3. Результати дослідження та їх обговорення

На базі кафедри мікробіології і вірусології Одеського національного університету імені І. І. Мечникова та Одеського біотехнологічного науково-навчального центру нами було проведено комплексне мікробіологічне дослідження штаму Bacillus sp. ОНУ 15, включаючи встановлення життєздатності після зберіганні даного штаму різними методами, біологічні властивості, необхідні для його видової ідентифікації, і визначали ентомопатогенної активності.

3.1. Життєздатність штаму Bacillus sp. Ону 15

Культури, що тривалий час зберігаються у лабораторних умовах можуть втрачати життєздатність у зв'язку з потраплянням у несприятливі умови, не своєчасною переконсервацією, пересіванням та іншими факторами [31]. Саме цьому першим етапом нашої дослідницької роботи було встановлення життєздатності музейної культури Bacillus sp. ОНУ 15, яку зберігали за допомогою різних методів.

Для культивування бактерій, ми використовували поживне середовище МПА у зв’язку з тим, що саме у цьому середовищі зберігалася експериментальна культура у всіх випадках окрім зберігання за допомогою ліофільного висушування. Це зменшило lag фазу росту клітин та вже після однієї доби культивування штаму, ми отримали достатньо велику кількість колоній Bacillus:

При зберіганні штаму Bacillus sp. ОНУ 15 за допомогою субкультивування показник життєздатності склав 8,87 ± 1,08 lg КУО/мл, при зберіганні під шаром вазелінової олії – 8,76 ± 1,18 lg КУО/мл, при ліофільному всушувані – 8,84 ± 1,11 lg КУО/мл, при зберігання при –80 ^оС - 8,95 ± 1,02 lg КУО/мл (рис. 1).

Рис. 1. Життєздатність штаму Bacillus sp. ОНУ 15 після зберігання різними методами

Підрахунок кількості колонієутворюючих одиниць згідно з спеціальною формулою показав, що їх середня кількість при використанні різних методів культивування не сильно варіює та складає 8,85 ± 1,09 lg КУО/мл. Отримані дані свідчать про збереження життєздатності культури після зберігання різними методами.

3.2. Біологічні властивості та видова ідентифікація

На другому етапі дослідження нами були вивчені біологічні властивості штаму Bacillus sp. ОНУ 15 включаючі морфологічні, культуральні та фізіолого-біохімічні особливості. Отримані дані були занесені до таблиці 2 та 3.

Таблиця 2

Культурально-морфологічні властивості Bacillus sp. ОНУ 15

Ознака	Bacillus sp. ОНУ 15
Рухливість	+
Форма клітин	Паличковидні
Розмір клітин, мкм	2,53 ± 0,13 0,89 ± 0,07
Розташування у мазку	Окремі клітини, короткі ланцюжки
Фарбування за Грамом	Позитивні
Наявність спор	+
Форма спор	Округла
Розширення клітини спорою	-
Розташування спор у клітині	Субтермінальне
Наявність кристалу	+
Наявність капсули	-
Зростання на середовищах: МПА МПБ КА LB Грибний агар	+ + + + +

Примітка: + - ознака позитивна; - - ознака негативна.

Дані культурально-морфологічного аналізу показали, що бактерії Bacillus sp. ОНУ 15 є рухливими, паличковидними, грампозитивними, здатними до кристало- та спороутворювання. У мазку вони розташовані поодинокими клітинами або короткими ланцюжками. Добре зростаюсь на таких середовищах як МПА, МПБ, КА, LB та модифікованому грибному агарі. Колонії на різних поживних середовищах не поліморфні. Частіш це гладкі, матові, біло-жовтого кремового кольору з невеликим ореолом колонії. Мають плоский, край гладкий. У рідких поживних середовищах, наприклад МПБ, дають рівномірне замутнення.

Таблиця 3

Фізіолого-біохімічні властивості Bacillus sp. ОНУ 15

Відношення до кисню	Облігатні аероби
Температурний оптимум	28 – 30 оС
Каталаза	+
Оксидаза	-
Утилізація: крохмаль желатин глікоген ескулін глюкоза мальтоза фруктоза рибоза	+ + + + + + + +

Примітка: як до таблиці 2.

Фізіолого-біохімічний аналіз дослідного штаму показав, що бактерії Bacillus sp. ОНУ 15 є облігатними аеробами з температурним оптимумом зростання 28 – 30 ^оС. По показникам досліду, штам є каталазопозитивним та оксидазонегативним. Окрім цього він здатен утилізувати великий спектр складних речовин, таких як: крохмаль, желатин, глікоген, ескулін, глюкоза та інші.

Згідно з отриманими даними морфологічного, культурального та фізіолого-біохімічного аналізів штам Bacillus sp. ОНУ 15 відповідає ознакам Bacillus thuringiensis, наведеним у визначнику бактерій Бергі [35].