Лабораторная диагностика

Предположительный диагноз основывают на соответствую­щем анамнезе и клинических проявлениях.

Наиболее достоверные результаты дает выделение Francisella tularensis (рис. 14.), одна­ко культивирование возбудителя сопряжено не только с трудностями, но и с угрозой заражения персонала и разрешено только в лабораториях особо опасных инфекций.

Рисунок 14. Принципиальная схема бактериологического выделения возбудителя туляремии

При отсутствии возможности выделения возбудителя используют биологический ме­тод, основанный на заражении лабораторных животных (мышеи или морских свинок) патологическим материалом (пунктат бубона, слизь из зева, гнойное отделяемое слизис­той оболочки глаза, кровь и т.д.) с последующей идентификацией микроба агглютиниру­ющей сывороткой. Материал из бубона следует брать до 14-20 сут болезни, из слизис­той оболочки глаза — до 17 сут, кровь — до 6 дня заболевания.

Серологические методы. Наличие AT к Francisella tularensis в сыворотке больного определяют в реакции агглютинации с туляремийным диагностикумом; положительной считают видимую глазом реакцию при разведении сыворотки 1:100 и больше (положи­тельные результаты на 1 неделе выявляют у 12,5% больных, на 4 — у 93,2%). Возможна экспресс-диагностика, основанная на идентификации Аг в мазках из очагов поражений AT, меченными флюоресцеинами.

Для ранней диагностики эффективна аллергическая кожная проба. В качестве Аг используют тулярин — взвесь бактерий, убитых нагреванием до 70°С.

Питательные среды для культивирования франциселл

Пептон-цистеиновый агар. В 1 л дистиллированной воды растворя­ют 20 г пептона, 10 г натрия хлорида, 1 г глюкозы, 1 г хлористоводородного цистеина. Добавляют 20 г агар-агара. Нагревают до закипания и кипятят 1 мин. Разливают в чашки, проверяют на стерильность выдер­живанием чашек при 37°С 24 ч.

Свернутая желточная среда (Мак-Кой-Чепин). К 20 см³ изотони­ческого раствора натрия хлорида рН 7—7,2 добавляют 20 см³ аутолизата пивных дрожжей и 60 см³ желтка куриных яиц. Перемешива­ют, разливают в чашки или пробирки и выдерживают 1 ч при 80°С.

Приготовление аутолизата пивных дрожжей. Пивные дрожжи отмывают от сусла водопроводной водой. Сливают в колбу и помещают на 24 ч в водяную баню при 56-58°С. Кипятят 20 мин. Подщелачивают гидроокисью натрия до слабощелочной реак­ции. К 1 части аутолизата дрожжей добавляют 2 части воды, кипятят 40 мин, фильтруют через бумажный фильтр. Разливают в колбы и сте­рилизуют при 120°С 30 мин.

Мартеновский дрожжевой агар. К 930 см³ мартеновского бульона добавляют 70 см³ аутолизата пивных дрожжей, 10 г глюкозы, 1 г цисте­ина, 0,4 г хлорида калия, 3 г хлорида натрия, 0,1 г натрия бикарбоната, 0,3 г магния сульфата, 0,8 г натрия фосфата двуосновного. Доводят рН смеси раствором гидроокиси натрия до 7,2-7,4. Добавляют 30 г агар. агара, кипятят до его расплавления. Разливают в пробирки и стерили­зуют 20 мин при 120°С.

Среда Емельяновой. К 1 л дистиллированной воды добавляют 20 см³ гидролизата свежей рыбы, 10 см³ гидролизата желатина, 2,5 см³ ауто­лизата пивных дрожжей, 0,5 г натрия хлорида, 1 г глюкозы, 0,1 г цистеина и 2 г агар-агара. Нагревают до расплавления агара. Разливают в кол­бы и стерилизуют 20 мин при 120°С, Перед употреблением в расплав­ленную среду добавляют 10% дефибринированной крови кролика и разливают в чашки.

Полужидкая среда Дрожевкиной. К 90 см³ стерильного изотонического раствора натрия хлорида рН 7,0-7,2 асептически добавляют 10 см³ суспензии желтка куриных яиц, перемешивают и разливают в пробир­ки. После проверки на стерильность используют.

Среда Ухалова-Михалевой. К 100 см³ основного перевара Хоттингера добавляют 250 см³ сычужного пептона, 4 г натрия хлорида и ки­пятят 3 мин. Устанавливают рН 7,2-7,4, вновь кипятят 3 мин и фильт­руют через бумажный фильтр. К фильтрату добавляют 20 г предвари­тельно замоченного агар-агара и нагревают до его расплавления. Раз­ливают в колбы, стерилизуют 20 мин при 120°С.

Приготовление сычужного пептона. К 400г свеже­приготовленного фарша из обезжиренного сычуга крупного рогатого скота добавляют 1 л 1%-ного раствора соляной кислоты. Встряхивают и оставляют на 2-3 сут при 46-48°С до образования на дне бутылки порошкообразной массы и появления положительной реакции на триптофан. Смесь прогревают 10 мин при 80°С на водяной бане. Отстояв­шийся от осадка прозрачный раствор пептона декантируют, добавляют 2% хлороформа. Хранят при 10°С.

Среда Анциферова. К 100 см³ расплавленной и охлажденной до 45 С среды Ухалева-Михалевой добавляют 5 см³ (3:2) желтка ку­риных яиц в 0,5%.м растворе хлорида натрия. Разливают по пробир­кам и скашивают при нагревании до 65°С.

Среда Френсиса. К 100 см³ мясного настоя добавляют 1 г пептона, 0,5 г натрия хлорида, 1,5-2% агар-агара и нагревают его до расплавле­ния. Вносят 0,1 г цистеина, 1 г глюкозы. Устанавливают рН 7,2-7,4. Сте­рилизуют при 110°С 30 мин. В расплавленную после стерилизации и охлажденную до 45°С среду добавляют 5-10% дефибринированной крови кролика. Разливают по пробиркам и чашкам.