124. Методы паразитологического анализа.

Для обнаружения гельминтов, их фрагментов (проглоттид, сколексов), личинок и яиц исследуют кал, мочу, мокроту, дуоденальное содержимое, кровь. Большая часть гельминтов паразитирует у человека в кишечнике или органах, связанных с ним протоками, поэтому наиболее распространенным является исследование испражнений (копрологическое исследование). Существуют макроскопические и микроскопические методы обнаружения паразитических червей или их частей (гельминтоскопия) и яиц гельминтов (гельминтоовоскопия). При копрологическом анализе необходимо соблюдать правила личной гигиены, обжигать петли и стеклянные палочки, стерилизовать посуду, стекла и инструментарий, содержать в чистоте рабочее _{место. Макроскопические методы. Осмотр испражнений.} Испражнения должны быть доставлены не позже суток после их выделения. При нарушении этого правила диагноз поставить невозможно в связи с разрушением яиц и личинок. Для повышения достоверности исследования анализы нужно повторять несколько раз ежедневно или с промежутками в 1-3 дня. Испражнения доставляют в лабораторию в чистой стеклянной посуде или в спичечных коробках. На каждой коробке должна быть этикетка с указанием фамилии, имени, возраста и места жительства обследуемого. Небольшие порции испражнений перемешиваю с водой в плоской ванночке или в чашке Петри. Их просматривают при хорошем освещении на темном фоне, при необходимости пользуясь лупой. Пинцетом или пипеткой извлекают все подозрительные образования, переносят на предметное стекло в каплю разведенного глицерина или изотонического раствора хлорида натрия. Метод отстаивания. Всю исследуемую порцию испражнений размешивают с водой и дают отстояться в стеклянном цилиндре, затем осторожно сливают верхний слой жидкости. Так повторяют несколько раз. После того, как жидкость станет прозрачной, ее сливают, а осадок просматривают в стеклянной ванночке или чашке Петри. Метод позволяет обнаружить гельминтов, их сколексы, обрывки стробилы, проглоттиды и диагностировать энтеробиоз, тениоз и тениаринхоз. Микроскопические методы. Нативный мазок. Небольшой кусочек испражнений переносят палочкой на предметное стекло в каплю 50% водного раствора глицерина и растирают до получения равномерного прозрачного мазка. На одном стекле готовят 2 мазка. При небольшом количестве яиц в испражнениях их не всегда удается выявить, поэтому применение только этого метода не является полноценным и достоверным. Толстый мазок с целлофаном (метод Като). Принцип метода: яйца гельминтов обнаруживают в толстом мазке испражнений, просветленном глицерином и подкрашенном малахитовой зеленью. Ход исследования. 100 мг испражнений наносят на предметное стекло, покрывают обработанной смесью (6 мл 3% водного раствора малахитовой зелени, 500 мл глицерина и 500 мл 6% водного раствора фенола) пластинкой целлофана и придавливают резиновой пробкой так, чтобы испражнения не растекалисьиз-под целлофана. Через час проводят микроскопирование при малом или большом увеличении. Метод выявляет яйца аскариды, власоглава, лентеца, трематод, тениид. Метод закручивания по Шульману. . Круговыми движениями, не касаясь стенок сосуда, стеклянной палочкой тщательно размешивают 2-3 г испражнений с 5-тикратным объемом физиологического раствора или воды. Яйца и личинки гельминтов скапливаются в центре. После окончания перемешивания каплю на конце палочки быстро переносят на предметное стекло, закрывают ее покровным стеклом и исследуют под микроскопом. Этим методом выявляются личинки анкилостомы, некатора, угрицы. Метод липкой ленты используется для диагностики энтеробиоза. Кусочек липкой прозрачной полиэтиленовой ленты длиной 4-5 см липким слоем прикладывают через анальное отверстие к перианальным складкам, сразу же снимают и приклеивают на предметное стекло. Полученные препараты изучают под микроскопом. Исследования проводят в ранние утренние часы. Методы обогащения основаны на разности удельного веса яиц и применяемого раствора. Методы осаждения (седиментации): если удельный вес яиц больше удельного веса жидкости, то яйца концентрируются в осадке, который исследуют под микроскопом. Применяют для обнаружения яиц трематод. Метод Горячева используется для диагностики описторхоза. В цилиндр диаметром 2-3 см наливают 70-100 мл насыщенного раствора хлорида натрия. Отдельно тщательно размешивают 0,5 г испражнений в 20-25 мл воды и осторожно фильтруют через воронку с двумя слоями марли в цилиндр на солевой раствор, избегая перемешивания. Яйца кошачьего сосальщика медленно оседают на дно цилиндра. Через 2-3 часа верхний слой с каломотсасывают пипеткой, а оставшийся солевой раствор центрифугируют. Осадок пипеткой переносят на предметное стекло, покрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом. Метод применим и для диагностики других трематодозов. Метод Красильникова. Под действием поверхностно-активных веществ, входящих в состав моющих средств (детергентов), яйца гельминтов концентрируются в осадке. Готовят 1% раствор стирального порошка "Лотос". 10 г высушенного в сушильном шкафу при 100^оС в течение 1-2 часов порошка растворяют в 1 л водопроводной воды. В стеклянный сосуд, емкостью 30-50 мл, наливают 20-30 мл приготовленного раствора детергента, туда же помещают небольшую порцию испражнений и перемешивают. Соотношение испражнений и раствора должно быть примерно 1:20. Испражнения должны находиться в растворе не менее суток. На дне образуется осадок из 2-3-х слоев. Нижний слой состоит из грубых тяжелых частиц, в среднем слое находятся яйца гельминтов, верхний слой представляетсобой беловато-серые хлопья. Пастеровской или глазной пипеткой набирают 2-3 капли жидкости из среднего слоя и переносят на предметное стекло. На одном стекле готовят 2 препарата, накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом. Метод позволяет обнаружить яйца всех видов гельминтов, выделяемые с испражнениями. Методы всплывания (флотации): если удельный вес яиц меньше удельного веса жидкости, то яйца всплывают на поверхность жидкости, и тогда исследуют пленку. Применяются для обнаружения яиц анкилостомид, власоглава и карликового цепня. Метод Фюллеборна. Используют насыщенный раствор NaCl (растворяют 400 г NaCl в 1 л воды при кипячении). Относительная плотность раствора 1,18-1,22. В банку объемом 30-50 мл помещают 2-3 г испражнений и при помешивании палочкой доливают почти доверху насыщенный раствор хлорида натрия. Полоской бумаги быстро удаляют всплывшие крупные частицы. Через 45-60 мин. отстаивания проволочной петлей снимают поверхностную пленку и переносят ее на предметное стекло в каплю 50% водного раствора глицерина. Так как яйца трематод и тениид всплывают плохо и могут остаться в осадке, дополнительно просматривают несколько препаратов из осадка, набирая его глазной пипеткой на 2 предметных стекла. Хорошо всплывают яйца нематод (за исключением неоплодотворенных яиц аскарид), карликового цепня и лентеца. Достоинства метода: дешевизна и доступность; недостатки– необходимость просмотра препаратов из поверхностной пленки и осадка, а также длительность отстаивания. Метод Калантарян. Испражнения смешивают с насыщенным раствором азотнокислого натрия (1 кг селитры заливают 1 литром дистиллированной воды и кипятят до полного растворения) в соотношении 1:20. Удельный вес раствора около 1,4. Достоинства метода: быстро всплывают и обнаруживаются в поверх- ностной пленке яйца большинства гельминтов, что исключает необходимость исследования осадка. Не всплывают онкосферы тениид и яйца трематод. Для диагностики тканевых гельминтозов (трихинеллез, цистицеркоз и др.) применяются иммунологические методы: реакция кольцепреципитации (РКП), реакция связывания комплемента (РСК), реакция непрямой гемагглютинации (РНГА), реакция прямой гемагглютинации (РПГА), реакция энзимомеченных антител (РЭМА), реакция преципитации в агаре и др. Для диагностики паразитарных заболеваний берут 3-5 мл крови. Получают сыворотку и разводят ее изотоническим раствором хлорида натрия от 1: 50 – 1: 100 до 1:800 – 1: 1600. В качестве антигенов используют диагностикумы, с которыми безопасно работать. В пробирки с разными разведениями сыворотки добавляют диагностикумы (антигены). Если в сыворотке крови имеется достаточное количество антител (диагностическое значение имеют титры 1:100 – 1:200 и выше), то они взаимодействуют с антигенами с образованием комплекса антиген-антитело, который виден в виде осадка, кольца помутнения и др., что и подтверждает клинический диагноз. Серологические реакции (serum – сыворотка) становятся положительными на 3-4 неделях заболевания. Метод биопсии мышц для диагностики трихинеллеза. Для анализа чаще берут кусочек (несколько граммов) дельтовидной или икроножной мышцы в асептических условиях. Мышцу измельчают ножницами и помещают междудвумя толстыми стеклами (компрессорий), слегка раздавливают и просматривают на малом увеличении микроскопа. Внутри мышечных волокон обнаруживаются спирально свернутые личинки трихинелл в округлых или лимонообразных капсулах. Метод переваривания мышц для диагностики трихинеллеза является более эффективным. Мелконарезанные мышцы заливают искусственным желудочным соком (1% раствор пепсина в 0,7% растворе соляной кислоты) и помещают в термостат при 37^оС на 12-16 часов. Объем желудочного сока должен превышать навеску мышц в 15-20 раз. После переваривания на предметное стекло пипеткой переносят осадок и рассматривают его под микроскопом. В осадке обнаруживаются свободные от капсул личинки трихинелл. Метод мазка крови и толстой капли для диагностики филяриатозов. Кровь берут в асептических условиях из пальца преимущественно ночью. Для приготовления мазка каплю крови помещают на предметное стекло и краем второго стекла размазывают по стеклу. Мазок фиксируют метиловым спиртом и окрашивают по Романовскому-Гимза. Для приготовления толстой капли берут несколько капель крови на предметное стекло и углом другого стекла круговыми движениями размазывают до получения пятна, диаметром около 1,5 см. После высушивания эритроциты гемолизируют дистиллированной водой и окрашивают по Романовскому-Гимза. Микрофилярии выявляются в виде _{тонких извитых нитей, окрашенных в голубой цвет.}

125. Тип "Членистоногие". Классификация. Характерные черты организации. Медицинское значение. Членистоно́гие (лат. Arthropoda) — тип первичноротых животных, включающий насекомых, ракообразных, паукообразных и многоножек.. Количество видов членистоногих превышает количество видов всех остальных животных вместе взятых.

Характерные черты организации:Основная особенность представителей данной группы животных организмов — наличие хитинового наружного скелета. Тело членистоногих сегментировано и разделено на голову, грудь и брюшко. Полностью или частично покрыто хитином. Растут только во время линьки. Конечности членистые; выполняют функции передвижения, дыхания, защиты, захвата и пр. Голова и грудь у некоторых сливается в головогрудь. Пищеварительная система дифференцирована. Ротовой аппарат образован видоизменёнными конечностями. Дыхание жаберное (у ракообразных), лёгочное или трахейное (у паукообразных и насекомых). Кровеносная система незамкнута. Нервная система состоит из головного мозга и брюшной нервной цепочки. Многие членистоногие имеют хорошо развитые органы чувств. Органы выделения представлены метанефридиями и мальпигиевыми сосудами. В основном раздельнополы. Случаи гермафродитизма редки. Развитие протекает с полным или неполным превращением. При неполном метаморфозе у насекомых нет стадии куколки.

Классификация: кольчатые черви — ближайшие родственники как членистоногих, так и онихофоров, основываясь на одинаковом количестве сегментов.  Основана на гипотезе о полифилетическом происхождении членистоногих. В связи с этим, тип членистоногих здесь разбивается на три самостоятельных типа.

Тип Хелицеровые Тип Ракообразные Тип Трахейные

Подтип Онихофоры

Подтип Неполноусые