Микроскопическое изучение живых (нативных) и окрашенных микробов.

Метод микроскопии с иммерсионной системой – предельная разрешающая способность иммерсионного микроскопа 0,2 мкм; разрешающая способность – это минимальная площадь между двумя точками, при которой они восприним-ся раздельно. Иммерсионная микроскопия увеличивает разрешающую способность микроскопа. Техника:

Метод фазово-контрастной микроскопии - дает возможность увидеть прозрачные объекты, они приобретают высокую контрастность изображения, которая м.б позитивной или негативной. Используют обычный микроскоп + дополнительное фазово-контрастное устройство. Техника: 1) в световом микроскопе устанавливают необходимые объектив и окуляр; 2) меняют обычный конденсор на фазово-контрастный с диафрагмой в положении «О»; 3) на предметный столик помещают препарат и фокусируют его; 4) регулируют освещение до получения четкого изображения нитей лампы на диафрагме конденсора, после чего диафрагму конденсора полностью открывают; 5) заменяют окуляр вспомогательным микроскопом, положение тубуса остается прежним, и перемещением окуляра фокусируют фазовое кольцо объектива; 6) движением револьвера подбирают соответствующую объективу диафрагму и, наблюдая во вспомогательный микроскоп, совмещают при помощи центрировочных винтов изображения колец фазовой пластинки (темное) и кольцевой диафрагмы (светлое); 7) вспомогательный микроскоп заменяют окуляром и рассматривают препарат, к-рым чаще всего является тонкий нефиксированный и неокрашенный мазок взвеси бактерий на предметном стекле или агаровая пластинка с ростом микробов.

В затемненном поле - для изучения подвижности (спирохет), готовят пр-ты в виде «висячей» капли, «раздавленной» капли и рассматривают при опущенном конденсоре. Темнопольная микроскопия – используется для изучения подвижности м/о; основана на явлении дифракции света при сильном боковом освещении взвешанных в жидкости мельчайших частиц (эффект Тиндаля). Эффект достигается с пом. параболоид – конденсора. Исп-ся метод «раздавленной» капли.

Простые методы окраски – фиксированный мазок окрасить каким-либо красителем, например, фуксином водным (1-2 мин) или мителеновым синим (3-5 мин), промыть водой, высушить, микроскопировать.

Сложные методы окраски – последовательно наносить на пр-т определенные красители, различающиеся по хим-му составу и цвету; протравы (например в методе Циля-Нильсена протрава: фенол в составе фуксина), спирты, кислоту и др. – это позволяет выявить определенные структуры клеток и дифференцировать одни виды м/о от др.

Окраска по методу Грама является самым универсальным из сложных методов окраски. Окраска положена в основу дифференциации бактерий и отражает способность клеток воспринимать и удерживать внутри клетки красящий комплекс генцианового фиолетового и йода либо терять его после обработки спиртом. Способность бактерий удерживать комплекс генцианвиолет с йодом зависит от стр. клеточной стенки, имеющей существенные различия у гр. «-» и гр. «+» бактерий. Выделяют грамположительные (Bacillus, Clostridium, Staphylococcus, Streptococcus, Lactobacillus, Sarcina, etc.) и грамотрицательные (Escherichia, Pseudomonas, Erwinia, Neisseria, Rickettsia, etc.) формы бактерий.

Окраска кислотоустойчивых бактерий по методу Циля-Нильсена – для дифференцирования кислотоустойчивых бактерий от некислотоустойчивых. Отражает особенности некоторых микобактерий и нокардий. Эти бактерии не окрашиваются обычными методами, однако если при окрашивании используются фенол, детергенты или нагревание, то окрашенные клетки получить удается. В этом случае окраска клеток сохраняется даже при последующем обесцвечивании в смеси кислота-спирт. Кислотоустойчивость обусловлена большим содержанием в клетке сложных липидов, в частности, миколовых кислот.

Метод Романовского-Гимзе – выявление нуклеоида бактерий.

Метод Гинса – Бурри (метод негативного контрастирования). Для выявления капсул у чистых культур капсульных бактерий.

Метод Ожешки – для окраски спор бактерий и основан на их кислотоустойчивости.

Окраска гранул волютина по Нейссеру – для выявления цитоплазматических включений волютина.

ФИЗИОЛОГИЯ М/О. ХИМ-ИЙ СОСТАВ. ФАКТОРЫ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ, ВЛИЯЮЩИЕ НА МИКРОБНЫЕ КЛ-КИ.

АНТИБИОТИКИ.

А/б – это специфические пр-ты жизнедеятельности м/о или их модификации, обладающие высокой физиологической активностью к определенным группам м/о; они задерживают их рост, жизнедеятельность. Обладают высокой биоактивностью, а также высокой избирательностью антимикробного эффекта.

История открытия а/б. Открыты в 1920 г Флемингом; в 40-х годах Флори и Чейн получили чистый а/б; в 43 г в СССР и США было налажено производство пенициллина. Природные а/б получают биосинтетическим путем. М/о выращивают в жидкой питательной среде. Полусинтетические а/б – это измененные хим-ие структуры природного а/б – этим удается расширить антимикробный спектр.