Оборудование микробиологической лаборатории.

Для работы в лаборатории необходимы следующие приборы и аппараты: биоло­гические иммерсионные микроскопы с дополнительными при­способлениями (осветитель, фазово-контрастное устройство, тем-нопольный конденсор и др.), люминесцентные микроскопы, тер­мостаты, аппаратура для стерилизации, рН-метры, аппараты для

получения дистиллированной воды (дистиллятор), центрифуги, технические и аналитические весы, аппаратура для фильтрования (фильтр Зейтца и др.), водяные бани, холодильники, аппарат для изготовления ватно-марлевых пробок, набор инструментов (бак­териологические петли, шпатели, иглы, пинцеты и др.), лабора­торная посуда (пробирки, колбы, чашки Петри, матрацы, флако­ны, ампулы, пастеровские и градуированные пипетки) и др.

В лаборатории выделено специальное место для окраски мик­роскопических препаратов, где находятся растворы специальных красителей, спирт, кислоты, фильтровальная бумага и др. Каждое рабочее место снабжено газовой горелкой или спиртовкой, бан­кой с дезинфицирующим раствором. Для повседневной работы лаборатория должна располагать необходимыми питательными средами, химическими реактивами, диагностическими препарата­ми и другими лабораторными материалами. В крупных лаборато­риях имеются термостатные комнаты для массового выращивания микроорганизмов, постановки серологических реакций.

Для выращивания, хранения культур, стерилизации лаборатор­ной посуды и других целей предназначена следующая аппаратура:

1. Термостат. Аппарат, в котором поддерживается постоянная температура. Оптимальная температура для размножения многих микроорганизмов составляет 37 "С. Термостаты бывают воздушшными и водяными.

2. Микроанаэростат. Аппарат для выращивания микроорганизмов в анаэробных условиях.

3. Холодильники. Используют в микробиологических лабора­ториях для хранения культур микроорганизмов, питательных сред, крови, сывороток, вакцин и прочих биологических препара­тов при температуре около 4 °С. Для хранения препаратов ниже 0°С предназначены низкотемпературные холодильники, в которых поддерживается температура —20 "С и ниже.

4. Центрифуги. Применяют для осаждения микроорганизмов, эритроцитов и других клеток, разделения неоднородных жидкостей (эмульсии, суспензии). В лабораториях используют центрифуги с различными режимами работы.

5. Сушильно-стерилизационный шкаф (печь Пастера). Пред­назначен для воздушной стерилизации лабораторной посуды и других материалов.

6. Стерилизатор паровой (автоклав). Предназначен для стери­лизации паром под давлением. В микробиологических лаборато­риях используются автоклавы разных моделей (вертикальные, го­ризонтальные, стационарные, переносные).

Правила работы в микробиологической лаборатории.

Микробио­лог имеет дело преимущественно с чистыми культурами микроор­ганизмов, которые являются потомством одной клетки. Посколь­ку в воздухе и на поверхности предметов в лаборатории (на столах, приборах, инструментах, а также на одежде, руках и др.) всегда присутствует множество разнообразных микроорганизмов, следу­ет постоянно заботиться о сохранении чистоты изучаемых куль­тур. Поэтому при работе в микробиологической лаборатории не­обходимо строго соблюдать определенные правила, одно из кото­рых — поддержание чистоты, включая ежедневную гигиеническую уборку всех помещений.

Для уничтожения микроорганизмов в воздухе и на поверхнос­тях существуют различные способы дезинфекции.

Воздух в лаборатории частично очищают проветриванием. Вентиляция резко снижает численность микроорганизмов в воз­духе, особенно при значительной разнице температур снаружи и внутри помещения. Продолжительность проветривания не менее 30...60 мин.

Более эффективный и наиболее часто применяемый способ обеззараживания воздуха — воздействие ультрафиолетовым излу­чением (УФИ), обладающим высоким антимикробным действием и вызывающим гибель не только вегетативных клеток, но и спор микроорганизмов. Из-за слабой проникающей способности ульт­рафиолетовое излучение не проходит через обычное стекло и лег­ко поглощается частицами пыли. Поэтому для стерилизации вре­мя облучения составляет от 30 мин до нескольких часов в зависи­мости от степени загрязненности воздуха.

В качестве источника УФИ используют бактерицидные лампы (УФЛ). Излучателем в них служит электрическая дуга, возникаю­щая в парах ртути низкого давления и испускающая линейный спектр в ультрафиолетовой области, более 80 % энергии которого приходится на длину волны 2,5 нм.

Бактерицидная лампа представляет собой стеклянную трубку, вмонтированную между двумя электрическими контактами и включаемую в сеть через дроссель. Трубка изготовлена из специ­ального стекла, пропускающего все лучи с длиной волны 2,5 нм и задерживающего излучение с длиной волны короче 2 нм. Следует помнить, что УФИ вызывает острое воспаление роговицы глаз с характерным слезотечением и светобоязнью вскоре после облуче­ния. Поэтому для того чтобы прямые или отраженные ультрафио­летовые лучи не воздействовали на глаза, применяют защитные очки. В небольших помещениях при включенной бактерицидной лампе находиться нельзя.

Пол, стены и мебель в микробиологической лаборатории про­тирают растворами различных дезинфицирующих веществ. Обра­ботка пылесосом удаляет с предметов пыль и значительную часть микрофлоры. В качестве дезинфицирующих растворов чаще всего используют 0,5...3%-й водный раствор хлорамина. Особенно тща­тельно следует дезинфицировать поверхность стола, на котором проводится работа с микроорганизмами. Ее необходимо проти­рать дезинфицирующим раствором как перед началом работы, так и после окончания. На рабочем столе недопустимы лишние предметы. Все реактивы и растворы должны быть снабжены этикетка­ми и стоять на строго определенных местах. В лаборатории нельзя есть, пить, курить. Работать следует в халатах.

В лабораторных условиях микроорганизмы выращивают на плотных и в жидких питательных средах, которые разливают в пробирки, колбы или чашки Петри. Посуду и питательные среды предварительно стерилизуют. Внесение клеток микроорганизмов в стерильную среду называют посевом, или инокуляцией. Посев (или пересев) микроорганизмов требует четкого соблюдения оп­ределенных правил, чтобы предохранить исследуемую культуру от загрязнения посторонними микроорганизмами.

Посевы микроорганизмов в стерильные среды лучше всего осу­ществлять в особых помещениях — боксах. Бокс представляет со­бой небольшую изолированную комнату, разделенную перегород­кой на две части. В основное рабочее помещение бокса входят че­рез тамбур, имеющий раздвижную дверь, что исключает резкое перемещение воздуха и, следовательно, занесение извне посто­ронней микрофлоры. Оборудование бокса включает стол с легко-моющейся поверхностью, стул, газовую или спиртовую горелки, бактерицидную лампу, укрепленную в специальном штативе или смонтированную на потолке бокса. В боксе удобно иметь подсоб­ный стол, на котором размешают необходимые во время работы предметы. Все оборудование бокса, его стены, пол и потолок пе­риодически моют и протирают дезинфицирующими растворами. Перед работой бокс облучают бактерицидной лампой в течение 40...60 мин.

После посева пробирки или другие сосуды, в которых выращи­вают микроорганизмы, помещают в термостаты, где с помощью терморегуляторов поддерживается постоянная температура. Посу­ду с культурами микроорганизмов, подлежащими утилизации, подвергают автоклавированию, чтобы убить клетки, и только пос­ле этого моют. В посуду с плотными средами заливают дезинфи­цирующий раствор, который через сутки удаляют, а посуду моют. Неаккуратное обращение с культурами микроорганизмов приво­дит к возникновению бактериального аэрозоля, представляющего опасность для здоровья сотрудников.

Все сотрудники лабораторий, а также кафедр микробиологии, аспиранты, студенты, приходящие на занятия и работающие в на­учно-студенческих кружках, прежде чем приступить к работе с за­разным материалом (культуры патогенных микробов, трупы экс­периментально зараженных животных, выделения больных жи­вотных, кровь и др.) обязаны ознакомиться и строго соблюдать следующие правила работы и техники безопасности в ветеринар­ных бактериологических лабораториях:

в помещение лаборатории входят только в специальной одеж­де: в халате, белой шапочке или косынке. Халат должен быть на­глухо застегнут, волосы убраны под шапочку;

в лабораторию нельзя проносить посторонние веши, продукты питания. Портфели и сумки складывают в специально выделен­ном месте;

в помещении лаборатории категорически запрещается прини­мать пищу, пить и курить;

каждому работнику (студенту) под определенным номером вы­деляют рабочее место, микроскоп и другие принадлежности;

на рабочем месте должно находиться оборудование только для выполнения конкретного задания. Обычно это набор красок, кол­ба с дистиллированной водой, сливная чашка, банки с чистыми и отработанными стеклами, бактериологическая петля, штатив, банка с дезинфицирующим раствором;

перед началом работы необходимо проверить наличие и ис­правность приборов, посуды, газовых горелок (спиртовок) и пр. О замеченных недостатках и неисправностях следует сообщить от­ветственному, а на учебных занятиях — преподавателю;

во избежание взрыва нельзя зажигать одну спиртовку (или га­зовую горелку) от другой; пользуются только спичками;

нельзя касаться проводов и контактных частей электросети ме­таллическими и другими предметами;

студенты без ведома преподавателя или обслуживающего пер­сонала не должны включать электроприборы и аппаратуру;

студенты приступают к выполнению задания только с разреше­ния преподавателя; ход работы должен строго соответствовать изучаемой методике;

каждый: сотрудник и студент должен соблюдать опрятность в работе, содержать в чистоте рабочее место и оборудование;

материал, используемый на учебных занятиях, принимают за особо опасный;

при распаковке материала, присланного для исследования, необ­ходимо соблюдать осторожность: банки снаружи обтирают дезинфи­цирующим раствором и ставят только на подносы или кюветы;

при исследовании поступившего материала и при работе с бак­териальными культурами соблюдают общепринятые в бактерио­логической практике технические приемы, исключающие воз­можность инфицирования работника;

в процессе изучения возбудителей инфекционных болезней студенты должны усвоить особенности правил техники безопас­ности при работе с конкретными возбудителями;

вскрытие трупов экспериментальных (лабораторных) живот­ных производят в специальной одежде на оборудованном столе с помощью необходимых инструментов, используя для этих целей кювету, залитую воском (или парафином). Инструменты после вскрытия на стол класть запрещается: их помещают в стакан с дез-раствором или обжигают над пламенем горелки;

при работе с жидким инфицированным материалом использу­ют резиновые баллоны, соединенные с пипеткой;

жидкости, содержащие патогенных микробов, переливают над сосудом с дезинфицирующим раствором;

если в процессе работы патологический материал случайно по­пал на стол, его немедленно удаляют тампоном, смоченным де­зинфицирующим раствором. При попадании зараженного мате­риала на кожу, конъюнктиву, в ротовую полость принимают экст­ренные меры к обеззараживанию;

по окончании работы патологический материал, использован­ные культуры микроорганизмов, инструменты и поверхность сто­ла обеззараживают;

в конце занятия бактериальные культуры и другой материал студенты должны сдать преподавателю, а рабочее место привести в порядок. Выносить из лаборатории пробирки с культурами, пре­параты (мазки) и другие предметы категорически запрещается;

патологический материал и бактериальные культуры, необхо­димые для дальнейшей работы, оставляют на хранение в закрытом рефрижераторе или сейфе;

перед уходом из лаборатории необходимо снять халат, руки тщательно вымыть и обработать йодированным спиртом. Выхо­дить за пределы лаборатории в халатах запрещается;

соблюдение правил работы и техники безопасности на учебных занятиях по микробиологии контролируют дежурные. С техникой безопасности при работе на кафедре микробиологии студенты знакомятся на первом занятии, о чем расписываются в журнале.

Соблюдая перечисленные правила, сотрудник в лаборатории обеспечивает стерильность манипуляций и предупреждает воз­никновение внутри- и внелабораторного заражения.

Ведение лабораторных записей. Тетрадь для лабораторных работ служит документом, позволяющим контролиро­вать правильность полученных данных. В нее должны быть занесены сведения, имеющие отношение к выполнению данной работы. За­пись необходимо вести аккуратно, четко и в определенном порядке, например: 1) название опыта, дата его постановки и окончания; 2) объект исследования; 3) условия проведения опыта; 4) основной принцип используемого метода анализа; 5) результаты опыта.

Полученные результаты подробно описывают, цифровой мате­риал сводят в таблицы, если необходимо, в графики, диаграммы, рисунки. Каждая лабораторная работа должна заканчиваться соб­ственными наблюдениями и выводами, занесенными в рабочую тетрадь.

В процессе работы студенты овладевают техникой и методами микроскопирования, знакомятся с морфологией представителей различных групп микроорганизмов, осваивают подход к выделе­нию чистых культур и их идентификации, изучают влияние усло­вий и факторов среды обитания на рост и образование разнообраз­ных продуктов жизнедеятельности микроорганизмов и знакомятся с некоторыми методами генетических исследований бактерий.

ОБЩАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ