5. Количественное определение тимола.
5.1. Цель: проведение валидации методики количественного определения тимола в суппозиториях «Биопрост».
5.2. Материалы, оборудование, реактивы
Используемые приборы и материалы:
Газовый хроматограф Pue-Unicam 304, колонка 1,5m 2mm с сорбентом 10% Apiezon-L on 100-1200 mesh Diatoom C-AW (поверен 02.08.06)
Колба коническая на 100 мл ГОСТ 1770-74
Колба мерная на 25 мл ГОСТ 1770-74
Используемые реактивы:
Хлороформ TУ – 2631-066-44493179-01
5.3. Методика проведения эксперимента:
Взвешивают предварительно разрезанный на кусочки 1 суппозиторий (точная навеска), переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и растворяют в хлороформе. От полученного раствора отбирают пробу для ввода в хроматограф.
Анализ проводят в газовом хроматографе Pue-Unicam 304, колонка 1,5m 2mm с сорбентом 10% Apiezon-L on 100-1200 mesh Diatoom C-AW в следующих условиях: температура колонки 1650С; температура испарителя -2000С; скорость газа – носителя (азот) – 20 мл/мин. Объем пробы – 1 мкл.
Расчет содержания тимола в граммах на одну свечу проводят по формуле:
,
где
m0 - навеска рабочего стандартного образца (РСО) тимола, взятая для приготовления раствора, в граммах;
S0 - площадь пика тимола на хроматограмме раствора РСО тимола;
m – навеска препарата, в граммах;
S – площадь пика тимола на хроматограмме исследуемого раствора препарата;
m1 – средняя масса свечи, в граммах.
Содержание тимола должно быть от 90 мг до 110 мг на одну свечу.
Приготовление РСО тимола. Около 0,16 г (точная навеска) тимола (ФС 42-1010-75) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в хлороформе, объем доводят до метки хлороформом и перемешивают. От полученного раствора отбирают пробы для ввода в хроматограф. Раствор используют свежеприготовленным.
Проверка пригодности хроматографической системы.
Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:
эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику тимола на хроматограммах раствора РСО тимола должна быть не менее 2500 теоретических тарелок (ГФXI, вып 1, с. 110);
относительное стандартное отклонение, рассчитанное для площади пика тимола должно быть не более 2% (ГФ XI, вып. 1, с. 110).
Результаты исследований представлены в таблице 8.
Таблица 8. Определение количественного содержания тимола.
№ опыта |
Условия выбора |
Площадь пика |
Концентрация, мг |
|
S2 |
S |
S |
|
Eотн |
+ |
|
|
Серия № 010307 |
6617,3 |
0,097 |
0,097 |
0 |
0 |
0 |
0,003 |
0 |
0,097 |
|
|
6605,5 |
0,097 |
||||||||
|
|
6598,6 |
0,097 |
||||||||
|
|
Серия № 030307 |
6725,3 |
0,099 |
0,099 |
0 |
0 |
0 |
0,001 |
0 |
0,099 |
|
|
6715,8 |
0,099 |
||||||||
|
|
6734,7 |
0,099 |
||||||||
|
|
Серия № 050307 |
6735,8 |
0,099 |
0,099 |
0 |
0 |
0 |
0,001 |
0 |
0,099 |
|
|
6794,9 |
0,099 |
||||||||
6778,2 |
0,099 |
Правильность характеризует близость результатов испытаний, полученных данным методом, к истинному значению. Показателем правильности служит разница среднего арифметического и истинного значения = / - µ/,
По данным произведенных расчетов можно сделать вывод о правильности метода.
Точность (сходимость) характеризует близость отдельных измерений к их среднему арифметическому значению. Она выражается величиной стандартного отклонения S . В соответствии с рассчитанной величиной S методика обладает высокой степенью точности получаемых результатов.
Специфичность способность измерять точно и селективно аналитически определяемое вещество в присутствии компонентов, которые могут ожидаться в матрице образца (примеси, родственные химические соединения), также оценивается погрешность их определения.
Линейность
Данные результатов анализа по пяти различным концентрациям представлены в таблице 9.
Таблица 9.
№ опыта |
Концентрация г/ 100 мл |
Площадь пика |
|
S2 |
S |
S |
|
Eотн |
+ |
|
|
0,08 |
1709,36 |
1741,76 |
13026,29 |
114,1328 |
43,13813 |
- |
6,067889 |
1636,077 |
|
|
1675,56 |
||||||||
|
|
1892,11 |
||||||||
|
|
1695,39 |
||||||||
|
|
1651,35 |
||||||||
|
|
1649,8 |
||||||||
|
|
1918,79 |
||||||||
|
|
0,12 |
2709,81 |
2580,494 |
4149,351 |
64,41545 |
24,34675 |
- |
2,311555 |
2520,845 |
|
|
2554,41 |
||||||||
|
|
2525,28 |
||||||||
|
|
2596,98 |
||||||||
|
|
2519,46 |
||||||||
|
|
2593,62 |
||||||||
|
|
2563,9 |
||||||||
|
|
0,16 |
2788,39 |
2869,116 |
7060,691 |
84,02792 |
31,75957 |
- |
2,712018 |
2791,305 |
|
|
2858,41 |
||||||||
|
|
2863,27 |
||||||||
|
|
2860,60 |
||||||||
|
|
3050,05 |
||||||||
|
|
2822,88 |
||||||||
|
|
2842,21 |
||||||||
|
|
0,20 |
3413,48 |
3440,659 |
715,1623 |
26,74252 |
10,10772 |
- |
0,719744 |
3415,895 |
|
|
3406,10 |
||||||||
|
|
3452,99 |
||||||||
|
|
3884,52 |
||||||||
|
|
3450,59 |
||||||||
|
|
3429,14 |
||||||||
|
|
3447,79 |
||||||||
|
|
0,24 |
4496,51 |
4332,14 |
7097,327 |
84,24564 |
31,84186 |
- |
1,800786 |
4254,127 |
|
|
4334,00 |
||||||||
|
|
4225,63 |
||||||||
|
|
4309,91 |
||||||||
|
|
4335,11 |
||||||||
|
|
4273,85 |
||||||||
|
|
4349,97 |
По найденным средним значениям был проведен расчет линии регрессии методом наименьших квадратов для результатов с различными концентрациями аналита.
Наклон регрессионной линии дает математическую степень линейности (коэффициент корреляции R2 = 0,9745, перекрывание с осью Y в точке 576, 52, тангенс угла наклона прямой 15102).