2. Состав некоторых питательных сред

• Кровяной агар (для выявления микроорганизмов, вызывающих гемолиз). К расплавленному и охлажденному до 45 °С МПА (2% агара) стерильно добавляют 5-10% дефибринированной стерильно взятой крови лошади, кролика или барана.

• Пептонная вода. Основной раствор пептона: пептона - 100 г, хлорида натрия -50 г, нитрата калия - 1 г, карбоната натрия - 25 г, воды дистиллированной - 1 л; рН 9,0. Стерилизуют при 120°С 20 мин. Для получения пептонной воды основной раствор разводят водой в 10 раз, доводят рН до 8,8 -8,9, стерилизуют. Используют для культивирования холерных вибрионов.

• Свернутая сыворотка. Кровь берут от крупных животных. В продаже имеется стерильная нормальная сыворотка крови животных для бактериологических питательных сред, расфасованная по 250 мл. Можно пользоваться человеческой сывороткой (отходами производства гамма-глобулина), остатками крови при постановке реакции Вассермана и других серологических реакций.

• Среды Гисса с углеводами. Пептон - 10 г, хлорид натрия - 5 г, углевод - 10 г, реактив Андреде - 10 мл, вода дистиллированная до 1000 мл, рН после стерилизации 7,2-7,4. Дифференциально-диагностическая среда, на которой выявляют разложение углеводов микроорганизмами.

• Мясопептонный агар (МПА). К готовому МПБ добавляют 2% агар и оставляют для набухания 30 мин. Кипятят до полного растворения агара. Стерилизуют 30 мин при 120°С. Применяют для выращивания большинства сапрофитных бактерий.

Асцитический агар. Некоторые патогенные бактерии могут расти только на среде, содержащий человеческий белок. Для культивирования этих микробов приготовляют асцит-агар и асцит-бульон. На 2-3 части мясопептонной среды добавляют 1 часть асцитической жидкости. (Асцитической жидкостью называют серозную жидкость, которая скапливается в брюшной полости при заболеваниях сердца и некоторых других заболеваниях и которую удаляют с лечебными целями.)

• Среда 199. Синтетическая среда, содержащая аминокислоты, витамины, глюкозу, минеральные соли. Для выращивания клеток (как ростовую) среду используют с добавлением 5-10% коровьей или лошадиной сыворотки. Трипсин используется при получении культуры клеток для дезагрегации тканей, т.е. для разобщения клеток.

• Среда Эндо (готовят непосредственно перед употреблением). К 100 мл МПА (рН 7,6) при температуре 70 °С стерильно добавляют 5 мл 20% раствора лактозы и смесь 0,5 мл насыщенного раствора основного фуксина с 1,25 мл свежеприготовленного

10 % раствора сульфата натрия. Дифференциально-диагностическая среда для культивирования бактерий кишечной группы.

• Среда Плоскирева (бактоагар Ж) выпускается в сухом виде и содержит питательный агар с лактозой, бриллиантовым зеленым, солями желчных кислот, минеральными солями и индикатором (нейтральный красный). Эта среда является не только дифференгщально-диагаостической, но и селективной, так как подавляет рост микроорганизмов (кишечная палочка и др.) и способствует лучшему росту некоторых патогенных бактерий (возбудители брюшного тифа, паратифов, дизентерии). Лактозоотрицательные образуют на этой среде бесцветные колонии, лакгозоположительные - красные.

• Среда Левенштейна-Йенсена. Для приготовления этой среды в 600 мл дистиллированной воды, содержащей 12 мл глицерина, растворяют: аспарагина 3,6 г, фосфата калия однозамещенного 2,4 г, сульфата магния 0,24 г, цитрата магния 0,6 г, картофельной муки 5 г, малахитового зеленого 0,4 г. Полученную смесь стерилизуют 15 мин при 120 °С. Приготовляют 1000 мл однородной суспензии из свежих яиц. Добавляют стерильно в яичную взвесь основной солевой раствор, подогретый до 45-60°С, тщательно перемешивают, избегая появления пузырьков воздуха, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают в пробирки и оставляют для свертывания в наклонном положении при 85°С 45 мин.

Желточно - солевой агар (ЖСА) содержит повышенные концентрации хлорида натрия (8-10%), которые не препятствуют размножению стафилококков, что обеспечивает элективность среды. Среда позволяет дифференцировать стафилококки, продуцирующие лецитиназу, от стафилококков, не выделяющих данный фермент, по образованию зон помутнения с перламутровым оттенком вокруг колоний лецитиназоположительных видов. Готовят среду из питательного солевого агара В расплавленный и остуженный до 45 ⁰С агар добавляется куриный желток.

Требования, предъявляемые к питательным средам:

1.__________________________________________________________________________

2.__________________________________________________________________________

3.__________________________________________________________________________

4.__________________________________________________________________________

5.__________________________________________________________________________

Самостоятельная работа: классифицировать предложенные питательные среды. Результаты оформить в виде таблицы

среда	происхождение		консистенция			Назначение
	Естеств.	Искусств.	жидкие	полужидкие	плотные	общего	ДДС	Элективные
Мясопептон ный агар (МПА)
Мясопептонный Бульон (МПБ)
Среда Эндо
Кровяной агар
Пептонная вода
Среда Гиса
Среда 199
Свернутая сыворотка
Желточно солевой агар (ЖСА)

Работа № 3. Характер роста бактерий на плотных питательных средах (дифференциально-диагностические признаки)

Цель: изучить характер роста бактерий на основных и дифференциально-диагностических средах.

Самостоятельная работа: изучить культуральные свойства микроорганизмов на плотных средах.

Критерии	МПА
Форма
Размер
Характер края
Пигмент (цвет)
Поверхность
Прозрачность
Структура
Консистенция

Вывод:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 4. Характер роста бактерий на жидких питательных средах (дифференциально-диагностические признаки)

Цель: изучить характер роста бактерий на жидких питательных средах. Самостоятельная работа: изучить особенности роста микроорганизмов, результат оформить в виде рисунка, сделать вывод

Опыт №1 Опыт №2 Опыт №3

МПБ МПБ 1% пептонная вода

(кишечная палочка) (возбудитель сибирской язвы) (возбудитель холеры)

Вывод:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Подпись преподавателя______________________________________________________________

ЗАНЯТИЕ №7.

ФИЗИОЛОГИЯ МИКРОБОВ. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ БАКТЕРИЙ. ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР АЭРОБОВ.

Цель занятий:

изучить основные биологические свойства аэробов и основные принципы их культивирования

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

2. Особенности метаболизма бактерий.

3. Рост и размножение бактерий. Фазы размножения.

4. Питание бактерий.

5. Характеристика питательных сред.

6. Основные принципы культивирования аэробных бактерий.

7. Способы получения энергии.

8. Биохимическая активность аэробных бактерий

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

• описать биохимические свойства;

• идентифицировать микроорганизмы

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ИМЕТЬ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ:

О методах выделения чистых культур аэробов.

Работа № 1. Техника посева на жидкие и плотные питательные среды

Цель: ознакомиться с техникой посева на плотные и жидкие питательные среды и указать значение метода.

Теоретическая справка

Выделение чистой культуры аэробных бактерий