Методы выделения сапонинов из лекарственного растительного сырья

Выделение сапонинов из растительного сырья включает следующие стадии:

1 стадия. Получение суммарной фракции сапонинов

Экстрагируют сапонины из сырья обычно полярными растворителями:

- метанолом или этанолом различной концентрации (50%-70%);

- водой;

- 0,9% раствором хлорида натрия;

- водным раствором аммиака.

!(Сырье предварительно обезжиривают петролейным или диэтиловым эфиром, гексаном, трихлорметаном, метиленхлоридом. Необходимость этой операции связана с удалением из растительного сырья жироподобных веществ, прежде всего стеринов, с которыми большинство гликозидов способны образовывать нерастворимые в водных спиртах комплексные соединения)

2 стадия. Очистка его от сопутствующих веществ

а) сапониновые фракции очищают переосаждением:

• c помощью свойства сапонинов хорошо растворяться в горячих концентрированных спиртах, и выпадать в осадок – при охлаждении спирта;

• основаны на способности сапонинов образовывать нерастворимые в воде или водном спирте соли с бария гидрооксидом или свинца ацетатом, комплексы с холестеролом, таннидами, белками. Полученные соли разлагают кислотой серной, холестероловые комплексы разрушают экстрагированием холестерина бензолом или эфиром, таниновые – экстоакцией водной суспензии цинка оксида, белковые – экстракцией сапонинов полярными органическими растворителями.

б) сапониновые фракции очищают гельфильтрацией или хроматографическими методами.

3 стадия. Разделение суммы сапонинов на индивидуальные гликозиды.

При выделении и разделении сапонинов методом колоночной хроматографии в качестве сорбента используют оксид алюминия, силикагель, активированный уголь, полиамид.

Методы качественного анализа сапонинов

Для обнаружения сапонинов в извлечении из растительного сырья пользуются реакциями, основанными на физических, химических и биологических свойствах этих веществ.

физические методы анализа:	химические реакции: (цветные и осадочные)	биологические методы анализа:
проба на пенообразование, определение угла вращения	реакция Либермана-Бурхарда (для стероидных сапонинов); проба Лафона; реакция Сальковского; реакция Санье; реакции осаждения (с холестерином, солями бария и магния, с солями меди, ацетатом свинца)	- гемолитический индекс, - рыбный индекс

Методы количественного определения сапонинов в сырье

Для количественного определения сапонинов в растительном сырье применяют следующие методы:

1) Биологические методы, основанные на биологических свойствах сапонинов (определение гемолитического, рыбьего индексов).

Гемолитический индекс (HI) - это наименьшая концентрация извлечения из сырья, которая вызывает полный гемолиз эритроцитов, рассчитанная на единицу исследуемого вещества.

Из настоя растительного сырья на изотоническом растворе (0,9% раствор NaCl) в концентрации 1:10 готовят ряд разведений различной концентрации, затем к каждому разведению добавляют по 1 мл взвеси эритроцитов (2% свежей дефебринированной бараньей крови в изотоническом растворе) и встряхивают. Через определенное время (через сутки) наблюдают результаты гемолиза и рассчитывают результат.

Недостатки:

• Различные сапонины при одинаковой концентрации имеют разный гемолитический индекс;

• Положительный результат гемолитической пробы еще не является доказательством наличия сапонинов, т. к. гемолиз дают и другие растительные вещества (например, эфирные масла, кислоты, спирты)

• Сапонины могут находиться в растении в комплексе со стеролами и не проявлять гемолитической активности до разрушения этого комплекса.

2) Физический метод, основанный на физических свойствах сапонинов (определение пенного числа).

Пенное число – наименьшая концентрация сапонинов в извлечении, вызывающая образование стойкой пены в течение 1 мин.

3) Физико-химические методы: Общих физико-химических методов для определения содержания сапонинов не существует.

Применяют:

• гравиметрический метод (осаждение и взвешивание осадка);

• титрометрический (в том числе потенциометрическое титрование);

• колориметрический;

• спектрометрический.