- •Тема 2. Основы морфологии бактерий.
- •Тема 3. Физиология и биохимия бактерий. Строение и классификация грибов.
- •Тема 3. Физиология и биохимия бактерий.
- •Тема 5, тема 9, тема 11, тема 16, тема 19, тема 26, тема 27.
- •Тема 4. Знакомство с микробиологической лабораторией. Микроскопические методы исследования морфологии бактерий и грибов.
- •Тема 5. Бактериологические методы исследования.
- •I этап (нативный материал)
- •II этап (изолированные колонии)
- •III этап (чистая культура)
- •Тема 6. Предмет и задачи паразитологии.
- •Тема 9. Паразитологические методы исследования.
- •Тема 10. Основы вирусологии. Бактериофагия.
- •Тема 11. Вирусологические методы исследования.
- •Тема 13. Тема 14. Тема 15. Тема 16.
- •Тема 12. Генетика микроорганизмов
- •Тема 13. Основы экологической микробиологии.
- •Тема 14. Действие физических, химических и биологических факторов внешней среды на микроорганизмы.
- •Тема 15. Микробиологические основы химиотерапии и химиопрофилактики инфекционных болезней.
- •Тема 16. Методы стерилизации и дезинфекции. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.
- •Тема 17. Учение об инфекции. Патогенность микроорганизмов.
- •Тема 17. Учение об инфекции. Патогенность микроорганизмов.
- •Тема 18. Основы эпидемиологии. Основы клинической микробиологии.
- •Тема 18. Основы эпидемиологии. Основы клинической микробиологии.
- •Тема 19. Микробиологические основы борьбы с внутрибольничными инфекциями.
- •Тема 20. Понятие об иммунологии.
- •Тема 20. Понятие об иммунологии.
- •Тема 21. Антигены.
- •Тема 22. Иммунная система организма человека. Антитела.
- •Тема 23. Формы иммунитета. Виды иммунитета.
- •Тема 24. Клиническая иммунология: аллергия, иммунодефицитные состояния.
- •Тема 25. Применение реакции антиген-антитело в медицинской практике (иммунодиагностика).
- •Тема 26. Иммуномикробиологические исследования. Реакции агглютинации и преципитации.
- •Тема 27. Реакции связывания комплемента.
- •Тема 28. Основы иммунотерапии и иммунопрофилактики.
- •Тема 29. Изучение препаратов, применяемых для иммунопрофилактики и иммунотерапии.
- •Тема 30. Основы иммунологии.
Тема 27. Реакции связывания комплемента.
РИФ и ИФА.
Содержание:
Реакция связывания комплемента.
Иммунофлюоресцентный метод.
Иммуноферментный анализ.
РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА
Реакция протекает в две фазы. Первая фаза - взаимодействие антигена и антител при обязательном участии комплемента. Вторая - выявление результатов реакции при помощи индикаторной гемолитической системы (эритроциты барана и гемолитическая сыворотка). Разрушение эритроцитов гемолитической сывороткой происходит только в случае присоединения комплемента к гемолитической системе. Если же комплемент адсорбировался ранее на комплексе антиген-антитело, то гемолиз эритроцитов не наступает.
Результат опыта оценивают, отмечая наличие или отсутствие гемолиза во всех пробирках. Реакцию считают положительной при полной задержке гемолиза, когда жидкость в пробирке бесцветна и эритроциты оседают на дно, отрицательной - при полном лизисе эритроцитов, когда жидкость интенсивно окрашена («лаковая» кровь). Степень задержки гемолиза оценивают в зависимости от интенсивности окраски жидкости и величины осадка эритроцитов на дне (++++, +++, ++, +).
Рис. 1. Схема реакции связывания комплемента.
Рис. 2. Постановка и результат РСК.
Выводы: В исследуемой сыворотке выявлены антитела.
РСК позволяет выявить антитела к любому штамму одного и того же серотипа вируса. Диагностическое значение имеет четырехкратное увеличение титра антител в парных сыворотках (в период эпидемии гриппа) и двукратное нарастание в сыворотках крови больных при характерной клинической картине.
Рис. 3. Серодиагностика с парными сыворотками.
Выводы: В парных сыворотках больного выявлено четырехкратное увеличение титра антител к вирусу гриппа А.
МЕТОД ФЛЮОРЕСЦИРУЮЩИХ АНТИТЕЛ (МФА) или
РЕАКЦИИ ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНЦИИ (РИФ)
Иммунофлюоресцентный метод является методом выбора для быстрого выявления и идентификации неизвестного микроорганизма в исследуемом материале.
Аг + АТ + электролит = светящийся в УФ - лучах комплекс
Микроб сыворотка, меченная флюорохромом
Часто используют краситель изотиоционат флюоресциина - ФИТЦ
При исследовании этим методом используют люминесцентный микроскоп.
Постановка Р И Ф
На мазок наносят 30 мкл раствора ФИТЦ-меченных антител.
Помещают стекло во влажную камеру и выдерживают при комнатной температуре в течение 20-25 мин, или в термостате при 37° С в течение 15 мин.
Промывают стекло в проточной водопроводной воде 2 мин, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают на воздухе.
На высушенный мазок наносят каплю монтирующей жидкости, мазок накрывают покровным стеклом и микроскопируют с использованием люминесцентного микроскопа или люминесцентной насадки к обычному оптическому микроскопу.
Рис. 4. Пневмококки, выявленные РИФ (люминесцентная микроскопия).
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ (ИФА)
Иммуноферментный анализ или метод – выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой. После соединения антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат-хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции – интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител. ИФА применяют для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных болезней, в частности для диагностики ВИЧ-инфекций, гепатита В и др., а также определения гормонов, ферментов, лекарственных препаратов и других биологически активных веществ, содержащихся в исследуемом материале.
Рис. 5. Иммуноферментный анализ (ИФА) (схема).
Рис. 6. Результат ИФА. Желтый цвет раствора в лунке яляется положительным результатом.
Основы иммунопрофилактики