Монтирование препаратов

Предметные стекла со срезами вынимают из ксилола пин­цетом, вытирают с нижней стороны и кладут на ровную поверх­ность, покрытую белой бумагой. Затем быстро, не допуская подсыхания срезов, капают сверху одну каплю канадского баль­зама и каплю чистого ксилола. Берут чистое покровное стекло, ставят его наклонно на предметное, касаясь бальзама, и осто­рожно опускают. Справа и слева от покровного стекла кладут кусочки фильтровальной бумаги, для удаления излишков кси­лола и бальзама. Затем препарат осторожно вытирают тря­почкой, смоченной в ксилоле, и сушат в течение нескольких дней. Иногда на препараты сверху накладывают небольшие гирьки массой 5-10 г для удаления пузырьков из-под покровного стекла.

После сушки препарат окончательно протирают, просматри­вают под микроскопом и подписывают. На левой стороне его ставят очередной номер, который заносят в специальный ката­лог с указанием способа окраски и номера по журналу фик­сации.

На правой стороне препарата наклеивают этикетку с указа­нием названия препарата, например: «Двойное оплодотворение мягкой пшеницы». Дробью указывают отмеченный срез на пре­парате. Например, 2/г, т. е. второй срез во втором ряду. Иногда срезы отмечают тушью с нижней стороны препарата. Готовые препараты хранят в специальных коробках.

ПОСТОЯННЫЕ ГЛИЦЕРИНОЖЕЛАТИНОВЫЕ ПРЕПАРАТЫ

Для анатомических исследований в тех случаях, когда возни­кает необходимость быстро приготовить постоянный препарат, например с пыльцевыми зернами или прорастающими пыльце­выми трубками в пестиках пшеницы, ржи или других растений, объекты можно заключить в глицерииожелатин.

Приготовление глицериножелатина. Вносят 1 г желатина и 6 мл дистиллированной воды в небольшую колбу. Желатин набухает несколько часов. После этого в колбу до­бавляют 7 мл очищенного глицерина и кристаллик антисептика. Колбу ставят иа горячую водяную баню. Содержимое ее поме­шивают стеклянной палочкой. Через некоторое время смесь, в колбе разжижается. Ее переносят в термостат и фильтруют через бумажный фильтр в горячем виде.

Глицериножелатин может долго храниться в закрытой склян­ке с корковой пробкой, в которую вставлена стеклянная палоч­ка. При необходимости склянку с глицериножелатином поме­щают в воду, подогреваемую на водяной бане. Глицериножела­тин ,разжижается, и его используют для приготовления препа­ратов.

В качестве фиксирующей и просветляющей жидкости берут лактофенол Аммана. В его состав входят 1 ч. молочной кислоты, 1 ч. фенола, 2 ч. глицерина и 1 ч. воды. Красителем служит 1%-й раствор хлопчатобумажного синего, который добавляют в лактофенол.

Последовательность изготовления препара­тов. Рыльце с проросшими пыльцевыми зернами помещают на предметное стекло, на которое наносят смесь лактофенола и кра­сителя. Продолжительность одновременной фиксации и окраски 5-10 мин, затем пипеткой удаляют смесь и наносят чистый лак­тофенол для дифференцировки препарата. После окончательного удаления лактофенола наносят по капле теплого глицериножелатина на предметное и покровное стекла. Смонтированный препарат быстро застывает. Такие препараты сохраняются от одного года до нескольких лет.

При изготовлении глицерииожелатиновых препаратов мож­но воспользоваться насыщенным раствором метилового зеленого в 50%-м растворе спирта или водным раствором основного фук­сина (1 г на 10 мл воды). Любой из этих красителей прибавляют к горячему глицериножелатину (20 капель фуксина на 15 мл глицериножелатина). Пыльцу помещают в центр предметного стекла и для просветления ее прибавляют 6-8 капель спирта для энтомофильных растений и 1-2 капли - для анемофильных. Затем добавляют каплю горячего глицериножелатина с красителем и помешивают пыльцу иглой. Чтобы среда быстро не застыла, стекло проносят над пламенем спиртовки.

В 1965 г. И. Д. Романов применил для изучения пыльцы кар­тофеля следующую методику. Он окрасил сухую пыльцу из пыльников на предметном стекле 0,1%-м спиртовым раствором основного фуксина, который затем отмывал 1-2%-м раствором соды. Влажную окрашенную пыльцу заключал в глицериноже­латин.

Глицериножелатиновые препараты широко применяют в анатомических исследованиях, при которых срезы желательно оставить неокрашенными или не проводить через спирты. Окра­шенные в глицериножелатине такие срезы быстро обесцвечи­ваются. В ряде случаев при использовании метиленовой синей, кристаллвиолета, фуксина и других красителей удается сохра­нить окраску.

Например, чтобы изготовить глицериножелатиновые препараты для наблюдения плазмодесм в порах клеточных стенок у созревающих семян плодовых и во время выхода семян из покоя с использованием кристаллвиолета, Е.3. Окнина и Е.Н. Барская в 1956 г. готовили следующие реактивы:

первый р-р Люголя, состоящий из 0,75 г йодида калия и 1 г металлического йода, растворенных в 100 мл воды;

два раствора серной кислоты 10%-й и 5%-й;

второй раствор Люголя, состоящий из 1,25 г йодида калия и 1 г металлического йода, растворенных в 100 мл 5%-го раствора серной кислоты;

краситель - 1%-й водный раствор кристаллвиолета, который по каплям приливают к двум-трем каплям 5%-го раствора сер­ной кислоты, пока она не окрасится в темно-зеленый цвет;

закрепляющий раствор, состоящий из 30 мл глицерина, 2 г хлорида цинка, 0,2 г металлического йода и 80 мл воды со сле­дами йодида калия.

Последовательность работы следующая.

1. Свежие срезы помещают в первый раствор Люголя на 5 мин.

2. Переносят срезы в 10%-й раствор серной кислоты на 5 мин, а затем во второй раствор Люголя на 5 мин.

3. Промывают срезы 5%-м раствором серной кислоты 3 раза, до исчезновения желтой окраски.

4. Переносят срезы в краситель на 15-20 мин до просветления его окраски, а затем в закрепляющий раствор.

5. Просматривают срезы в глицерине или глицериножелатине.