- •Общие сведения
- •Помещение бактериологической лаборатории и оборудование рабочего места
- •Правила работы и поведения в лаборатории
- •Уборка лабораторного помещения
- •Методические указания
- •Устройство светового микроскопа
- •Оптическая часть микроскопа
- •Осветительная система
- •Наблюдательная система
- •Объективы
- •Окуляры
- •Характеристики микроскопов Увеличение микроскопа
- •Разрешающая способность микроскопа
- •Рабочее расстояние объектива
- •Иммерсия
- •Техника микроскопирования
- •Правила работы с сухими объективами.
- •Правила работы с иммерсионным объективом.
- •Микроскоп и техника микроскопирования Изучение устройства микроскопа.
- •Тема 1. Введение в микробиологию
- •1.1 Предмет и задачи микробиологии. Основные свойства микроорганизмов
- •1.2 Исторический очерк развития микробиологии. Перспективы развития и достижения современной микробиологии в народном хозяйстве, пищевой промышленности
- •Перспективы развития и достижения современной микробиологии
- •Вопросы для самопроверки
- •Литература
- •Тема 2. Принципы систематики. Структурная организация микроорганизмов
- •2.1 Принципы систематики микроорганизмов
- •2.2 Типы клеточной организации микроорганизмов
- •2.3 Строение прокариотической (бактериальной) клетки
- •2.4 Строение эукариотической клетки
- •Вопросы для самопроверки
- •Тема 3. Прокариоты (бактерии)
- •3.1 Основные и новые формы бактерий
- •3.2 Спорообразование бактерий
- •3.3 Движение бактерий
- •3.4 Размножение бактерий
- •3.5 Классификация прокариот
- •Вопросы для самопроверки
- •Тема 4. Эукариоты (грибы и дрожжи)
- •4.1 Микроскопические грибы, их особенности
- •4.2 Размножение грибов
- •1. Вегетативное размножение.
- •3. Половое размножение.
- •4.3 Классификация грибов. Характеристика наиболее важных представителей различных классов
- •1. Класс фикомицетов.
- •2. Класс аскомицетов.
- •3. Класс базидиомицетов.
- •4. Класс дейтеромицетов.
- •4.4 Дрожжи. Их формы, размеры. Размножение дрожжей. Принципы классификации дрожжей
- •1. Вегетативное размножение
- •2. Половое размножение
- •Вопросы для самопроверки
- •Тема 5. Вирусы и фаги
- •5.1 Отличительные признаки вирусов
- •5.2 Строение, размеры, формы, химический состав вирусов и фагов. Классификация вирусов
- •5.3 Репродукция вирусов. Развитие вирулентного и умеренного фагов. Понятие о лизогенной культуре
- •5.4 Распространение и роль вирусов и фагов в природе, в пищевой промышленности
- •Вопросы для самопроверки
- •Тема 6. Питание микроорганизмов
- •6.1 Способы питания микроорганизмов
- •6.2 Химический состав микробной клетки
- •6.3 Механизмы поступления питательных веществ в клетку
- •Веществ
- •6.4 Пищевые потребности и типы питания микроорганизмов
- •Вопросы для самопроверки
- •Тема 7. Конструктивный и энергетический обмен
- •7.1 Понятие о конструктивном и энергетическом обмене
- •Питательные вещества среды обитания
- •Биополимеры микробной клетки
- •Биополимеры
- •Низкомолекулярные
- •Энергия макроэргических связей
- •7.2 Энергетический метаболизм, его сущность. Макроэргические соединения. Типы фосфорилирования
- •7.3 Энергетический метаболизм хемоорганогетеротрофов, использующих процессы брожения
- •Углеводы
- •7.4 Энергетический метаболизм хемоорганогетеротрофов, использующих процесс дыхания
- •Вопросы для самопроверки
- •Тема 8. Культивирование и рост микроорганизмов
- •Понятие о чистых и накопительных культурах микроорганизмов
- •8.2 Способы культивирования микроорганизмов
- •8.3 Закономерности роста статической и непрерывной культуры
- •Вопросы для самопроверки
- •9.2 Влияние физических факторов на микроорганизмы
- •9.3 Влияние физико-химических факторов на микроорганизмы
- •9.4 Влияние химических факторов на микроорганизмы
- •9.5 Взаимоотношения между микроорганизмами. Влияние антибиотиков на микроорганизмы
- •9.6 Возможные пути регулирования жизнедеятельности микроорганизмов при хранении пищевых продуктов
- •Вопросы для самопроверки
- •Тема 10. Генетика микроорганизмов
- •10.1 Генетика как наука. Понятие о наследственности и изменчивости
- •10.2 Генотип и фенотип микроорганизмов
- •10.3 Формы изменчивости микроорганизмов
- •10.4 Практическое значение изменчивости микроорганизмов
- •Вопросы для самопроверки
- •Тема 11. Биохимические процессы, вызываемые микроорганизмами
- •11.1 Спиртовое брожение. Химизм, условия проведения процесса. Возбудители. Практическое использование спиртового брожения
- •11.2 Молочнокислое брожение: гомо- и гетероферментативное. Химизм процесса. Характеристика молочнокислых бактерий. Практическое значение молочнокислого брожения
- •11.3 Пропионовокислое брожение. Химизм процесса, возбудители. Практическое использование пропионовокислого брожения
- •11.4 Маслянокислое брожение. Химизм процесса. Возбудители. Практическое использование и роль в процессах порчи пищевых продуктов
- •11.5 Уксуснокислое брожение. Химизм процесса. Возбудители. Практическое использование и роль в процессах порчи пищевых продуктов
- •11.6 Окисление жиров и высших жирных кислот микроорганизмами. Микроорганизмы - возбудители порчи жиров
- •11.7 Гнилостные процессы. Понятие об аэробном и анаэробном гниении. Возбудители. Роль гнилостных процессов в природе, в пищевой промышленности
- •Вопросы для самопроверки
- •Пищевые заболевания
- •12.2 Патогенные и условно-патогенные микроорганизмы. Их основные свойства. Химический состав и свойства микробных токсинов
- •12.3 Инфекции. Источники и пути передачи инфекции. Виды пищевых инфекций и характеристика возбудителей. Профилактика пищевых инфекций
- •12.4 Понятие об иммунитете. Виды иммунитета. Вакцины и сыворотки
- •Иммунитет
- •Инфекционный
- •(Трансплантационный)
- •12.5 Пищевые отравления: токсикоинфекции и интоксикации. Характеристика возбудителей пищевых отравлений
- •12.6 Микробиологический контроль качества пищевых
- •Вопросы для самопроверки
- •Тема 13. Распространение микроорганизмов в природе
- •13.1 Биосфера и распространение микроорганизмов в природе. Влияние на окружающую среду антропогенных факторов
- •13.2 Микрофлора почвы. Ее роль в инфицировании пищевых продуктов. Санитарная оценка почвы
- •13.3 Микрофлора воздуха. Оценка качества воздуха по микробиологическим показателям. Методы очистки и дезинфекции воздуха
- •13.4 Микрофлора воды. Санитарная оценка воды по микробиологическим показателям. Способы очистки и дезинфекции воды
- •1. Предмет и задачи микробиологии
- •2. Систематика и номенклатура микроорганизмов
- •3. Питательные среды и методы выделения чистых культур
- •4. Морфология бактерий, основные органы
- •5. Морфология бактерий, дополнительные органеллы
- •6. Рост, размножение, питание бактерий
- •7. Виды метаболизма бактерий
- •8. Генетика макроорганизмов
- •9. Бактериофаги
- •10. Морфология вирусов, типы взаимодействия вируса с клеткой
- •11. Культивирование вирусов. Противовирусный иммунитет
- •12. Общая характеристика формы и периоды инфекции
- •13. Возбудители инфекций и их свойства
- •14. Нормальная микрофлора человека
- •15. Дисбактериоз
- •16. Коассификация химиотерапевтических препаратов
- •17. Основные осложнения химиотерапии
- •1. Осложнения со стороны макроорганизма:
- •18. Предмет иммунологии. Виды иммунитета
- •19. Иммуная система. Центральные и периферические органы иммунной системы
- •20. Иммунный ответ. Понятие формы
- •21. Классификации и типы антигенов
- •22. Антитела. Классификации и свойства инов
- •23. Иммунодефицитные состояния
- •24. Аллергия, классификация аллергенов, особенности инфекционной аллернии
- •25. Аутоиммунные процессы
- •26. Методы иммунодиагностики
- •27. Иммунопрофилактика, иммунотерапия, иммунокоррекция
- •28. Общая характеристика и классификация семейства энтеробактерий
- •29. Род эшерихия, род шигеллы. Их характеристики
- •30. Род сальмонеллы, род иерсинии. Их характеристики
- •31. Пищевые токсикоинфекции и пищевые токсикозы
- •32. Чума. Сибирская язва
- •33. Туляремия. Бруцеллез
- •34. Стафилококки. Стрептококки. Их характеристики
- •35. Менингококки. Гонококки. Их характеристики
- •36. Гемофильная палочка. Синегнойная палочка
- •37. Клебсиеллы. Протей
- •38. Дифтерия. Морфология и культуральные свойства. Патогенез дифтерии
- •39. Диагностика. Профилактика. Лечение дифтерии
- •40. Туберкулез
- •41. Туберкулез. Диагностика. Профилактика. Лечение
- •42. Группа рикетсий
- •43. Риккетсиозы
- •44. Вирусы гриппа
- •45. Возбудители орви
- •46. Возбудители орви (Аденовирусы)
- •47. Возбудители орви (Риновирусы. Реовирусы)
- •48. Вирусы кори и паротита
- •49. Вирус герпеса. Вирус краснухи
- •50. Вирус полиомиелита, есно-вирусы, вирусы Коксаки
- •52. Вич. Эпидемиология. Диагностика. Лечение
- •53. Вирус бешенства. Флавивирусы
- •54. Вирус гепатита а и в
- •55. Другие возбудители вирусных гепатитов
- •56. Плазмодии малярии
- •Микроскопия микроорганизмов в окрашенном виде
- •Окраска микроорганизмов
- •Общие сведения о методе
- •Витальный способ окраски
- •Поствитальные способы окраски
- •Метод Грама
- •Использование в диагностике
- •Техника проведения окраски
- •Подготовка материала для окраски
- •Фиксация
- •Физический способ фиксации
- •Химический способ фиксации
- •Процесс окрашивания мазков
- •Техника окраски бактерий в гистологических срезах по Граму-Вейгерту
- •Структура бактериальной клетки
- •Клеточная стенка
- •Цитоплазматическая мембрана
- •Цитоплазма
- •Нуклеоид
- •Капсула, микрокапсула, слизь
- •Жгутики
- •Структура бактериальной клетки
- •Клеточная стенка
- •Цитоплазматическая мембрана
- •Цитоплазма
- •Нуклеоид
- •Капсула, микрокапсула, слизь
- •Жгутики
- •Кислотоустойчивые бактерии
Правила работы с иммерсионным объективом.
На препарат (лучше фиксированный и окрашенный) наносят небольшую каплю иммерсионного масла. Поворачивают револьвер и устанавливают по центральной оптической оси иммерсионный объектив с увеличением 100×. Конденсор поднимают вверх до упора. Ирисовую диафрагму конденсора открывают полностью. Глядя сбоку, макрометрическим винтом опускают тубус до погружения объектива в масло, почти до соприкосновения линзы с предметным стеклом препарата. Это нужно проводить очень осторожно, чтобы фронтальная линза не сместилась и не получила повреждения. Смотрят в окуляр, очень медленно вращают макрометрический винт на себя и, не отрывая объектив от масла, приподнимают тубус до появления контуров объекта. При этом следует помнить, что свободное рабочее расстояние в иммерсионном объективе равно 0,1 – 0,15 мм. Затем точную фокусировку производят макрометрическим винтом. Рассматривают в препарате несколько полей зрения, передвигая столик боковыми винтами. По окончании работы с иммерсионным объективом поднимают тубус, снимают препарат и осторожно протирают фронтальную линзу объектива сначала сухой мягкой хлопчатобумажной салфеткой, затем той же салфеткой, но слегка смоченной чистым бензином. Оставлять масло на поверхности линзы нельзя, так как оно способствует оседанию пыли и может привести со временем к повреждению оптики микроскопа. Препарат освобождают от масла сначала кусочком фильтровальной бумаги, затем обрабатывают стекло бензином или ксилолом.
Микроскоп и техника микроскопирования Изучение устройства микроскопа.
Ознакомление с микроскопированием мазков.
Для изучения морфологии микроорганизмов используют микроскопы. Биологический микроскоп (рис. 1) представляет собой оптический прибор, увеличивающий предметы в 1000-15000 раз, и состоит из механической, оптической и осветительной систем.
К механической системе относятся подковообразная ножка, тубусодержатель, тубус, предметный столик, винты. Оптическая система включает объективы и окуляр. Осветительная система состоит из конденсора с диафрагмой и зеркала.
Тубусодержатель и подковообразное основание (ножка) соединены между собой подвижно шарниром. Тубус - зрительная труба микроскопа. В верхнюю часть тубуса вставлен окуляр, в нижнюю - вращающийся вокруг своей оси револьвер, в который ввинчены объективы. Тубус передвигается вверх и вниз при помощи макрометрического и микрометрического винтов. Один оборот микрометрического винта передвигает тубус на 0,1 мм. Поэтому микровинтом пользуются для более точной наводки, а для предварительной - макровинтом. Предметный столик предназначен для размещения исследуемого материала. Столик можно передвигать в различных направлениях с помощью винтов.
Конденсор состоит из линз, собирающих отраженные от зеркала лучи в сильный световой пучок, и направляет его через отверстие предметного столика на препарат. При определении подвижности неокрашенных препаратов конденсор должен быть несколько опущен.
Диафрагма находится между зеркалом и конденсором и служит для регулирования количества света, поступающего в конденсор.
Объектив состоит из системы линз, заключенных в металлическую оправу. Передняя линза служит для увеличения предмета, остальные - для коррекции изображения. Объектив дает действительное, увеличенное, обратное изображение.
Современные биологические микроскопы имеют не менее трех объективов. Сухие объективы увеличивают в 8 и 40 раз (между объективами и препаратом находится слой воздуха), иммерсионные - в 90 раз. На оправу каждого объектива нанесена цифра, указывающая увеличение. При микроскопии окрашенных препаратов пользуются иммерсионным объективом, погружая переднюю линзу в каплю кедрового масла, нанесенного на предметное стекло с окрашенными бактериями. Благодаря этому все лучи от осветителя, не изменяя своего направления, попадают в объектив и получается четкое изображение.
Окуляр состоит из верхней - глазной и нижней - собирательной линз. На верхней части окуляра имеется цифра, указывающая увеличение (7, 10, 15). Окуляр увеличивает только изображение. Общее увеличение микроскопа складывается из произведения увеличения объектива на увеличение окуляра.
Принцип действия люминесцентного микроскопа основан на способности отдельных объектов и красителей светиться при освещении их ультрафиолетовыми лучами. Люминесцентные микроскопы снабжены источником ультрафиолетового света и набором светофильтров. У бактерий очень слабо выражена собственная флюоресценция. Поэтому необходимо их обработать флюоресцирующими красками (флюорохромами), которые окрашивают структурные' элементы клетки в различные цвета.
Принцип действия электронного микроскопа основан на использовании вместо световых лучей потока электронов, получаемых из электронной пушки. Все оптические линзы заменены электромагнитными катушками, создающими электромагнитное поле, которое управляет движением электронов. Электронный микроскоп увеличивает предмет в 50-200 тыс. раз. Препараты для исследования готовят на тонких пленках коллодия. На пути потока электронов ставят исследуемый объект, который отражается на люминесцирующем экране. Изображение объекта можно сфотографировать аппаратом, вмонтированным в микроскоп. С помощью электронной микроскопии можно детально изучать строение бактерий, вирусов, бактериофага.
Рабочий стол для микроскопирования препаратов желательно размещать у окна. Микроскоп устанавливают на рабочий стол тубусодержателем к себе примерно на 7-10 см от края. Вначале проводят настройку освещения, для чего зеркалом направляют пучок света от источника освещения в объектив с увеличением в 8 раз.
Рис.1
При правильной настройке освещения поле зрения микроскопа должно быть в виде равномерно освещенного круга. После этого на предметный столик помещают исследуемый препарат, который закрепляют клеммами и рассматривают под микроскопом, пользуясь объективами с увеличением в 8, 40 или 90 раз.
При работе с объективами 8 и 40 тубус микроскопа осторожно опускают с помощью макрометрического винта, приближают объектив почти вплотную к препарату, но не касаются его. Наблюдают в окуляр, слегка приподнимая тубус тем же винтом до получения изображения. С помощью микрометрического винта проводят точную установку объектива до получения четкого изображения предмета.
При работе с иммерсионным объективом (увеличение в 90 раз) на препарат предварительно наносят каплю иммерсионного масла, а затем под контролем глаза макрометрическим винтом опускают объектив в каплю масла. Точную установку препарата в фокус объектива проводят с помощью микрометрического винта, который можно вращать на пол-оборота.
По окончании работы исследуемый материал снимают с предметного столика. Мягкой тканью, смоченной в спирте или эфире, удаляют иммерсионное масло с объектива, слегка опускают конденсор, устанавливают объектив и убирают микроскоп в футляр или хранят его под стеклянным колпаком, предохраняющим его от пыли и сырости.