3. Практическая часть.

1. Лабораторная работа № 1: Построение калибровочного графика.

1. Приготовление калибровочных растворов из стандартного раствора белка.

Выполнение работы.

К 0,4 мл стандартного раствора с концентрацией 95 г/л прибавить 3,4 мл физиологического раствора. Из этого раствора готовят разведения:

№ пробирки	Калибровочный раствор белка, мл	Физиологический раствор	Концентрация белка, г/л
1	0,2	0,8	20
2	0,4	0,6	40
3	0,6	0,4	60
4	0,8	0,2	80
5	1,0	-	100

Из каждого раствора с различной концентрацией белка отбирают по 0,5 мл образца и прибавляют по 2 мл биуретового реактива. Через 30 минут колориметрируют при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр) против контроля (0,5 мл физиологического раствора и 2 мл биуретового реактива). Кювета 10 мм.

2. Построение калибровочного графика.

Например, Е_к1 = 0,1; Е_к2 = 0,2; Е_к3 = 0,3; Е_к4 = 0,4; Е_к5 = 0,5.

Исходя из этих данных и концентрации белка в г/л (см. приготовление калибровочных растворов) строят калибровочный график.

Е

0,5

0,4

0,3

0,2

0,1

0 20 40 60 80 100 С

На оси ординат откладываем экстинции калибровочных проб, а на оси абсцисс – концентрацию белка в г/л. Через полученные точки проводим прямую линию.

Масштаб выбирают так, чтобы линия располагалась под углом, близким к 45ºС, для этого берут максимальные значения концентрации и экстинции, если между ними в пределах этих значений сохраняется прямо пропорциональная зависимость. В нашем примере отрезок из 20 клеток (10 см) на оси абсцисс составляет 100 г/л, а на оси ординат максимальное значение экстинции 0,5. На основании этих данных находят факторы калибровки по формулам:

3. С_max : 10 = 100 : 10 см = 10 г/л

4. Е_max : 10 = 0,5 : 10 см = 0,05, где

10 г/л и 0,05 – значения концентрации и экстинции, соответствующие масштабу 1 см (2 клетки)

Чтобы облегчить процедуру откладывания на оси ординат значений экстинций стандартных и опытных проб, рекомендуется разделить величину экстинции, например, 0,2 на 0,05. полученное число (4) показывает на каком удалении от «0» точки в см следует сделать отметку для восстановления из нее перпендикуляра, т.е. 4 см. Также поступают со всеми остальными значениями, для того чтобы их разместить на вертикальной и горизонтальной осях. Из отложенных на осях значений восстанавливают перпендикуляры; в месте пересечения тонких линий находят точки, проводят калибровочную кривую (см. график выше).

2. Лабораторная работа № 2: Работа с наборами реактивов.

Выполнение работы.

1. Изучение инструкции по применению набора реактивов для определения альбумина в сыворотке крови по реакции с бромкрезоловым зеленым «Диахим-альбумин».

2. Приготовление рабочего реактива (изучить по инструкции) и выполнить опыт.

3. Изучить ход определения альбумина в сыворотке крови.

4. Изучить расчет концентрации альбумина.

Сделать вывод о значении применения набора реактива