18-24 Часа

Окраска

по Граму

Исследуемый материал (кровь) Среды накопления:

- Раппопорт (1:10), желчный бульон (20%)

М:1Б, дистиллированная вода, среды

Мюллера, Кауфмана и т.п.

2. Цель исследования – получить изолированные колонии

Визуально + 37^оС,

18-24 Часа

Окраска по Граму

Подвижность

ДДС

Среды: Эндо, Левина, Плоскирева,

Рост на среде накопления Вильсон-Блера и др.

3. Цель – изучить изолированную колонию и накопить чистую культуру

Визуально Отсев колоний

+ 37^оС,

Окраска по Граму 18-24 часа

Подвижность

ДДС Изолированные колонии Скошенный МПА Скошенный столбик сред

Ресселя, Олькеницкого,

Клиглера и др.

4. Цель – изучение биологических свойств чистой культуры бактерий

1. Биохимическая активность

Визуально ТАВК

По Граму

Ориентиров

РА

Подвижность

Чистая культура гл лак мн мл сах

на МПА или а)углеводолитическая активность

ср.Ресселя

МПБ МПБ МПБ МПС

индо сероводород лак желатин

а)протеолитическая

2. Серологические свойства

ТАВК

Ориентировочная реакция

агглютинации на стекле

Антитела Т, А, В. 1/50 1/100 1/120 1/400 1/800 1/1600… КК КС

К – контроль Развернутая (пробирочная) реакция агглютинация

3. Фагодиагностика

а) Типирование бактериофагами

Т

А

В

К

К

В Т

В жидком МПБ

А

На плотном МПА Т, А, В – б/фаги

К – физ.раствор

б) Чувствительность к поливалентному (Т, А, В) на плотной или жидкой среде

Выполняются также, но со смесью б/фагов, без их разделения.

Дополнение к 3 а

Свежевыделенные (идентифицированные) брюшнотифозные бактерии содержат Vi – антигены, к ним обнаружены 24 типа Vi – фага. Соответственно существует 24 типа брюшнотифозных Vi – штаммов. Кроме того, существует Vi – фаг I типа – универсальный для всех брюшнотифозных бактерий.

Методика фаготипирования по Vi - специфичности

1. Чистую культуру отсеять на МПБ. Выращивать 4 дня при + 37^оС.

2. 25 Капель 4-х суточной культуры раздельно раскапать на чашки с мпа. Подсушить.

3. К каждой подсушенной капле добавить один из 24-х Vi –бактериофагов, а к 25-й обязательно Vi – фаг универсального типа. Подсушить.

4. Поместить в термостат при + 37^оС на 2 часа, затем на 8-10 часов на холод (+ 4^оС) и опять в термостат на 4 часа при + 37^оС.

5. Учет результатов. Лизис культуры Vi – фагом I типа свидетельствует о её принадлежности к брюшнотифозным микробам.

Лизис одним из 24 типов фага указывает на принадлежность штамма к этому типу моно- Vi – фага.

4. Чувствительность к лекарственным веществам антибиотикам

Метод лекарственных 1/5 1/10 1/20 1/40 1/80 Контроль Контроль

дисков (диффузионный Метод серийных разведений культуры антибиотика

на МПА)

Зона отсутствия роста - Среда без помутнения говорит о чувствительности, с ним –

у чувствительных к-р, об её отсутствии.

наличие его – у устойчивых.

5. Заключение об идентификации микробного вида

На основании изученных свойств: морфологических, структурных,

тинкторальных, подвижности, биохимических (углеводо- и протеолитических) серологических (антигенный состав), чувствительности к бактериофагу – делаем заключение о виде возбудителя – идентифицируем микробный вид фаготип культур.

На основании чувствительности к лекарственным веществам и бактериофагам, даем заключение, чем надо лечить больного.

Приложение № 2

Бактериологический метод. Выделение чистой культуры при брюшном тифе из кала (копрокультура)

Метод отличается от предыдущего (гемокультура) только начальным этапом – подготовкой и характером материала и исключением накопления культуры.

Цель – получение изолированной колонии.

Посев (рассев) на ДДС

По Граму Т А В К + 37^оС