3.Технологія виготовлення препаратів.

Виробничі штами.

При виготовленні вакцин черевного тифу і паратифів застосовують вакцинні штами відповідних збудників.

Штами збудників черевного тифу і паратифів А і В повинні знаходитись в S-формі, мати типово морфологічні, серологічні і ферментативні властивості. До складу вакцин необхідно вводити штами, що володіють всіма антигенами, в тому числі і джгутиковим.

Вакцинні штами, що використовуються для виготовлення вакцин проти черевного тифу і паратифів, повинні бути вірулентними для білих мишей. Величина LD₅₀ не повинна перевищувати 50 млн для черевнотифозних і В-паратифозних і 250 млн для А-паратифозних бактерій в ізотонічному розчині хлориду натрію.

Вакцинні штами повинні бути достатньо імуногенні. Доза вакцини, яка захищає 50% імунізованих тварин (ЕD₅₀) при зараженні не менше 3 LD₅₀ тест-культури, повинна становити не більше 30млн при В-паратифозних і 125 млн А-паратифозних (двократна імунізація) штамів

Перевірці на реактогенність належать всі нові штами, які не повинні бути висореактогенними. Випробування реактогенності здійснюють виробничі інститути на обмежених групах людей (не менше 25 чоловік на кожну вакцину, приготовлену з нового штаму).

Вакцинні штами потрібно зберігати паралельно у виробничій лабораторії і музеї культур виробничого інституту у висушеному стані при температурі 4-8°С. Однорідність культур популяції встановлюють шляхом випробувань не менше 10 субкультур однієї і тієї ж генерації, отриманої з окремих колоній за:

1. Морфологічними властивостями.

2. Ферментативними властивостями.

3. Антигенною структурою.

4. Серологічними властивостями.

5. Вірулентністю.

6. Імуногенностю.

Середовища, реактиви.

Черевнотифозні бактерії вирощуються в умовах аерації на білково-гідролізатних середовищах, що дозволяють отримати достатньо високий вихід мікробної маси. Використовуються також штучні і напівштучні поживні середовища.

Регламентовано використання в якості поживного середовища бульйону з казеїнового гідролізату з різними добавками або бульйону Хоттінгера з гороховим автолізатом. До поживних середовищ висувають такі вимоги:

1. бульйон з казеїнового гідролізату повинен бути прозорим, солом’яного кольору, мати рН 7,2 - 7,6 і містити 300-400мг % загального азоту, 200-250мг % амінного азоту і 0.1-0,6% пептону;

2. бульйон Хоттінегора з гороховим аналізатором повинен бути прозорим, солом’яно-жовтого кольору, мати рН 7.6 і містити 180-220мг % амінного азоту.

А)Отримання корпускулярних вакцин.

Отримання сухих корпускулярних кишкових вакцин включає декілька стадій: одержання маточної культури, вирощування нативної мікробної маси, інактивація мікроорганізмів, приготування вакцини, розливу в ампули, ліофільного висушування і запайки ампул.

Отримання маточної культури.

Посівним матеріалом є агарова культура в ізотонічному розчині хлориду натрію з густиною 500 млн. мікробних клітин в 1 мл, що вводиться в кількості 5-10% до об’єму середовища.

Вирощування нативної мікробної суспензії.

Для глибинного культивування використовуються реактори з нержавіючої сталі різноманітної ємності, що мають кожух, в який подається пар чи вода. Реактори оснащені системою сифонів для подачі середовища, проведення зливу культур або ферментата після завершення процесів культивування чи ферментації. Повітря подається в реактор через систему вугільно-ватного фільтру. При вирощуванні культури рекомендується вводити повітря в реактор з розрахунку 1л на 1л середовища на хвилину. Додаткове перемішування керованого середовища забезпечується турбінною або роторною мішалкою, швидкість обертання якої 180-300 об/хв. Вирощування в реакторах проводять протягом 6 – 12 год.

З метою інтенсифікації розмноження мікробів і підтримання рН середовища на рівні 7,0 – 7,4 до культур періодично додають 40 % стерильний розчин глюкози з розрахунку її концентрації в середовищі 0,1 –0,2 %. Через кожну годину відбирають проби для дослідження. Задані параметри автоматично реєструються і підтримуються з допомогою апаратури і контрольно-вимірювальних приладів.

Інактивація мікробної суспензії.

Отриману в глибинних умовах культивовану мікробну суспензію для отримання грітої вакцини інактивують нагріванням при 56-58°С протягом 1 год у реакторах з терморегулятором і мішалкою.

При приготуванні спиртової вакцини мікробну суспензію обробляють при ретельному перемішуванні в спеціальних мірниках стерильним 96% етиловим спиртом у співвідношенні 1:4, другого разу 1:10.

Після контролю інактивовану мікробну завис розводять ізотонічним розчином NaCl з 0,25% фенолу як консерванта. Розлиту в ампули вакцину заморожують при t від –40 до –50⁰С і висушують у сублімаційних установках. Після ліофілізації ампули запаюють під вакуумом, упаковують.

Спиртова суха черевнотифозна вакцина може бути використана як самостійно, так і при збагаченні її Vi-антигеном.