Методические указания к практической работе

Продолжительность занятия: 3 академических часа (135 минут)

Место проведения занятия: учебная аудитория

Материально-техническое оснащение – таблицы, стенды, микроскопы, микропрепараты, вакцины

Хронометраж практического занятия:

1. Вводное слово преподавателя – 5 мин

2. Проверка исходного уровня знаний (тест-контроль) – 15 мин

3. Разбор теоретических вопросов по теме – 80 мин

1. Морфологическая и культуральная характеристика шигелл

2. Антигенная структур шигелл

3. Классификация шигелл

4. Эпидемиология дизентерии

5. Патогенез дизентерии

6. Микробиологический диагноз дизентерии

7. Специфическая профилактика и терапия дизентерии

4. Практическая работа – 35 мин

Практическая работа

1. Изучение мазков из чистой культуры шигелл, окрашенных по Граму (зарисовать)

В мазке, окрашенном но Граму, видны небольшие с закругленными концами грамотрицательные палочки, расположенные беспоря­дочно.

2. Изучение роста дизентерийных и кишечных палочек на среде Плоскирева (зарисовать)

Среда Плоскирева – дифференциально-диагностическая среда_, используемая для первичного посева материала от больных дизентерией. В состав среды входят: питательная основа, лактоза, различные соли, соли желчных кислот, бриллиантовая зелень и индика­тор нейтральный красный. Присутствие бриллиантового зеленого ингибирует рост кишечных палочек, поэтому колоний их на среде вырастает немного, а если они вырастут, то на среде образуются колонии красного цвета (кишечные папочки ферментируют лактозу). Шигеллы образуют прозрачные бесцветные колонии, т.к. не разлага­ют лактозу. Рост посторонней микрофлоры подавляется присутствую­щими в среде солями желчных кислот и бриллиантовым зеленым.

3. Изучение пестрых рядов с посевом шигелл по таблице (записать в тетрадь табл.4)

Таблица 4

Ферментативные свойства шигелл

Пестрый ряд Вид шигелл	Ферментация				Образование
	Лактоза	Глюкоза	Маннит	Сахароза	Индола	Сероводорода
Шигелла дизентерии	-	К	-	-	-	-
Шигелла Флекснера	-	К	К	-	+	-
Шигелла Зонне	+ К через 7–10 дней	К	К	+ К через 7–10 дней	-	-

Примечание: К – ферментация углевода до кислоты; (-) – отсутствие ферментации или признака

Ферментативная активность определена на жидких средах Гисса. Кроме питательной основы в состав среды добавлен углевод (0,5–1,0%) и индикатор бромкрезолпурпур. Исходный цвет среды фиолетовый. При ферментации углевода до кислоты рН среды сдви­гается в кислую сторону, индикатор становится желтым и вся сре­да желтеет. При отсутствии ферментации среда сохраняет исходный цвет. Для улавливания газа в среду погружены поплавки. Образо­вание сероводорода и индола определяют индикаторными бумажками. При образовании индола индикаторная бумажка, пропитанная насы­щенным раствором щавелевой кислоты, розовеет. При образовании сероводорода индикаторная бумажка, пропитанная уксуснокислым свинцом, чернеет. Если индол и сероводород не образуются, индикаторные бумажки не изменяются.

4. Изучение роста различных микроорганизмов и дизентерийных бактерий на среде Олькеницкого (зарисовать рост шигелл на среде)

Среда Олькеницкого представляет собой комбинированную среду. Она относится к дифференциально-диагностическим средам, со­держит кроме питательной основы 1% лактозы, 1% сахарозы, 1% мо­чевины, 0,1% глюкозы, соль Мора и гипосульфит натрия, индикатор ВР (водный голубой и розоловую кислоту). При посеве на среду Олькеницкого культуры кишечной палочки, которая ферментирует лактозу и глюкозу до кислоты и газа, среда Олькеницкого посинеет в столбике и в скошенной поверхности. Газообразование проявляется разрывами среды пузырьками газа. При посеве протея на среду Олькеницкого, который разлагает мочеви­ну и резко сдвигает рН среды в щелочную сторону, вся среда (и в столбике и скошенная поверхность) становится оранжевой. При посеве шигелл на среду Олькеницкого, которые в первые сутки раз­лагают только глюкозу, среда посинеет в столбике, скошенная по­верхность цвета не изменит.

5. Изучение схемы патогенеза дизентерии (установить связи на схеме 1, оформить протокол):

Схема 1

Схема патогенеза дизентерии

Возбудитель	Входные ворота слизистые оболочки ЖКТ
	Желудок
		Гибель шигелл
Толстая кишка	Тонкий кишечник
		Эндотоксин
Инвазия в эпителиальные клетки	Гастроэнтерит
	Колит	Интоксикация

6. Изучение реакции непрямой гемагглютинации (записать схему постановки в тетрадь)

РНГА применяется для обоснования диагноза при стертых фор­мах заболевания, характеризуется большей чувствительностью, чем реакция агглютинации. Ставят реакцию в пробирках или полистироловых пластинах. Сыворотку больного разводят от 1:100 до 1:280. К 0,5 мл каждого разведения сыворотки добавляют по 0,25 мл эритроцитарного диагностикума. Пробирки или пластины встряхивают и помещают на 2–2,5 часа в термостат при 37⁰С. Обязательны контроли диагностикума в физиологическом растворе, и со стандартной сывороткой. Эритроцитарный диагностикум представляет собой 1% взвесь формализированных и сенсибилизированных антигенами из шигелл эритроцитов барана или человека (I группы); учет прово­дят по четырехбальной системе в плюсах:

(++++) – все эритроциты агглютинированы и покрывают дно лунки

равномерно;

(+++) – агглютинированы почти все эритроциты, но на их фоне име­ется малозаметное кольцо из неагглютинированных эритро­цитов;

(++) – наряду с равномерным агглютинатом на дне лунки имеется осадок из неагглютинированных эритроцитов;

(+) – большинство эритроцитов не агглютинировано и осело в ви­де колечка в центре дна лунки

(-) – признаков агглютинации нет. Эритроциты осели в виде пу­говки в центре лунки.