- •Челябинск
- •Нингидриновая рекция
- •Хроматографическое разделение аминокислот на бумаге
- •Занятие 2 Физико-химические свойства белков
- •Вопросы для подготовки к занятию
- •Практическая часть занятия Высаливание белков сыворотки
- •Тепловая денатурация белков
- •Осаждение белков органическими растворителями
- •Осаждение белков органическими кислотами
- •Осаждение белков концентрированными минеральными кислотами
- •Домашнее задание
- •6. Выберите правильный ответ.
- •7.Выберите правильный ответ.
- •8.Выберите правильный ответ.
- •Занятие 3 Белки крови. Методы разделения белков.
- •Вопросы к занятию
- •Практическая работа
- •Домашнее задание
- •Занятие 4 Ферменты. Свойства. Механизм действия.
- •Цель занятия
- •Вопросы для подготовки к занятию
- •Практическая часть Специфичность действия ферментов
- •Влияние температуры на активность фермента
- •Влияние активаторов и ингибиторов на активность ферментов
- •Домашнее задание
- •Занятие 5 Коллоквиум по теме: «Белки. Ферменты»
- •Вопросы для самоподготовки
- •Занятие 6 Введение в обмен веществ. Биохимия питания
- •Лабораторная работа n1 Обнаружение аскорбиновой кислоты (проба Фелинга)
- •Количественное определение содержания витамина с – в твердых продуктах
- •Домашнее задание
- •Занятие 7 Минеральные вещества пищи. Региональные патологии, связанные с недостатком микроэлементов в пище и воде
- •Вопросы для самоподготовки
- •Практическая работа Определение кальция в моче трилонометрическим методом
- •Приложение для лечебного и медико-профилактического факультетов
- •Домашнее задание
- •Занятие 8 Сложные белки - хромопротеиды
- •Вопросы для подготовки студентов к занятию
- •Практическая часть
- •Домашнее задание
- •Занятие 9 Обмен хромопротеидов
- •Домашнее задание
- •Занятие 10 Биологическое окисление
- •Вопросы для подготовки к занятию:
- •Домашнее задание
- •Домашнее задание
- •Занятие 11 Свободно-радикальное и микросомальное окисление
- •Вопросы для самоподготовки
- •Приложение для педиатрического факультета
- •Домашнее задание
- •Занятие 12 Сложные белки - нуклеопротеиды
- •Вопросы для подготовки к занятию
- •Практическая работа Определение содержания мочевой кислоты в сыворотке крови и моче по методу Мюллера-Зейферта
- •Приложение для педиатрического факультета
- •Занятие 13 Обмен нуклеопротеидов Виды передачи генетической информации
- •Занятие 14 Обмен белков
- •Практическая часть занятия
- •Занятие 15 внутриклеточный обмен аминокислот
- •Вопросы для подготовки к занятию
- •Практическая часть Определение активности алт и аст
- •Домашнее задание
- •Источники и пути обезвреживания аммиака в разных тканях
- •Занятие 16 Индивидуальные пути обмена аминокислот
- •Домашнее задание
- •Приложение для педиатрического факультета
- •Ретенция азота у детей различного возраста
- •Занятие 17 Коллоквиум по теме: «Нуклеопротеиды. Обмен нуклеопротеидов Белки. Обмен белков»
Занятие 2 Физико-химические свойства белков
Цель занятия: познакомить студентов с методами разделения и очистки белков
Вопросы для подготовки к занятию
-
Физико-химические свойства белков. Молекулярный вес, размеры и форма молекул. Растворимость, ионизация, гидратация.
-
Белки как амфотерные электролиты. Механизм возникновения электрического заряда у белковой молекулы. Факторы, определяющие величину и знак заряда. Понятие изоэлектрической точки белков.
-
Обратимое осаждение белков – высаливание; механизм и факторы, вызывающие процесс.
-
Лабильность пространственной структуры белков и их денатурация. Факторы, вызывающие денатурацию. Шапероны – класс белков, защищающий другие белки от денатурации в условиях клетки и облегчающие формирование их нативной структуры.
-
Методы выделения индивидуальных белков: гель-фильтрация, ионообменная, афинная хроматография.
-
Методы очистки белков от низкомолекулярных примесей (диализ, ультрафильтрация). Применение.
Практическая часть занятия Высаливание белков сыворотки
Принцип метода: Высаливание белков сыворотки крови (NH4)2SО4 может быть использовано для разделения альбуминов от глобулинов в связи с тем, что глобулины осаждаются при 50% насыщении, а альбумины при 100% насыщении (NH4) 2SО4.
Ход работы. Налить в пробирку 2-3 мл сыворотки крови и добавить равный объем насыщенного раствора (NH4) 2SО4. Через 15 минут осадок отфильтровать и к фильтрату добавить сухого (NH4) 2SО4 до полного насыщения. Осадок через 10 минут отфильтровать. Для доказательства обратимости высаливания полученные осадки прямо на фильтрах смочить 2-3 мл дистиллированной воды. Отметить растворение их. С фильтратами проделать биуретовую пробу.
Результат:
Вывод:
Тепловая денатурация белков
Принцип метода. При нагревании глобулярных белков происходит их тепловая денатурация. При этом белки выпадают в осадок
Ход работы. Налить в пробирку 2-3 мл раствора белка, добавить 2-3 капли 5% расвора уксусной кислоты и нагреть до кипения.
Результат:
Вывод:
Осаждение белков органическими растворителями
Принцип метода. При длительном воздействии некоторых органических растворителей (спирт, ацетон и др.) на глобулярные белки происходит их десальватация и денатурация.
Ход работы. К 0,5 мл раствора белка осторожно по стенке прилить 1-2 мл спирта. Отметить появление белого кольца на границе наслаивания.
Результат:
Вывод:
Осаждение белков органическими кислотами
Принцип метода. Ряд органических кислот вызывает денатурацию белков. Наиболее широко в различных биохимических исследованиях для осаждение белков применяются трихлоруксусная (ТХУ) и сульфосалициловая кислоты (ССК). В медицине применяют для обнаружения белка в моче.
Ход работы. Налить в пробирку 1-2 мл раствора белка и добавить равный объем 5% ТХУ.
Результат:
Вывод:
Ход работы. К 0,5 -1 мл раствора белка добавить 5-6 капель 20 % ССК
Результат:
Вывод:
Осаждение белков концентрированными минеральными кислотами
Многие концентрированные минеральные кислоты вызывают денатурацию белка. Осаждение белков азотной кислотой лежит в основе пробы Геллера, широко используемой в практике обнаружения белка в моче.
Ход работы. К 0,5 -1 мл концентрированной азотной кислоты осторожно по стенке наслоить равный объем раствора белка. На границе наслаивания отметить образование белого кольца.
Результат:
Вывод: