыворотки (антитоксинами) и при инъекции жи­вотным гибель не вызывает.

Если необходимо установить тип токсина, фильтрат разливают в пробирки по 1 мл и в каждую добавляют антисыворотку разного типа. После контактирования в течение 1...2ч смесь токсин (фильтрат)-антитоксин(сыворотка) из каждой пробирки вводят отдельным группам животных. Не погибают только те животные, которым была введена смесь с нейтрализованным токсином (ан­тисывороткой определенного типа).

Возбудитель некробактериоза (Fusobacterium necrophorum)^ Возбу­дитель F. necrophorum принадлежит к семейству Bacteriodaceae, роду Fusobacterium. F. necrophorum обычно вызывает местный некроти­ческий процесс, чаще поражаются ткани в области конечностей, но может быть и генерализованный процесс с образованием метаста­зов в виде некротических очагов в печени, легких, почках и др. У северных оленей болезнь часто приводит к летальному исходу.

Бактериологическая диагностика. Использу­ют пораженную ткань, взятую на границе некротизированной и здоровой ткани. Поскольку из данного материала чистую культуру получить трудно (фузобактерии некроза всегда находятся в ассо­циации с другими микробами), исследуют пораженные очаги внутренних органов. С этой целью некротизированную ткань рас­тирают в ступке с небольшим количеством физраствора и полу­ченной взвесью патологического материала заражают кролика. После гибели последнего труп вскрывают и из очагов поражения производят посевы на питательные среды для культивирования анаэробов и готовят бактериоскопические препараты.

F. necrophorum — сравнительно тонкая, неподвижная, грамотри-цательная анаэробная палочка, споры и капсулы не образует. В мазках-препаратах из пораженной ткани и в мазках-препаратах из исследуемой культуры располагается длинными нитевидными це­почками. Микроорганизм окрашивается неравномерно; отмечает­ся зернистость цитоплазмы.

Культурально-биохимические свойства. Оптимальная температура роста 34...37 °С. В среде Китта — Тароц-ци отмечают равномерное помутнение с газообразованием. В сы­вороточном агаре столбиком через З...4сут появляются чечевице-образные колонии с нитевидными ответвлениями. На глюкозо-кровяном агаре образуются мелкие колонии. Не разжижает жела­тину, не образует сероводород и индол, Разлагает сахарозу, салицин.

Для биопробы используют кроликов, которых заражают аппли­кацией патологического материала в подкожный отпрепарирован­ный «кармашек» или инъецируют подкожно сбоку, и белых мы­шей. Кролики гибнут через 1„.2мес, мыши —через 8...14сут.

Обнаружить F. necrophorum можно и методом флуоресцирую­щих антител.

Биопрепараты. Поливалентная концентрированная вакцина против брадзота, инфекционной энтеротоксемии, злока­чественного отека овец и дизентерии ягнят: состоит из смеси на-тивных токсических бульонных культур, обезвреженных прогре­ванием и формалином, сорбированных на геле гидроксида алюми­ния и затем концентрированных. Содержит С. perfringens типов В и D и С. septicum.

Поливалентный анатоксин против клостридиозов овец. Содер­жит анатоксины С. perfringens типов С и В и С. septicum, сорбиро­ванные на геле гидроксида алюминия. К готовым анатоксинам С. perfringens добавляют 25 % вакцины С. septicum.

Антитоксическая сыворотка против анаэробной дизентерии яг­нят и инфекционной энтеротоксемии овец: получают иммунизаци­ей волов-продуцентов анатоксинами С. perfringens типов С и D. Им­мунную сыворотку проверяют на активность в РН: 1 мл препарата должен содержать не менее 10 МЕ антитоксинов каждого типа.

Антитоксические сыворотки С. perfringens типов А, С, D и Е для диагностики болезней животных, вызываемых С. perfringens.

Гидроокисьалюминиевая вакцина против эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота и овец.

Столбнячный анатоксин: представляет собой фильтрат токсин-содержащей бульонной культуры, инактивированной формали­ном при 39...40 "С в течение 25...30 сут.

Вакцину против ботулизма норок готовят из С. botulinum типа С. Бульонную токсинсодержашую культуру инактивируют форма­лином при 37 °С в течение 35 сут. В каждой серии вакцины коли­чество анатоксина варьирует, что не позволяет рекомендовать для вакцинации животных одну постоянную дозу. Поэтому в опыте вакцинации с последующим прямым заражением на мышах рас­считывают ЕД препарата (по методу Кребса) и, исходя из полу­ченных данных, определяют рабочую дозу вакцины.

Ботулинистические диагностические антитоксические сыво­ротки предназначены для идентификации ботулинических токси­нов в реакции нейтрализации.