Питательные среды для культивирования и идентификации кампилобактерий

Сафранино-железо-новобиоциновая (СЖН) среда. В смесь, состоя­щую из 250 см³ экстракта мышцы сердца, 250 см³ печеночной воды и 500 см³ дистиллированной воды, вносят 10 г пептона, 5 г NaCl. Кипя­тят 15 мин, доводят дистиллированной водой до первоначального объ­ема, устанавливают рН 7,1-7,2, после чего добавляют 2 г агара и ки­пятят до его полного растворения (15-20 мин).

К 985 мл полученного полужидкого агара добавляют 5 мл 2%-ного раствора сернокислого железа, 5 мл 0,5%-ного водного раствора сафранина Т и 5 мл 0,2%-ного водного раствора новобиоцина. Среду фильтруют через бумажный фильтр, разливают в пробирки и автоклавируют при 115°С 25 мин. Готовая к использованию среда долж­на быть розового цвета, рН 6,8. При культивировании на данной сре­де культур кампилобактерий ее цвет не изменяется, другой микрофло­ры — приобретает ярко-желтую окраску,

Плотная среда ВИЭВ. В смесь, состоящую из 745 мл сердечного и 245 мл мозгового отваров, вносят 10 г пептона, 5 г хлорида натрия, 20 г агара, 1 г цистеина, 5 мл 0,5%-ного раствора сафранина Т и 5 мл 0,2%-ного раствора новобиоцина. Среду автоклавируют при 115°С 25 мин, охлаждают до 45-50°С, добавляют 10% дефибринированной крови барана или крупного рогатого скота и разливают в чашки Пет­ри. Рост культуры становится заметен на 2-3-и сутки.

Дифференциальные среды предназначены для дифференциации кампилобактерий в пределах рода по их способности расти в присутст­вии 1% глицина, 3,5% хлорида натрия, 1% желчи, бриллиантового зе­леного (1:100 000, 1:33 000).

Полужидкий агар ВГНКИ с 1% глицина. В смесь, состоящую из 500 мл водопроводной, 250 мл мясной и 250 мл печеночной воды, вносят 10 г пептона, 2 г агара. Кипятят до полного растворения агара (15-20 мин). Устанавливают рН 7,3-7,4. Добавляют 10 г гли­цина, 35 г хлорида натрия, 10 мл желчи, 1 или 3 мл раствора брилли­антового зеленого 1:1000, разливают и автоклавируют при 115°С 30 мин.

Бактерии рода Leptospira

Род включает 10 свободноживущих и паразитических вида; типовой вид — L. interrogans. Впервые как самостоятельное заболевание лептоспироз описал в 1888 г. Н.П. Васильев и почти одновременно с ним А. Вейль (Германия). Однако возбудителя болезни открыли японские исследователи Инадао и Идо и только в 1914-1915 г.г.

Бактерии рода образуют спиральные одиночные клетки (размеры 6-20  0,1 мкм); один или оба конца могут быть изогнуты в виде крючков; движение винтообразное: сгибательное или вдоль продольной оси некоторое время могут быть неподвижными, напоминая веревку или прихотливо изогнутые петли. Плохо окрашиваются по Граму и Романовскому-Гимзе, но хорошо различимы при импрегнации серебром, легко выявляются темнопольнои микроскопией и несколько хуже — фазовоконтрастной. Хемоорганотрофы, метаболизм дыхательный, субстраты-доноры энергии должны включать жирные кислоты в качестве источника углерода (паразитические формы нуждаются в ненасыщенных жирных кислотах, содержащих 15 и более атомов углерода), потребность возрастает при росте в неоптимальных условиях.Для роста нуждаются в присутствие в среде сыворотки или сывороточного альбумина Строгие аэробы, температурный оптимум 28-30°С оптимум рН 7,2-7,4. В средах с 1% агара образуют глубинные колонии, в средах с 2% агаром большинство штаммов образует поверхостные колонии

L. interrogans

Вид представлен более чем 180 серологическими вариантами. По биологическим свойствам их разделяют на сапрофиты, свободноживущие в пресноводных водоемах, и варианты, патогенные для людей и животных, вызывающие поражения, известные как лептоспирозы. Патогенные серовары чувствительны к действию солнечного света и высоких температур (при 45°С в воде погибают через 45 мин, при 70°С — через 10с), высушивайние вызывает немедленную гибель. Выживаемость патогенных вариантов в пресноводных водоема вариабельна — от нескольких часов до 30 сут (наиболее долго — в чистой воде с рН < 7 и низкой минерализацией), в сухой почве сохраняются 2-3 ч, а заболоченной — до 200 сут. Все лептоспиры чувствительны к действию дезинфектантов (солей, кислот и щелочей).