Методика определения групп крови

Определение групп крови системы АВО стандартными изогемагглютинирующими сыворотками.

Стандартные сыворотки системы АВО двух различных серий каждой группы наносят на пластинку под соответствующими обозначениями таким образом, чтобы получилось два ряда по три большие капли (0,1 мл) в следующем порядке слева направо: О (I), А (II), В(III). Исследуемую кровь наносят по одной маленькой капле (0,01 мл) рядом с каждой каплей сыворотки и перемешивают кровь с сывороткой.

Наблюдение за ходом реакции проводят при легком покачивании пластинки в течении 5 минут при комнатной температуре. По мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 минуты, в капли, в которых наступила агглютинация эритроцитов, добавляют по одной капле (0,05мл) изотонического раствора хлорида натрия и продолжают наблюдение до истечения 5 минут.

Оценка результата. Реакция в каждой капле может быть положительной (наличие агглютинации эритроцитов) и отрицательной (отсутствие агглютинации).

Различные сочетания положительных и отрицательных результатов дают возможность судить о групповой принадлежности исследуемой крови (см. табл.).

Результат реакции с изогемагглютинирующими сыворотками группы:
О(I)	А(II)	В(III)	АВО (IV)	Это указывает, что эритроциты не содержат:
-	-	-	+	О(I)
+	-	+	-	А(II)
+	+	-	-	В(III)
+	+	+	-	АВ(IV)

Оценка результатов определения групп крови при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) - ее отсутствие.

Как видно из таблицы, результат оценивается в зависимости от реакции со стандартными сыворотками группы О(I), А(II), В(III). В тех случаях, когда положительный результат получен с сывороткой всех трех групп, для исключения неспецифической агглютинации производится контрольное исследование со стандартной сывороткой группы АВО (IV), не содержащей групповых агглютининов.

II. Перекрестный метод определения группы крови - одновременное распознавание агглютиногенов в эритроцитах исследуемой крови с помощью стандартных сывороток и выявление агглютининов, содержащихся в сыворотке этой крови с помощью стандартных эритроцитов. Для определения группы крови используются моноклональные антитела, для получения которых используется гибридомная биотехнология. Гибридома - это клеточный гибрид, образованный путем слияния клетки опухоли костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, синтезирующим специфические моноклональные антитела. Гибридом а приобретает свойства обоих родителей и способность к неограниченному росту, характерную для опухолевой клетки и возможность синтезировать антитела, присущие иммунному лимфоциту. Цоликлоны анти-А и анти-В, или моноклональные антитела, применяют для определения агглютиногенов эритроцитов.