Видовая идентификация микобактерий туберкулезного комплекса

Видовая идентификация микобактерий туберкулезного комплекса должна проводиться во всех лабораториях второго и третьего класса. Наиболее актуальными представителями этого комплекса, являются М. tuberculosis, M. bovis и M. bovis-BCG. Их видовая идентификация основана на фенотипической характеристике и ряде биохимических тестов (табл.22).

Таблица 22

Дифференциальная диагностика микобактерий туберкулезного комплекса и нетуберкулезных микобактерий

Вид микобактерий Свойство культуры	M. tuberculosis	M. bovis НТМБ
Появление видимых колоний в течение 1 недели	–	±
Пигментация колоний	–	±
Строгие мезофиллы (рост только при 35–37 °С)	+	–
Рост на среде с салициловым натрием	-	+
Рост на среде с ПНБК	-	+

Для дифференциальной диагностики микобактерий туберкулезного комплекса применяется:

1. Реакция восстановления нитратов в нитриты. Сущность метода заключается в определении активности нитратредуктазы по количеству восстановленного из нитрата нитрита, который дает цветную реакцию (желтое или красное окрашивание в зависимости от применяемого метода). Используются следующие методы:

- метод определения нитратредуктазы по Гриссу (для определения способности микобактерий восстанавливать нитраты их культуру выращивают на плотной яичной среде Левенштейна-Йенсена с добавлением нитрата калия или нитрата натрия в количестве 1 г на 1 л готовой среды).

- метод восстановления нитратов по Tsukamura (используется для дифференциации МТБ, M. Bovis и некоторых видов НТМБ, которые обладают морфологически сходными колониями, одинаковой скоростью роста и способностью к пигментообразованию. МБТ, M. kansasii, M. szulgai и М. fortuitum имеют положительную реакцию, M. bovis и M. chelonae – отрицательную);

- метод восстановления нитратов по Virtanen

2. Определение ниацина (ниациновый тест).

Все микобактерии продуцируют ниацин (никотиновую кислоту). Большинство видов микобактерий содержат фермент, который превращает ниацин в никотинамидадениндинуклеид. M. tuberculosis блокирует этот фермент, и ниацин аккумулируется в культуре и в среде, на которой они растут, в большом количестве. Реакция основана на том, что никотин вступает в реакцию с цианистым бромидом и анилином и дает желтое окрашивание.

3. Определение потребности в кислороде. Известно, что M. bovis относится к микроаэрофилам. Уменьшенная потребность в кислороде проявляется при росте на полужидкой среде Лебека. МБТ дают на этой среде поверхностный пленочный рост, а M. bovis растут, отступив на 1 см вглубь от поверхности среды в виде беловатого облачка.

4. Определение способности роста культуры на среде с гидразид тиофен-2-карбоксиловой кислотой. Метод используется для дифференциальной диагностики микобактерий туберкулезного комплекса. M. tuberculosis резистентны к ТСН и дают хороший рост на этой среде. M. bovis и M. bovis-BCG чувствительны к ТСН и не растут на среде, содержащей это соединение.

5. Определение способности роста культуры на среде с никотинамидом. M. tuberculosis чувствительны к никотинамиду. M. bovis и вакцинный штамм M. bovis-BCG обладают естественной резистентностью к никотинамиду. На этом свойстве основана дифференциация туберкулезного комплекса.

6. Определение чувствительности к циклосерину. У всех штаммов M. bovis-BCG отмечается устойчивость к 30-50 мкг/мл циклосерина. Эта биологическая особенность вакцинного штамма BCG является важным диагностическим тестом в его идентификации.

Дифференциация микобактерий туберкулезного комплекса представлена в таблице 23.

Таблица 23