- •1.Биотехнология как межотраслевая область научно-практических знаний.
- •2. Связи биотехнологии с рядом современных отраслей промышленных производств.
- •3.Основные факторы, обусловившие стимул в развитии современной биотехнологии.
- •4. Связь биотехнологии с биологическими, химическими, техническими и другими науками.
- •5. Практические задачи биотехнологии
- •6. Исторические этапы развития биотехнологии
- •7 Переход от эмпирического к научному подходу в решении б.Т. Задач
- •8)Экономические аспекты биотехнологии:
- •9. Ключевая роль биотехнологии в социально-экономическом развитии отдельных государств и в целом.
- •10. Области применения достижений биотехнологии
- •11.Продукты биотехнологических производств
- •12. Обобщенная схема биотехнологического производства.
- •14. Пути повышения рентабельности биотенологических производств.
- •15 Мелкомасштабная и крупномасштабная биотехн.
- •18. Способы очистки сточных вод.
- •19.Характеристика параметров “клеточных” процессов.
- •20. Характеристика параметров “метаболитических процессов”.
- •23 Микроорганизмы - основные объекты биотехнологии
- •24)Преимущества микроорганизмов перед другими объектами в решении современных биотехнологических задач:
- •25.Характеристика объектов биотехнологии.
- •26. Особенности использования эукариотических клеток в биотехнологическом производстве
- •27.Принципы подбора биотехнологических объектов.
- •28. Промышленные, модельные и базовые микроорганизмы.
- •29. Требования к продуцентам, используемых в биотехнологическом производстве.
- •30. Способы улучшения продуцентов
- •31) Уровни регуляции клеточного метаболизма и пути воздействия на него
- •2) Лактозный оперон, триптофановый
- •32) Физиологические и генетические способы регуляции метаболизма микроорганизмов-продуцентов.
- •2) Лактозный оперон, триптофановый
- •34. Регуляция на уровне транскрипции. Конечный продукт как регулятор биосинтеза
- •35. Роль внешних факторов в регуляции метаболизма продуцентов.
- •36. Понятие о продуцентах и сверхпродуцентах.
- •37. Использование генетических методов в биотехнологии.
- •40)Мутации изменяющие экспрессию генов на примере лактозного и триптофанового оперонов
- •42. Требования, предъявляемые к питательным субстратам, используемым в биотехнологических процессах
- •43. Сырье и питательные среды.
- •Среды, предназначаемые для ферментационных процессов
- •44. Основные типы питательных сред и принципы их выбора.
- •46. Природные сырьевые материалы растительного происхождения.
- •47.Продукты отхода различных произв-в, как сырье б.Т. Проц-в. Хим-е и нефтехим-е субстраты
- •49.Преимущества и недостатки биотехнологических производств по сравнению с химическими технологиями.
- •50. Принципиальные схемы биотехнологических процессов, определяющие конструктивные особенности биореакторов(ферменторов)
- •51.Основные требования, предъявляемые к системам, используемым для процессов ферментации
- •52. Общая схема ферментационных процессов.
- •53. Типы и режимы ферментаций: периодические и непрерывные п-сы.
- •54. Продукты первой и второй стадии ферментации
- •55 Взаимосвязь тропо- и идиофазы при получении первичных и вторичных метаболитов
- •56)Особенности роста и культивирования микроорганизмов в очистных сооружениях:
- •58. Особенности роста и культивирования микроорганизмов при производстве первичных и вторичных метаболитов
- •60. Открытые и замкнутые ферментационные системы.
- •61. Проблемы пеногашения при различных ферментациях.
- •62. Проблемы асептики, при различных ферментациях
- •64)Регулирование режима культивирование продуцентов по принципу хемостата:
- •65.Параметры роста при периодическом культивировании.
- •66. Продукты первой и второй фазы роста
- •67.Типы периодического культивирования.
- •68. Непрерывно-проточное культивирование.
- •69. Принцип подбора и конструирования биореактора.
- •70. Основные требования, предъявляемые к биореакторам
- •71.Системы перемещивания, примен-е в совр-х ферменторах
- •74. Специализированные ферментационные технологии: аэробные, твердофазные и газофазные процессы
- •75.Особенности культивирования клеток растений.
- •76. Особенности культивирования клеток животных.
- •78. Принципы подбора питательных сред для культивирования микроорганизмов, клеток животных и растений.
- •79 Конечные стадии получения продуктов биотехнологических процессов
- •80)Основные методы и принципы выделения продуктов биосинтеза
- •81.Методы отделения биомассы.
- •82. Пенообразование и пеногашение
- •83.Методы дезинтеграции клеток.
- •84. Выделение целевого продукта: осаждение, экстрагирование, адсорбция.
- •85. Электрохимические методы выделения целевого продукта, ионообменная хроматография, иммуноэлектрофорез.
- •86. Концентрирование, обезвоживание, модификация и стабилизация целевых продуктов биотехнологических процессов
- •88)Продуценты белка.Требования,предъявляемые к микробному белку и возможности его использования.
- •90. Принципиальная схема производственного процесса белка одноклеточных
- •91.Лимитирующий фактор и его роль в процессах непрерывного культивирования
- •92. Технология производства ферментов для промышленных целей. Требования, предъявляемые к продуцентам ферментов.
- •93. Иммобилизованные ферменты и преимущества применения в биотехнологии.
- •94. Носители, используемые для иммобилизации ферментов: природные и синтетические органические носители. Типы неорганических носителей.
- •95.Способы иммобилизации ферментов
- •96. Иммобилизованные клетки в биотехнологии:
- •97. Генетическая инженерия и биотехнология.
- •98. Генетическая инженерия и технология рекомбинантных молекул
- •99.Основные окрытия, теоретически обосновавшие технологический подход к наследственной информации.
- •100. Общие понятия о матричных процессах: репликация, транскрипция, трансляция.
- •101. Инструменты генетической инженерии
- •102. Принципы создания рекомбинантных молекул in vivo.
- •103. Поняте о репликоне. Основные типы репликонов
- •104)Рестрицирующие эндонуклеазы,их основные характеристики область применения
- •106. Способы идентификации фрагментов днк.
- •107.Требование к базовым штаммам в генной инженерии.
- •108. Характеристика e.Coli, как основного базового штамма в генной инженерии.
- •109. Особенности грамположительных бактерий при ги манипуляциях.
- •110.Гибридизационные зонды
- •111. Рестрикционное картирование генетических элементов
- •112)Соединение фрагментов днк:
- •113. Обратная транскриптаза и её использование в генной инженерии.
- •116. Использование линкерных полинуклеотидов в технологии клонирования днк.
- •117. Понятие вектора
- •118. Общие свойства векторов.
- •119. Специализированные векторные системы
- •120)Векторные системы,применяемые применяемые при молекулярном клонировании в клетках прокариотических организмов:
- •121. Типы векторов: плазмидные и фаговые векторы(в) природного и искусственного происхождения.
- •122. Клеточные генетические структуры способные выполнять роль векторов
- •123. Принципы конструирования векторов.
- •124. Требования к идеальному плазмидному вектору.
- •125. Свойства фага с точки зрения вектора для создания рекомбинантных молекул.
- •127 Фазмиды и их применение
- •128)Космиды и их применение
- •129. Упаковочная система фага лямбда.
- •130. Банки генов и клонотеки
- •131.Свойства нитевидных фагов, позволяющие им выступать в качестве векторов
- •132. Векторы на основе генома нитевидных фагов.
- •133. Особенности тарансформации грамотрицательных и грамположительных бактерий
- •134.Векторы для клонирования в грамположительных бактриях
- •135. Челночные векторы (бинарные)
- •136)Векторные системы для клонирования в клетках дрожжей:
- •138. Использование вирусных геномов в качестве векторов для введения генетической информации в клетки животных
- •139.Свойства вируса sv40 и векторов на его основе.
- •140. Природные векторы для растений.
- •141. Организация и «поведение» Ti- плазмиды.
- •143. Стратегия клонирования в грамположительных бактериях
- •144)Стратегия клонирования в дрожжевых клетках
- •145)Стратегия клонирования в клетках млекопитающих:
- •146. Старатегия клонирования в клетках растений
- •147.Экспрессия чужеродной генетической информации в клетках бактерий, дрожжей, растений и животных.
- •148. Особенности организации векторных систем для экспрессии генов.
- •149. Сложная структура организации эукариотических генов и их экспрессия в прокариотических клетках.
- •150. Получение продуцента человеческого гормона роста
- •154. Способы введения рекомбинантной Днк в клетки растений и животных
- •155.Методы культивирования клеток высших растений.
- •156. Каллусные и суспензионные культуры; методы получения и область использования.
- •157. Протопласты растительных клеток; способы получения, методы культивирования и регенерации.
- •158. Слияние протопластов растительных клеток и методы реверсии. Гибридизация соматических клеток растений.
- •159. Культивирование клеток и тканей
- •161.Необходимые условия для культивирования клеток животных. Конструктивные особенности биореакторов.
- •162. Моноклональные антитела и технология гибридом
- •163.Биотехнология и сельское хозяйство.
- •164. Использование биотехнологических подходов в растениеводстве и животноводстве.
- •165. Биотехнология и медицина. Применение моноклональных антител.
- •166. Энергетика и биотехнология. Биотехнологические способы получения энергоносителей.
- •167. Биотехнология и ос
- •168)Социальные аспекты биотехнологии и биоинженерии
157. Протопласты растительных клеток; способы получения, методы культивирования и регенерации.
Растительные протопласты - это ограниченные мембраной цитоплазматические образования, обладающие внутриклеточными органеллами и характеризующиеся структурной целостностью и способностью осуществлять активный метаболизм, а также реакции биосинтеза и трансформации энергии.
Впервые протопласты растительных клеток были получены при изучении плазмолиза (в 1892 г.) в клетках водного растения - телореза. Способ получения был весьма простым (если не сказать примитивным), но тем не менее с его помощью они были получены, а это главное, Тонкая полоска ткани растения видерживалась сначала в 0,1 М растворе сахарозы до тех пор, пока протопласт не "сожмется" и не отойдет от клеточных стенок, затем бритвой делался разрез полоски и протопласты высвобождались в среду. Такого рода методические приемы выделения протопластов получили название механических. Подобные методы имеют определенные ограничения: 1) с помощью их можно получить только небольшое количество протопластов; 2) можно использовать только те ткани, в клетках которых при данном способе может иметь место выраженный плазмолиз; 3) из зрелой ткани таким методом протопласты получаются с большим трудом; 4) метод довольно длительный и трудоемкий.
Принципиально отличающимся методом является ферментативный способ получения протопластов, при котором клеточная стенка удаляется с помощью ферментов. Таким методом уже в 1919 г. были получены протопласты клеток грибов в результате обработки их клеточных стенок желудочным соком улитки. В микробиологических экспериментах протопласты получались путем разрушения клеточных стенок бактерий лизоцимом. Изолирование протопластов растительных клеток с использованием ферментных препаратов было осуществлено в I960 г. (E.Cocking). По сравнению с механическими способами ферментативные методы получения протопластов имеют определенные преимущества: 1) можно одновременно получить большое количество протопластов; 2) формирующиеся протопласты не подвергаются сильному осмотическому сжатию; 3) клетки остаются менее поврежденными: 4) метод сравнительно быстрый.
Для удаления клеточной стенки при получении растительных протопластов используются ферментные препараты трех типов -целлюлазы, гемицеллюлазы и пектиназы. Действие этих ферментов состоит в деструкции основных компонентов клеточной стенки, обеспечивающих ее механическую прочность (ригидность). У растительных клеток этими компонентами являются целлюлоза, гемицеллюлоза и пектиновые вещества, которые находятся в клеточной стенке в различных соотношениях. Поэтому комбинации ферментных препаратов и их количественные соотношения должны эмпирически подбираться для кождого конкретного случая (т.е. в зависимости от вида растения, его возраста и органа, из которого берется материал для получения протопластов).
Иными словами, оптимальные условия для получения протопластов растительных клеток весьма индивидуальны для различных тканей и в каждом случае необходима предварительная работа по подбору состава ферментов, их концентраций и времени обработки. Формирующиеся протопласты должны находиться в контакте с ферментами минимальное время, после чего их необходимо тщательно отмыть. Ферменты, естественно, должны быть стерильными (стерилизация производится, как правило, путем фильтрования через бактериальные фильтры). Важным фактором является подбор осмотического стабилизатора.
Кроме осмотических свойств среды должны быть подобраны и другие условия. Например, протопласты чаще всего получают в темноте или при слабом освещении. Температурные условия могут варьировать в довольно широких пределах; стабильности протопластов в определенной степени способствуют высокие концентрации двухвалентных ионов, воздействующих на мембранные системы клетки.
Для культивирования протопластов используются два методических приема: инкубирование в каплях жидкой среды и помещение в агаровый слой. Естественно, что каждый из них имеет свои преимущества и свои недостатки.
В первом случае обеспечивается хороший обмен газами через воздушную фазу и легкая диффузия в раствор выделяемых продуктов обмена. Помимо этого, к растущим протопластам можно легко добавлять свежую питательную среду в желаемых концентрациях. Однако при этом способе протопласты имеют тенденцию агрегировать в центре капли, что препятствует наблюдению за судьбой индивидуальных колоний протопластов.
В соответствии со вторым методом определенный объем взвеси протопластов в жидкой среде добавляется к равному объему 1%-ной расплавленной и охлажденной агаризованной среды того же состава. После уплотнения (затвердевания) среды протопласты оказываются разобщенными друг от друга и фиксированными в одном положении, что обеспечивает наблюдение за развитием индивидуальных протопластов -формирование клеточной стенки, деление клеток и дальнейшие превращения. Недостатком метода является возможность механического повреждения протопластов при смешивании с агаром, а также температурные воздействия расплавленной среды при ее недостаточном охлаждении.
Само собой разумеется, что существуют различные модификации совершенствования описанных выше методов культивирования протопластов, изложение которых заняло бы много времени.
Удобным методом является культивирование протопластов в малом объеме жидкой питательной среды (до 1 мкл), метод получил название микроизоляции отдельных протопластов.
Очень важной проблемой клеточной инженерии растительных организмов является регенерация протопластов. Синтез клеточной стенки у образовавшихся протопластов практически начинается сразу после удаления раствора ферментов, вызвавших ее деструкцию, что можно относительно легко наблюдать с помощью флюоресцентного микроскопа.
Если регенерация клеточных стенок - процесс достаточно распространенный у протопластов, то добиться деления сформировавшихся из протопластов клеток значительно труднее, а еще труднее получение из них целых растений.
Возможность регенерации растений из протопластов является свидетельством их тотипотентности, как это в свое время было продемонстрировано для растительных клеток (P.Steward, 1970). Регенерация растений осуществляется либо посредством эмбриогенеза, либо в процессе развития каллуса с последующей индукцией морфогенеза, посредством подбора оптимальных уровней гормонов, стимулирующих соответствующие этапы эмбриогенеза или морфогенетического процесса. Короче говоря, имеется достаточно обширный арсенал методов культивирования клеток in vitro, с помощью которых можно с успехом выращивать протопласты и получать из них целые растения, что указывает на тотипотентность многих протопластов.