1. Биологический метод

Испытание проводят на кроликах обоего пола. Каждый кролик содержится в отдельной клетке в помещении с постоянной температурой. Колебания температуры не могут превышать 3°С. При уборке клеток и взвешивании животных их оберегают от возбуждения (шум, резкие движения).

В течение трех суток перед испытанием у каждого кролика измеряют температуру. Кролика проверяют на реактивность путем внутривенного введения 10 мл/кг 0,9% стерильного непирогенного раствора NaCl. В случае изменения температуры у кроликов более чем на 0,4°С животное считается непригодным для опыта. Во время опыта температура помещения постоянная, колебания не превышают 2° С.

Для испытания отбирают не менее 2 флаконов или ампул от каждой серии, содержащей от 1000 до 10000 флаконов или ампул. Испытываемое ЛС вводят кроликам в ушную вену.

Раствор вводят не позднее чем через 15-30 мин после последнего измерения температуры. Последующие измерения температуры при внутривенном введении испытуемого раствора проводят три раза с промежутками в одни час

Нормативы: воду для иньекций или раствор ЛС считают непирогенным, если сумма повышений темпуратуру у трех кроликов меньше или равна 1,43°С

2. Спектрофотометрический метод контроля апирогенности дистиллированной воды и 0,9% раствора натрия хлорида.

Метод предполагает оценку апирогенности на основе адсорбционной спектроскопии с использованием отечественного прибора СФ-46. В качестве стандарта применялись липополисахарид, образующий в процессе жизнедеятельности микроорганизмов Pseudomonas aeruginosa, выпускаемый промышленностью в виде коммерческого препарата «пирогенал». В качестве растворителя использовали деионизированную воду после дистилляции и предварительного контроля апирогенности биологическим методом на кроликах.

На основании полученных результатов исследований установлено, что отсутствие пирогенной реакции исследуемой воды соответствует показателям оптической плотности прибора, не превышающий 0,005 ЕД. Однако, учитывая, что оценка пирогенности является жизненно важным показателем, и учитывая ошибку прибора, целесообразно считать критерием отсутствия пирогенности нулевой показатель прибора.

3. Бактериологический метод контроля апирогенности дистиллированной воды и 0,9% раствора NaCl.

Стерильная вода считается апирогенной, если в 1 мл нестерильной воды содержится не более 10 пирогенных микроорганизмов, а общее количество микробных клеток не превышает 50. При введении больным инъекционных растворов, объем которых не превышает 100 мл, допустимо содержание в 1 мл раствора 50 пирогенных микробных клеток, а общее количество не должно превышать 100. В основе метода, лежит процесс образования характерного микроорганизмами, обладающими пирогенными свойствами в присутствии 3%-ого раствора гидроксида калия.

Методика анализа. В две чашки Петри (78,5 см²) с МПА вносят 0,5 мл исследуемой пробы воды и равномерно распределяют ее шпателем по поверхности питательной среды. Посевы выращивают в термостате при 30-35°С в течение 5 суток. Со всеми образующимися колониями на МПА проводят реакцию гелеобразования. С этой целью на предметное стекло наносят 3 капли 3%-ого раствора гидроксида калия бактериологической петлей. 1 капля используется для контроля возможности гелеобразования питательной среды, а в 2 другие вносят бактериологической петлей колонии микроорганизмов, выросших на МПА. Если с течение минуты перемешивания микробных клеток в капле гидроксида калия образуются нити и суспензия тянется за бактериологической петлей, то это указывает на образование геля и свидетельствует о наличии свойств исследуемо колонии

Нормативы: общее количество микроорганизмов (колоний) в 1 мл исследуемого раствора не должно превышать 50, причем, с пирогенными свойствами (положительная реакция гелеобразования) должно быть не более 10 микробных клеток (колоний)

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТА

Методы анализа ЛС на пирогенность

1.______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2.______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3.______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Методика исследования____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Нормативы______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________