Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Скачиваний:
21
Добавлен:
15.09.2017
Размер:
156.49 Кб
Скачать

КРАТКИЕ СООБЩЕНИЯ

Ассоциация полиморфизма C802T гена глюкуронозилтрансферазы с эффективной дозой топирамата

М.Г. АКСЕНОВА, С.Г. БУРД, Г.Н. АВАКЯН, Е.Ю. КАЧАЛИН, О.Л. БАДАЛЯН, Ф.К. РИДЕР, М.Ю. ДОРОФЕЕВА, Е.Д. БЕЛОУСОВА, Е.И. ГУСЕВ

The association between the C802T polymorphism of the UDP-glucuronosyltransferase 2B7 gene and effective topiramate dosage

M.G. AKSENOVA, S.G. BURD, G.N. AVAKYAN, E.YU. KACHALIN, O.L. BADALYAN, F.K. RIDER, M.YU. DOROFEEVA, E.D. BELOUSOVA, E.I. GUSEV

Лаборатория молекулярно-генетической диагностики НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н. Сысина РАМН; Кафедра неврологии и нейрохирургии лечебного факультета Российского государственного медицинского университета; Отдел психоневрологии и эпилептологии Московского НИИ педиатрии и детской хирургии Росздрава

Глюкуронозилтрансфераза 2В7 (UGT2B7) играет важную роль в связывании и последующей элиминации как потенциально токсичных ксенобиотиков, так и веществ эндогенного происхождения. Этот фермент уникально специфи- чен для 3,4-катехолэстрогенов и эстриолов и поэтому уча- ствует в регуляции метаболизма эстрогенов. Он также способен катализировать гликозилирование субстратов, например желчных кислот, с использованием уридин-дифосфат- глюкозы (УДФ-глюкозы) в качестве активированного второго субстрата.

Топамакс (топирамат) относится к группе новых противоэпилептических препаратов. Показано, что при монотерапии эпилепсии с его помощью достигается уменьшение числа и тяжести 62% парциальных эпилептических приступов [9]. Известно, что его большая (до 70%) часть выводится из организма с мочой, а оставшаяся метаболизируется тремя путями: гидролизом, гидроксилированием и глюкуронированием. Топирамат практически не влияет на фармакокинетику других противоэпилептических препаратов, но может увеличивать клиренс эстрогенных компонентов, входящих в состав оральных контрацептивов [2], что указывает на его участие в метаболизме эстрогенов.

Хотя известно, что топирамат метаболизируется в том числе и через глюкуронирование, до сих пор не было уточ- нено участие в этом процессе уридин-дифосфат-глюкуро- нозилтрансферазы (УДФ-глюкуронозилтрансферазы) — UGT2B7. Мы предположили, что элиминирование топирамата по пути глюкуронирования происходит с участием изоформы 2B7 УДФ-глюкуронозилтрансферазы (UGT2B7).

В данной работе исследовалось влияние полиморфизма H268Y (C802T) гена UGT2B7 на метаболизм противоэпилептических препаратов. Задачей данного исследования являлось изучение ассоциации полиморфизма C802T гена UGT2B7 с эффективной суточной дозой топирамата.

èидиопатической генерализованной эпилепсии. Возраст больных колебался от 1 года до 72 лет; различной была и длительность болезни.

Больные принимали топирамат в лекарственной форме топамакс (фирма «Янсcен-Силаг», Бельгия) в дозах от 25 до 500 мг/сут в режиме монотерапии.

Для получения ДНК необходимой степени чистоты использовали фенол/хлороформный метод ее выделения из крови. ПЦР проводили на амплификаторе Терцик («ДНКтехнология», Россия) с использованием следующих праймеров: прямой — 5'-TTATGATTATGAGCATACTGATGC-3'

èобратный 5'-TACTTGCACATATTCTATCTTTTG-3'. Реакционная смесь для амплификации объемом 25 мкл содер-

æàëà 0,67 Ì òðèñ-HCl, ðÍ 8,8; 16,7 ìÌ (NH4)2SO4; 0,01% твин-20; 0,2 мМ каждого dNTP; 0,1 мкг геномной ДНК; 20

пмолей каждого праймера; 2 ед SmarTaq полимеразы; MgCl2 в концентрации 1,5 мМ. Амплификация состояла из предварительной денатурации при 95°С — 4 мин; 36 циклов, состоящих из денатурации при 94°С, — 20 c, отжига праймеров при 58°С — 20 с, синтеза продукта при 72°С — 10 с; затем следовала стадия заключительного синтеза при 72°С

— 5 мин. Получившийся фрагмент длиной 829 п.о. расщепляли ферментом BstF5 I при температуре 65°. В случае аллеля *21 образовывались фрагменты 458, 221 и 150 п.о., в случае аллеля *1 — 346, 221, 150 и 112 п.о. Препараты ДНК разделяли посредством электрофореза в 4% агарозном геле. В качестве маркера использовали ДНК плазмиды pBR322, расщепленную рестриктазами Mva I или Alu I, а также ДНК плазмиды pUC19, расщепленную рестриктазой Msp I. Гели красили бромистым этидием и визуализировали в УФ.

Для статистического анализа результатов использовались следующие критерии и компьютерные программы:

«R: A Language and Environment for Statistical Computing», критерий Стьюдента, критерий Манна—Уитни, критерий χ2.

Материал и методы

 

Результаты

Были обследованы 49 пациентов с различными форма-

 

Частота аллелей полиморфного маркера H268Y гена

ми эпилепсии, которые наблюдались в окружных невроло-

UGT2B7 составила: *1 — 0,46; *2 — 0,54. Частота генотипов

гических отделениях Москвы, отделе психоневрологии и

составляла: *1/*1 — 0,25; *1/*2 — 0,41; *2/*2 — 0,33. Откло-

эпилептологии Московского НИИ педиатрии и детской

нения от равновесия Харди—Вейнберга не обнаружено

хирургии Росздрава и в областной городской больнице

2=0,92<3,84).

г. Люберцы. На основе клинических и инструментальных дан-

По результатам исследования установлено, что сред-

ных у них был установлен диагноз криптогенной локально-

ние эффективные дозы топирамата для носителей гомози-

обусловленной, симптоматической локально-обусловленной

готных генотипов *1/*1 и *2/*2 составляют 219±43 и 105±14

 

 

 

 

© Коллектив авторов, 2007

 

1 Звездочка перед цифрой — аллель 1, 2 и т.д.

Zh Nevrol Psikhiatr Im SS Korsakova 2007;107:5:63—64

 

 

ЖУРНАЛ НЕВРОЛОГИИ И ПСИХИАТРИИ, 5, 2007

63

КРАТКИЕ СООБЩЕНИЯ

мг/сут соответственно (указано среднее значение ± стан-

феразы 2B7 в глюкуронировании кодеина, морфина и 3-

дартная ошибка). Для носителей гетерозиготного генотипа

азидо-3-дезокситимидина (AZT), андростерона, однако раз-

*1/*2 средняя эффективная доза составила 176±23 мг/сут. Ста-

личий активности аллельных вариантов *1 и *2 при глюку-

тистически достоверного различия средних между гомозигот-

ронировании этих субстратов не выявлено.

ным генотипом *1/*1 и гетерозиготным *1/*2 не выявлено, и

Глюкуронирование различных химических субстратов

при статистической обработке данных генотипы *1/*1 и *1/*2

является одним из основных путей инактивации и после-

были объединены в одну группу, средняя эффективная доза

дующего выведения этих субстратов. Косвенно участие в

которой составила 192±21 мг/сут. Средние эффективные дозы

этом процессе УДФ-глюкуронидазы 2B7 подтверждается [5]

топирамата для двух групп носителей генотипов *1/*1 и

большей вероятностью возникновения опухолей мочевого

*1/*2 (I) и *2/*2 (II) статистически достоверно различа-

пузыря при постоянной интоксикации бензидином для но-

ëèñü (p=0,001).

сителей более активного аллеля UGT2B7 802T. Однако в на-

 

шей работе мы показали, что носителям более активного

Обсуждение

для других субстратов аллеля 802T для достижения лечеб-

 

ного эффекта требуется меньшая доза топирамата. Основ-

Однонуклеотидный полиморфизм C802T [аллель С со-

ные органы, в которых экспрессируется UGT2B7, — поч-

ответствует гистидину (H) и обозначению *1; аллель T со-

ки, печень, поджелудочная железа [7], поэтому на дан-

ответствует тирозину (Y) и обозначению *2] в первом экзо-

ный момент остается неясным, каким образом большая

не связан с изменением первичной структуры белка (ами-

эффективность глюкуронирования препарата обеспечива-

нокислота гистидин в положении 268 заменяется на тиро-

ет его большую эффективность, а более низкая эффектив-

зин) и, вероятно, влияет на свойства белка. Показано, что

ность глюкуронирования и, следовательно, выведения —

он находится в сцеплении с однонуклеотидным полимор-

более низкую эффективность и, как следствие, более вы-

физмом 161C/T в промоторной области гена UGT2B7 [10].

сокую эффективную дозу. Одним из возможных объясне-

Частота аллеля *1 варьирует от 0,5 в европейской популя-

ний может быть то, что некоторые глюкуронированные

ции до 0,08 в африканской (данные refSNP).

метаболиты могут обладать большей физиологической ак-

По данным J. Thibaudeau и соавт. [11], в случае аллель-

тивностью. Так, для морфина показано, что его метаболит

ного варианта *1 гена UGT2B7 наблюдается двукратно бо-

морфин-6-глюкуронид при интратекальном или интраце-

лее низкая активность при конъюгации 4-гидроксиэстрона

ребровентрикулярном введении обладает в 45—800 раз боль-

и 4-гидроксиэстрадиола, а при варианте *2 — большая ак-

шей обезболивающей способностью [3], а при постоян-

тивность при глюкуронировании морфина и превращении

ном приеме клиренс в плазме морфин-6-глюкуронида пре-

его в морфин-6-глюкуронид (по данным M. Sawyer [10]), а

вышает клиренс морфина [8]. Для подтверждения данной

также при глюкуронировании бензидина [5]. По другим дан-

гипотезы необходимо исследование кинетики топирамата

ным [1, 4, 6], показано участие УДФ-глюкуронозилтранс-

и его основных метаболитов.

ЛИТЕРАТУРА

1.Bhasker C.R., McKinnon W., Stone A. et al. Genetic polymorphism of UDP-glucuronosyltransferase 2B7 (UGT2B7) at amino acid 268: Ethnic diversity of alleles and potential clinical significance. Pharmacogenetics 2000; 10: 679—685.

2.Bourgeois B.F. Pharmacokinetics and pharmacodynamics of topiramate. J Child Neurol 2000; 15: Suppl 1: 27—30.

3.Christrup L.L. Morphine metabolites. Acta Anasthesiol Scan 1997;

41:116—122.

4.Court M.H., Krishnaswamy S., Hao Q. et al. Evaluation of 3'-azido-3'- deoxythymidine, morphine, and codeine as probe substrates for UDP-glucuronosyltransferase 2B7 (UGT2B7) in human liver microsomes: specificity and influence of the UGT2B7*2 polymorphism. Drug Metab Dispos 2003; 31: 9: 1125—1133.

5.Guo-fang Lin., Wei-chao Guo et al. An Association of UDP-Glu- curonosyltransferase 2B7 C802T (His268Tyr) Polymorphism with Bladder Cancer in Benzidine-Exposed Workers in China. Toxicological Sciences 2005; 85: 1: 502—506.

6.Holthe M., Rakvag T.N., Klepstad P. et al. Sequence variations in the UDP-glucuronosyltransferase 2B7 (UGT2B7) gene: identification of 10 novel single nucleotide polymorphisms (SNPs) and analysis of their relevance to morphine glucuronidation in cancer patients. Pharmacogenomics J 2003; 3: 4: 248.

7.King C.D., Rios G.R., Assouline J.A., Tephly T.R. Expression of UDPglucuronosyltransferases (UGTs) 2B7 and 1A6 in the human brain and identification of 5-hydroxytryptamine as a substrate. Arch Biochem Biophys 1999; 365: 1: 156—162.

8.Osborne R., Joel R.S., Trew D., Slevin M. Morphine and metabolite behavior after different routes of morphine administration: Demonstration of the importance of the active metabolite morphine-6- glucuronide. Clin Pharmacol Ther 1990; 47: 12—19.

9.Rosenfeld W.E., Sachdeo R.C., Faught R.E., Privitera M. Long-term experience with topiramate as adjunctive therapy and as monotherapy in patients with partial onset seizures: retrospective survey of open-label treatment. Epilepsia 1997; 38: Suppl 1: 34—36.

10.Sawyer M.B., Innocenti F., Das S. et al. A pharmacogenetic study of uridine diphosphate-glucuronosyltransferase 2B7 in patients receiving morphine. Clin Pharmacol Ther 2003; 73: 566—574.

11.Thibaudeau J. et al. Characterization of common UGT1A8, UGT1A9, and UGT2B7 variants with different capacities to inactivate mutagenic 4-hydroxylated metabolites of estradiol and estrone. Cancer Res 2006; 66: 1: 125—133.

64

ЖУРНАЛ НЕВРОЛОГИИ И ПСИХИАТРИИ, 5, 2007

Соседние файлы в папке 2007