Лабораторная диагностика

Включает бактериологические и серологические исследова­ния (рис. 20). При проведении исследований необходимо учитывать эпизоотические, эпидемиологические предпосылки (сезонность, контакт с собаками, свиньями, грызунами и др.).

Микроскопия крови наиболее эффективна в первые дни заболевания; проводят темнопольную микроскопию либо исследуют мазки, окрашенные по Романовскому—Гимзе. Количество лептоспир, циркулирующих в крови, невелико. Необходимо микроскопировать несколько образцов либо предварительно отцентрифугировать исследуемый образец (эффективность прямой микроскопии не превышает 10%), более адекватные результаты может дать заражение лабораторных животных или выделение гемокультуры.

Рисунок 20. Принципиальная схема бактериологического выделения возбудителей лептоспирозов

Биологическая проба. Проводят внутрибрюшинное заражение морских свинок (массой 150-200 г) 2-3 мл крови, взятой в первые дни заболевания (до появления желтухи), через 48-72 ч проводят микроскопию брюшинного экссудата и крови, а также наблюда­ют за животными и отмечают повышение температуры тела и появление желтухи. Павших животных подвергают патогистологическому и микроскопическому исследованию.

Выделение гемокультуры проводят в первые 2-4 сут, 8-10 мл венозной крови засевают отдельными порциями на 6-10 пробирок со средой Ферворта-Вольфа, пробирки энергично встряхивают для предупреждения сворачивания крови, заливают жидким па­рафином и инкубируют при температуре 28-30°С. Через каждые 4-5 сут культуры исследуют, при отсутствии роста в течение 15-20 сут желательно сделать пересевы на свежую среду. Наиболее часто положительные результаты получают при посевах крови, взятой в 1-2 сут. Начиная с 4 дня высеваемость резко падает. На 2-3 нед возбудитель можно обнаружить в моче и СМЖ, используя все упомянутые методы.

Серологические исследования проводят на 2-3 нед заболевания, ставят РСК, реак­ции микроагглютинации и лизиса с сывороткой пациента и стандартным набором микро­организмов; при положительном результате можно видеть образование клубков из леп-тоспир (специфичной считают реакцию при титре не ниже 1:400) или возникновение «зернистого» распада бактерий, реакции необходимо ставить повторно для выявления нарастания титров AT.

Основные медико-санитарные мероприятия включают проведение строгого конт­роля за качеством питьевой воды и проводимыми работами по строительству колодцев и водопроводных систем, проведение дератизации в эндемичных очагах и осуществление контроля за ней

Основные ветеринарно-санитарные мероприятия включают раннюю диагностику лептоспирозов у животных, их изоляцию до окончания выделения возбудителя с мочой и организацию карантинов в подобных хозяйствах, проведение строгого предубойного ос­мотра и выбраковки животных, запрещение продажи молока без ветеринарно-санитарно-го исследования, плановое обследование собак при наличии эпидемиологических показа­ний и отстрел бродячих животных.

Питательные среды для культивирования лептоспир

Водно-сывороточная среда. Разлитый во флаконы фосфатный бу­ферный раствор (рН 7,2-7,4) автоклавируют при 115°С 30 мин. К охлажденному буферному раствору добавляют 5-10% инактивированной при 56-58°С в течение 1 ч сыворотки крови кролика или бара­на, фильтруют через фильтр Зейтца и разливают в пробирки. Для про­верки на стерильность среду выдерживают при 37°С в течение 3-5 сут.

Среда Ферворта-Вольфа в модификации Тарасова. К 900 мл дистил­лированной воды добавляют 0,5 мл хлорида натрия, 1 г пептона, 100 мл фосфатного буферного раствора рН 7,2 и автоклавируют при 115°С 30 мин. Полученную смесь дважды фильтруют через бумажный фильтр, разливают по 5 мл в пробирки и автоклавируют при 115°С 30 мин. В каждую пробирку вносят по 0,5 мл стерильной сыворотки крови кролика или барана, прогревают при 56-58°С 30 мин. Для проверки на стерильность среду выдерживают при 37°С в течение 3-5 сут.

Полужидкая среда Флетчера. К 1000 мл дистиллированной воды добавляют 2 г агара и кипятят 30 мин. Затем разливают по 5 мл в про­бирки и автоклавируют при 0,8 атм 30 мин. После охлаждения в каж­дую пробирку вносят по 0,5 мл стерильной сыворотки крови кролика или барана, инактивируют при 56-58°С 30 мин. Проверяют на стериль­ность в течение 3-5 сут при 37°С.