Классификация а/б.

По происхождению:

• а/б бактерий – грамитидин, полимексин;

• из актиномицет – тетрациклин, стрептомицин;

• из грибов – пенициллин, цефалоспорин;

• из растений – омицин, рафанин.

По спектру антимикробной активности:

• действующие на G+ бактерии (стафилококки, стрептококки);

• действующие на G- (гонококк, менингококк);

• а/б на G- и G+ (аминогликозиды – гентамицин, кана-, сизо-, нео-);

• а/б широкого спектра д-я (рикетсии, хламидии, спирохеты, простейшие);

• хенолоны;

• действующие на грибы (нистатин, леворин, ПАСК, рифампицин);

• противоопухолевые а/б (рубомицин).

Молекулярный мех-м д-я а/б: 1) нарушение синтеза КС – циклосерин блокирует ферменты, превращающие L-аланин в D-аланин; пенициллин ингибирует процесс сшивок межпептидных связей, пептидогликана (муреина), вследствие блока фермента транспептидазы. Все пенициллины обладают ядром, которое состоит из четырехчленного бета-лактамного кольца, соединенного с пятичленным тиозелединовым кольцом и отличается др. от др. радикалом в боковой цепи. 2) ингибиторы ЦПМ: а) а/б, нарушающие структуру ЦПМ – полимексины; б) а/б, переносчики специфических ионов, вызывают аномальное накопление ионов внутри клетки, но обладают низкой специфичностью, т.е. действуют и на мембраны клеток макроорганизма – местная терапия (нистатин); 3) ингибиторы синтеза белка: а) действующие на 30S субъединицы рибосом, б) действующие на 50S (левомицетин, макролиды); 4) ингибиторы репликации нуклеиновых кислот: а) рубомицин – блокирует матричные ДНК в системах ДНК-полимераз и ДНК-зависимых РНК-полимераз; б) блеомицин – разрыв полинуклеидной цепи; в) новобиоцинар – синтез ДНК, вследствие угнетения ДНК-полимеразы и блокирования синтеза РНК; г) хинолоны (стафилококк, гонококк, анаэробы, клостридии) – ципробай, циклофлоксацин – их точка приложения ДНК-пираза, которая вызывает суперспирализацию ДНК.

Резистентность м/о: 1) природная устойчивость – опред-ся св-вами данного вида м/о и а/б (микоплазма и пенициллин); 2) приобретенная уст-ть – может быть первичной и вторичной (она возникает, когда чувствит-ть к данному а/б в популяции м/о обнаруживаются устойчивые варианты, эта устойчивость осована на мутации генома); 3) трансмиссивная лекарственная устойчивость детерминируется R-плазмидой. Причины резистентности: уменьшение проницаемости клеточной мембраны; увеличение содержания фермента, ингибирующего данный а/б; полное исчезновение мишений (L-формы бактерий); модификация чувствительного к данному а/б участка (ацетилирование, фосфорилирование); понижение потребности клетки в продукте.

Бактериофаги (б/ф).

История – в 1917 г д”Эрелль открыл феномен бактериофагии. Б\ф представляет собой вирус бактерий, который размножается внутри бактериальной клетки вследствие чего она лизируется и в окружающую среду выходят частицы – потомки вируса.

Структура фага – большинство имеет сперматозоидную форму. Они состоят из головки (нуклеиновая кислота) и отростка. Размеры от 20 до 200 нм. Наиболее изучены фаги коли-дизентерийной группы (они составляют Т-группу, включают 7 представителей).

Хим-ий состав. Состоят из нуклеиновой к-ты и белка. Большинство содержат ДНК, в составе которого находятся необычные азотистые основания – 5-оксиметилцитозин, 5-метилурацил. Касид головки построен из полипептидных субъединиц, располагающихся в головке по кубическому типу симметрии, а в отростке – по спиральному. Внутри головки имеется внутренний белок.

Взаимод-е с бактериальной клеткой. Процесс протекает по типу продуктивной инф-ции и заканчивается лизисом клетки. По хар-ру взаимод-я фаги делятся на вирулентные и умеренные. Стадии у вирулентного взаимод-я: 1) адсорбция, 2) проникновение, 3) биосинтез фаговой и нуклеиновой к-ты и белков капсида, 4) морфогенез фага, 5) выход фаговых частиц. Фаговая конверсия – это приобретение клеткой в рез-те внедрения вирусной ДНК, новых св-в (пример: дифтерийная палочка не патогенна, т.к. не имеет токсигенов и соответственно не продуцирует дифтерийный токсин). Токсигены попадают в клетку по средствам фага. Умеренные фаги присутствуют в клетке в скрытом виде – профаг – такой тип взаимод-я назыв-ся лизогения.

Обнаружение и титрование фага: для получения вирулентного фага готовят фильтрат, пропуская исходный мат-л через бак. фильтры, затем засевают вместе с соответствующей бак. культурой в бульон и инкубируют при 37 град.С в течении 18-24 часов. После лизиса в культуре оставшиеся бактериальные клетки удалят центрифугированием. Наличие фага определяется качественными и количественными методами. Метод агаровых слоев Грация: одна фаговая частица – одна негативная колония, метод позволяет количественно определить: негативная колония содержит фаголизат, т.е. разрушается бактериальная клетка и фаговые частицы. В практике фаги применяют для: 1) фаготипирования бактерий, т.е. определение фаготипа по лизису штаммов бактерий одного и того же вида типа специфическими фагами (проводится для энтеробактерий и ставится с эпидемической целью). Бактерии, идущие из одного источника имеют одинаковый фаготип, записывают чувствительные ячейки: 7/82/74; 2) для фагодифференцирования бактериальных культур с целью установления их видовой принадлежности; 3) для фагодиагностики; 4) для фагопрофилактики.

Выделение фага из окружающей среды. Негативные колонии. Индикация: исследуемый мат-л вносят в пробирку с МПБ, добавляют бактерии к которым хотят получить бактериофаг. Инкубация 37 град.С, затем путем центрифугирования или фильтрации, содержимое пробирки освобождают от бактерий. Фильтрат засеивают на чашки с агаром с бактериями, инкубация при 37 град.С. На фоне роста бактериальной культуры наблюдаются стерильные пятна негативные колонии фага. Вирулентные фаги дают полностью прозрачные негативные колонии; умеренные фаги – колонии с прозрачной периферией и мутным центром (рост лизогенных бактерий). Выделение фага – мат-л со стерильного пятна петлей переносят в пробирку с МПБ + чувствительная бактериальная культ-ра. Инкубация и получение прозрачного фаголизата, освобождение от бактерий (центрифугирование + хлороформ).