- •Методическая разработка для студентов факультета ветеринарной медицины
- •Тема I. Общая бактериологическая техника 5
- •Тема 10. Методы микробиологического исследования молока 30
- •Тема 11. Методы определения коли-титра воды и молока 32
- •Тема I. Общая бактериологическая техника
- •Оборудование и материалы
- •Методические указания
- •Техника работы с бактериологической петлей, бактериологической пробиркой, спиртовкой
- •Техника приготовления мазка-препарата, фиксирования, окрашивания
- •Тема 2. Морфология совершенных и несовершенных грибов и актиномицетов
- •Тема 3. Культивирование микроорганизмов Контрольные вопросы
- •Тема 4. Количественный учет бактерий в различных субстратах.
- •Оборудование и материалы (на одно место)
- •Посев бактерий почвы.
- •Посев бактерий воды.
- •Посев бактерий воздуха.
- •Тема 5. Культивировше аэробов и анаэробов
- •Оборудование и материалы (на I рабочее место)
- •Тема 6. Влияние ультрафиолетовых лучей на микроорганизмы
- •Тема 7. Влияние температуры на микроорганизмы Контрольные вопросы
- •Тема 8. Влияние антибиотиков и фитонцидов на микроорганизмы
- •Тема 9. Выделение и изучение чистых культур микроорганизмов Контрольные вопросы
- •Занятие 3. Определение чистоты выделенных культур и изучение их биохимических свойств.
- •Задание 4. Определение биохимических свойств и вида выделенных культур.
- •Тема 10. Методы микробиологического исследования молока
- •Оборудование и материалы (на одно рабочее место)
- •Метод посева молока на мпа в чашках Петри.
- •Проба на редуктазу
- •Определение кислотности молока титрометрическим методом.
- •Тема 11. Методы определения коли-титра воды и молока
- •Порядок исследования воды:
- •Порядок исследования молока.
- •Терминологический диктант
- •Вопросы для текущего контроля знаний
- •Тема: морфология грибов
- •Тема: культивирование микроорганизмов и стерилизация
- •Тема: методы выделения чистой культуры
- •Тема: действие биологических факторов на микроорганизмы
- •Тема: санитарно-микробиологические исследования почвы, воздуха, воды и молока
- •Тема: определение патогенности микробов. Заражение и вскрытие лабораторных животных
- •Тема: реакция иммунитета
- •630089,Новосибирск, ул. Добролюбова, 160
Тема 10. Методы микробиологического исследования молока
Контрольные вопросы
Каким путем бактерии попадают в молоко?
Какова нормальная микрофлора молока?
Каким изменениям подвергается микрофлора молока во время хранения?
Способы уничтожения бактерий в молоке.
Качественная оценка молока:
а) определение микробного числа молока (проба на редуктазу, проба с резазурином, посев молока на плотную питательную среду);
б) определение кислотности молока.
Оборудование и материалы (на одно рабочее место)
Редуктазник, или водяная баня, пробирки на 20 мл, пипетки на 10-20 мл, бюретки, выпарительная чашка, стеклянная палочка, термометр, раствор метиленовой синьки (для редуктазной пробы), раствор резазурина, раствор фенолфталеина, 0,1% раствор щелочи (едкий натр), исследуемое молоко, стерильные чашки Петри, МПА.
Методические указания
Молоко содержит большое количество питательных веществ: сахара, жиры, соли, белки. Все это является прекрасным субстратом для развития и размножения разнообразных микроорганизмов, число которых достигает иногда нескольких миллионов в 1 мл.
При бактериологическом исследовании прежде всего определяют микробное число, т.е. содержание микробов в 1 мл. Определение ведут методом посева молока на плотные питательные среды, попутно проводят и другие исследования.
Метод посева молока на мпа в чашках Петри.
В штатив поставить пять пробирок со стерильным физиологическим раствором по 9 мл в каждой. В первую пробирку прилить 1 мл исследуемого молока и хорошо взболтать пипеткой (разведение 1:10), затем этой же пипеткой взять 1 мл болтушки и перенести во вторую пробирку, хорошо перемешать (разведение 1:100), новой стерильной пипеткой взять из второй пробирки 1 мл и перенести в третью (разведение 1:1000), из третьей в четвертую (1:10000), из четвертой в пятую (1:10000), каждый раз используя стерильную пипетку. Из пятой пробирки взять 1 мл болтушки и вылить в пустую стерильную чашку Петри, залить расплавленным МПА или сывороточным агаром (расплавленным в водяной бане и остуженным до 420С) и хорошо перемешать питательную среду с внесенной болтушкой. Остудить чашку Петри, перевернуть вверх дном, подписать и поставить в термостат при температуре 30-320С на 48 часов. После образования колоний проводят их подсчет двумя способами:
Непосредственно прямым подсчетом. Если колоний немного, их считают поштучно, отмечая тушью или восковым карандашом по дну чашки Петри. При большом количестве можно разделить на секторы, подсчитать в каждом отдельно, а затем сложить.
Подсчетом с помощью камеры Вольфгюгеля, когда образуется большое количество колоний, которое определяют в среднем на 1см2 не менее чем в 10 квадратах. Затем вычисляют площадь чашки по формуле: S = πR2 и умножают на число колоний в 1 см2. Полученные результаты (число колоний в чашке Петри) умножают на разведение. Это и будет количество бактерий в 1мл молока (микробное число молока).
Проба на редуктазу
является косвенным методом определения бактериальной обсемененности молока. Находящиеся в молоке бактерии выделяют окислительно-восстановительный фермент редуктазу, которая обесцвечивает метиленовую синьку. Причем чем больше бактерий в молоке, тем больше выделяется редуктзы и тем быстрее обесцвечивается метиленовая синька.
Для выполнения работы в пробирку налить 5 мл исследуемого молока, добавить 1 каплю 1% раствора метиленовой синьки. Пробирку хорошо взболтать, поставить в водяную баню при температуре 38-400С. Моментом окончания испытания на редуктазу считают полное обесцвечивание молока. Наличие синего кольца в верхней части пробирки не принимают во внимание. По времени обесцвечивания молоко делится на классы.
Проба с резазурином сходна с предыдущей, но преимущество ее в том, что анализ проводится быстрее, чем редуктазная проба. В стерильные пробирки наливают 1 мл рабочего раствора резазурина и 10 мл исследуемого молока, хорошо перемешивают и помещают в редуктазник с температурой воды 380С. Время погружения пробирок в воду считать началом анализа. Показания снимают через 20 мин и через час.
После 20 мин пробирки с обесцвеченным молоком удаляют из редуктазника. Оставшиеся пробирки оставляют до конца анализа. В зависимости от времени обесцвечивания и изменения окраски молоко относят к одному из четырех классов.