Специальная обработка объектов перед фиксацией

В некоторых случаях, когда хромосом много и они длинные что затрудняет их изучение и подсчет, корни перед фиксацией обрабатывают специальными реактивами, например 8-оксихино-лином, хлоралгидратом, колхицином, парадихлорбензолом, холо­дом. 8-оксихинолин применяют для предварительной обработки объекта или как составную часть фиксатора. В первом случае объект помещают на 3 ч в 0,002 М. раствор 8-оксихинолина при температуре 10-14 °С и после промывки в воде фиксируют. Эту методику в основном используют для приготовления временных препаратов. Однако она была испытана и на постоянных препа­ратах в лаборатории цитогенетики Ботанического института имени В.Л. Комарова. Для этого 0,58 г 8-оксихинолина раство­ряют в 200 см3 теплой дистиллированной воды. Водный р-р реактива готовят при температуре воды около 60 °С. Оказалось, что предварительная обработка этим реактивом увеличивала толщину хромосом в 1,5 раза, не изменяя их длины. Первичные и вторичные перетяжки хромосом выступали резче. По данным. Всесоюзного НИИ растениеводства им. Н.И. Вавилова (ВНИИР), требуется обработка: лука – в течение 4 ч, ячменя – 3-4, картофеля – 2-3, вики – 5 ч при комнатной температуре.

Если для укорачивания хромосом применяют хлоралгидрат, то берут водный р-р этого реактива 0,3-1%-й концентра­ции. Корни погружают в него на 1 ч, затем столько же времени промывают в проточной воде. После этого их помещают во влажную камеру на 2-4 ч и фиксируют.

Нередко для остановки митозов объекты перед фиксацией обрабатывают слабым р-ром колхицина. Например, корни скерды зеленой размерам 2-3 мм за 2 ч до фиксации обраба­тывают этим препаратом в концентрации 0,05%. Для пшеницы и риса берут 0,1 %-й р-р колхицина и выдерживают в нем соответственно 5 и 4 ч.

Другие зерновые культуры и картофель для приостановки митозов опускают в р-р колхицина 0,01%-й концентрации. Молодые листочки можно выдерживать в 0,2%-м р-ре кол­хицина в течение 1-2 ч.

Для обработки корней иногда используют насыщенный р-р парадихлорбензола. Для этого 5-10 г кристаллического препарата растворяют в 500 мл дистиллированной воды и остав­ляют в закрытой посуде в термостате при температуре 60 °С на 10-12 ч, Материал опускают в р-р на 2-3 ч при темпера­туре 12-16 °С, корни гороха при комнатной температуре - на 6 ч.

Для кардиологического анализа нередко действие колхицина сочетают с последующей обработкой смесью насыщенного р-ра парадихлорбензола и 0,002 М 8-оксихинолина (1:1). При исследовании пшеницы берут насыщенный р-р монобромнафталина в воде и 0,1-0,01%-й р-р колхицина, кукуру­зы - 0,05%-й - колхицина и 0,5%-й - монобромнафталина. Экс­позиция в обоих случаях – 4 ч (общее время).

Растворы колхицина, монобромнафталина и других веществ готовят в резиновых перчатках.

Хромосомы укорачиваются также, если перед фиксацией вы­держивать чашки Петри с проросшими семенами в холодильни­ке при температуре 1-2°С в течение суток.

При изучении морфологии хромосом иногда объекты перед фиксацией обрабатывают одним из следующих способов:

в 2%-м растворе кумарина 2 ч при температуре 12-16°С;

в смеси кумарина и 8-оксихинолина (1:1) в течение 2 ч при 16 °С.