Журнал неврологии и психиатрии / 2009 / NEV_2009_10_09

Одним из значительных достижений в области биологии за последние 20 лет явилось стремительное расширение знаний о функциях тромбоцитов [1, 4, 31—33]. Тромбоциты млекопитающих стали рассматриваться не только как клетки, ответственные за гемостаз, но и как специализированные клетки с провоспалительной функцией, а также в качестве эффекторных иммунных клеток [12, 21, 28, 33]. Они являются носителями биомолекул с множественными функциями и способны вступать в ответную реакцию на стрессовое воздействие, включая инфекцию, являясь клетками раннего реагирования на травму или микробную инвазию в условиях сосудистого повреждения.

Имеется значительное число работ, касающихся изучения тромбоцитов при шизофрении. Большинство из них выполнены в аспекте современных представлений о метаболизме биогенных аминов, что существенно для понимания механизмов деятельности нервной системы. Важным звеном в метаболизме этих соединений является их окислительное дезаминирование посредством фермента моноаминооксидазы (МАО), в том числе в связи с активностью МАО в тромбоцитах больных. Было установлено снижение активности этого фермента у больных по сравнению со здоровыми [3, 23, 29, 30]. Однако есть работы [16, 25], в которых такие различия не были обнаруже-

ны. В некоторых исследованиях [11, 13—15] в тромбоцитах больных шизофренией была отмечена повышенная чувствительность их рецепторов к глютаминовой кислоте (глютамату). Были обнаружены также увеличенный захват дофамина гранулами тромбоцитов [24], увеличенное число α2-адренорецепторов и уменьшение продукции цАМФ при стимуляции α2-адренорецепторов простагландином Е1 [17, 19, 20].

Есть данные о том, что активация тромбоцитов у больных шизофренией сопряжена с повышением уровня фактора Виллибранда и С-реактивного белка в плазме крови, что свидетельствует о дисфункции или повреждении эндотелиальных клеток [8—10, 26]. При передозировке нейролептиками у некоторых больных шизофренией наблюдается диссеминированное внутрисосудистое свертывание крови [18].

Следует также подчеркнуть, что функциональные изменения тромбоцитов больных шизофренией [13, 17, 23, 24] были выявлены при разных формах болезни.

К сказанному следует добавить, что тромбоциты очень чувствительны к разного рода внешним воздействиям и, в отличие от других клеток крови, способны при активации менять свою поверхность от дисковидной к форме шара с образованием псевдоподий, к распластыванию тела клетки, выделению содержимого гранул в циркули-

рующее кровяное русло [2]. Это свойство тромбоцитов предопределяет необходимость использования мягких способов их выделения для последующего изучения.

Целью настоящей работы была оценка степени активации тромбоцитов у больных шизофренией при их выделении наиболее щадящим методом.

Для работы были выбраны тромбоциты больных шизофренией с длительностью заболевания не менее 1 года, в состоянии обострения. Предполагалось, что в этом случае тромбоциты, учитывая остроту психического состояния, могут «нести на себе» воздействие компонентов циркулирующей крови.

Материал и методы

Использовали тромбоциты 39 больных шизофренией мужчин в состоянии обострения психоза и 24 здоровых мужчин. Возраст больных был 35,0±10,0 года, здоровых — 29±11,0 года. Длительность болезни пациентов составляла 10,8±8,1 года.

В момент включения в исследование всем больным был поставлен диагноз параноидной шизофрении с эпизодическим течением и нарастающим дефектом или эпизодическим течением со стабильным дефектом (рубрики по МКБ-10 F20.01 или F20.02).

Все пациенты были стационированы в психиатрическую больницу в связи с развившимся психотическим приступом. У них в клинической картине имелись проявления галлюцинаторно-параноидного или параноидного синдрома. У 19 (32,2%) больных состояние определялось синдромом Кандинского—Клерамбо. У 21 (35,6%) больного в клинической картине существенное место занимали симптомы дезорганизации мышления.

На момент начала исследования все пациенты получали антипсихотическую терапию, преимущественно типичными нейролептиками.

Для исследования тромбоцитов кровь брали из локтевой вены утром натощак в пластмассовые флаконы, содержащие цитратный антикоагулянт. Плазму, обогащенную тромбоцитами (ПОТ), получали центрифугированием крови при 280g в течение 15 мин при комнатной температуре [2]. Суспензию тромбоцитов получали гельфильтрацией с использованием сефарозы СL-2B [27]. Эта процедура позволяет выделять клетки, очищенные от белковых и других элементов плазмы. Затем клетки в течение 18 ч при 5°С инкубировали в холодильнике. Подсчет клеток осуществляли в камере Горяева на световом микроскопе Leitz (Германия) при увеличении в 400 раз.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием пакета программ Statistica 6.0, тестов непараметрической статистики Манна—Уитни (Мann— Whitney) и Вилкоксона для пар зависимых переменных (Wilcoxon matched pairs).

Результаты и обсуждение

На первом этапе работы определяли количество тромбоцитов в ПОТ. На рисунке (линия 1) представлено количество тромбоцитов в 500 мкл ПОТ у больных шизофренией и здоровых. Можно видеть, что количество тромбоцитов в ПОТ у больных шизофренией в 1,8 раз меньше такового у здоровых (по тесту Манна—Уитни, p<0,001). В пересчете на 1 мкл ПОТ среднее число тромбоцитов у

больных шизофренией и здоровых составляют соответственно 59 721 (n=39) и 109 291 (n=24).

Для здоровых самым щадящим способом выделения свободных от белков плазмы тромбоцитов является выделение на колонке с сефарозой CL-2B [26]. Пытаясь выяснить степень сохранности тромбоцитов больных шизофренией и возможность использования сефарозы CL-2B для их выделения, мы на следующем этапе работы пропускали плазму крови больных шизофренией и здоровых через колонку с сефарозой CL-2B и определяли количество элюировавших с колонки тромбоцитов.

Полученные результаты также представлены на рисунке (линия 2). Можно видеть, что значение количества тромбоцитов у больных шизофренией в 2,4 раза меньше соответствующего значения у здоровых доноров (по тесту Манна—Уитни, p<0,003).

Из рисунка можно также видеть, что количество тромбоцитов больных шизофренией после прохождения через колонку меньше, чем число тромбоцитов, наслаиваемое на колонку (значения 1А и 2А). По тесту Вилкоксона для пар зависимых переменных эти значения достоверно различаются: p<0,02. При этом теряется 38—39% клеток. Для здоровых доноров (значения 1B и 2B) по тесту Вилкоксона для пар зависимых переменных также показано уменьшение количества клеток после прохождения через колонку: p<0,02, но при этом теряется лишь около 14% клеток.

Центрифугированные тромбоциты — в ПОТ (1А—1В), после колонки (2А—2В), после инкубации (3А—3В), после инкубации и колонки (4А—4В).

Вертикальные линии представляют значения переменной в 1 и 3 квартилях. По оси ординат — количество тромбоцитов в 500 мкл плазмы крови; по оси абсцисс: A — больные шизофренией, B — здоровые доноры.

ЛИТЕРАТУРА

1.Бухарин О.В., Черешнев В.Н. и др. Антимикробный белок тромбоцитов. Екатеринбург: УрО РАН 2009; 7—8, 10—12.

2.Киктенко А.И., Злобина Г.П., Щурин М.Р. и др. Влияние разных способов выделения тромбоцитов на поверхностную структуру и биохимические параметры серотониновой систмы этих клеток. Бюл экспер биол 1991; 112: 11: 485—488.

3.Курилова И.И., Лидеман Р.Р. Снижение активности моноаминооксидазы тромбоцитов больных шизофренией. Журн неврол и психиат 1978; 78: 9: 1351—1354.

4.Сулейманов К.Г. Роль бактерицидного тромбоцитарного катионнго белка (ТКБ) в инфекционной патологии и гомеостазе: Автореф. дис.

... д-pa мед. наук. Челябинск 1998.

5.Узбеков М.Г., Смолина Н.В., Мисионжник Э.Ю. и др. Нарушение конформации связывающих центров сывороточного альбумина при шизофрении. Журн неврол и психиат 2008; 108: 5: 67—70.

17.Kafka M.S., Kleinman J. E., Karson C.N. et al. Alpha-adrenergic receptors and cyclic AMP production in a group of schizophrenic patients. Hillside J Clin Psychiat 1986; 8: 1: 15—24.

18.Kaminska T., Szuster-Ciesielska A., Wysocka A. et al. Serum cytokine level and production of reactive oxygen species (RCS) by blood neutrophils from a schizophrenic patient with hypersensitivity to neuroleptics. Med Sci Monit 2003; 9: 7: 1—5.

19.Kanof P.D., Johns C.A., Davidson M. et al. Prostaglandin receptor sensitivity in psychiatric disorders. Arch Gen Psychiat 1986; 43: 10: 987—993.

20.Kanof P.D., Johns C.A., Davidson M. et al. Platelet alpha 2-adrenergic receptor function in psychiatric disorders. Psychiat Res 1988; 23: 1: 11—22.

21.Klinger M.H., Jelkmann W. Role of blood platelets in infection and inflammation. J Interferon Cytokine Res 2002; 22: 9: 913—922.

22.Kriss T.C., Kriss V.M. History of the operating microscope: from magnifying glass to microneurosurgery. Microneurosurgery 1998; 42: 4: 899—907.

24.

7.Шитикова А.С. Тромбоцитарный гемостаз. Ст-Петербург 2000; 104— 114.

8.Щербакова И.В., Сиряченко Т.П., Мазаева Н.А. и др. Сопоставление некоторых показателей врожденного и приобретенного иммунитета при разных формах течения шизофрении. Журн неврол и психиат 2003; 103: 8: 69—72.

9.Щербакова И.В., Каледа В.Г., Бархатова А.Н. и др. Маркеры эндотелиальной дисфункции при приступообразно — прогредиентной шизофрении. Журн неврол и психиат 2005; 105: 3: 43—46.

10.Щербакова И.В., Сиряченко Т.П., Сарманова З.В. и др. Состояние врожденного и приобретенного иммунитета у больных с эндогенными заболеваниями шизофренического спектра. Журн неврол и психиат 2005; 105: 5: 47—51.

11.Belsham B. Glutamate and its role in psychiatric illness. Hum Psychopharmacol 2001; 16: 2: 139—146.

12.Bergmeier W., Wagner D.D. Inflammation. In: Michelson A.D. Platelets (second edition). Academic Press 2007; 713—726.

13.Berk M., Plein H., Csizmadia T. Supersensitive platelet glutamate receptors as a possible peripheral marker in schizophrenia. Int Clin Psychopharmacol 1999; 14: 2: 119—122.

14.Berk M., Plein H., Belsham B. The specificity of platelet glutamate receptors supersensitivity in psychotic disorders. Life Sci 2000; 66: 25: 2427—2432.

15.Heresco-Levy U. N-Methyl-D-aspartate (NMDA) receptor-based treatment approaches in schizophrenia: the first decade. Int J Neurosychopharmacol 2000; 3: 3: 243—258.

16.Jackman H.L., Meltzer H.Y. Kinetic constants of platelet monoamine oxydase in schizophrenia. Am J Psychiat 1983; 140: 8: 1044—1047.

plasma amine oxydase in psychiatric patients. Schizophr Bull 1980; 6: 2: 213—219.

24.Rabey J.M,. Lerner A., Sigal M. et al. [3H ]dopamine uptake by platelet storage granules in schizophrenia. Life Sci 1992; 50: 1: 65—72.

25.Spivak B., Kosower N., Zipser Y. et al. Platelet monoamine oxydase activity in neuroleptic-naive schizophrenic patients: lack of influence of chronic perphenazine treatment. Clin Neuropharmacol 1994; 17: 1: 83—88.

26.Strous R.D., Shoenfeld Y. Schizophrenia, autoimmunity and immune system degradation: A comprehensive model updated and revisited. J Autoimmunity 2006; 27: 2: 71—80.

27.Tangen O., Berman H.J., Marfey P. Gel filtration. A new technique for separation of blood platelets from plasma. Thromb Diath Haemorrh 1971; 25: 2: 268—278.

28.von Hundelshausen P., Weber C. Platelets as immune cells: bridging inflammation and cardiovascular disease. Circ Res 2007; 100: 1: 27—40.

29.Wyatt R.J., Murphy D.L., Belmaker R. et al. Reduced monoamine oxydase activity in platelets: a possible genetic marker for vulnerability to schizophrenia. Science 1973; 179: 76: 916—918.

30.Wyatt R.J., Murphy D.L. Low platelet monoamine oxydase activity and schizophrenia. Schizophr Bull 1976; 2: 1: 77—89.

31.Yeaman M.R., Tang Y.Q. et al. Purification and in vitro activities of rabbit platelet microbicidal proteins. Infect Immun 1997; 65: 1023—1031.

32.Yeaman M.R., Bauer A.S. Antimicrobial peptides from platelets. Drug Resistance Updates 1999; 2: 2: 116—126.

33.Yeaman M.R., Bauer A.S. Antimicrobial host defense. In: Michelson A.D. Platelets (second edition). Academic Press 2007; 727—755.