Добавил:

Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.

Вуз:

Тюменский государственный медицинский университет

Предмет:

Микробиология

Файл:

microba_1s / тема №3 / занятие №11.docx

Скачиваний:

Добавлен:

10.03.2016

Размер:

54.29 Кб

Скачать

☆

1 / 21 2 > Следующая >>>

ЗАНЯТИЕ №11

«МИКРОФЛОРА ОРГАНИЗМА ЧЕЛОВЕКА»

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

Изучить микрофлору организма человека, ее функции. Причины и условия формирования дисбактериозов.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

Нормальную микрофлору организма человека, ее функции.
Факторы, оказывающие влияние на количественный и качественный состав нормальной микрофлоры организма человека.
Методы изучения качественного и количественного состава нормальной микрофлоры, критерии оценки.
Причины и условия возникновения дисбактериозов.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

проводить взятие материала для исследования микрофлоры организма человека;
проводить оценку качественного и количественного состава микрофлоры.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ИМЕТЬ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ

об особенностях взаимоотношений между отдельными микроорганизмами в различных биотопах организма человека (синергизм, антагонизм и др.).

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

Работа № 1. Микрофлора кожи

Цель: оценить результаты посевов с кожи рук методом отпечатков на МПА и среде Эндо.

а) Среда МПА

Описать культуральные свойства колоний, выросших на МПА. Результаты внести в таблицу.

Тесты	Колонии № 1 № 2
Размер
Форма
Характер края
Поверхность
Цвет
Структура
Прозрачность
Вязкость

• из описанных колоний приготовить мазки, окрасить по Граму. Зарисовать.

№ 1

№2

Результат:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

б) Среда Эндо

Изучить посевы на среде Эндо с целью выявления кишечной палочки (lac ⁺ колонии). Отметить наличие или отсутствие фекального загрязнения.

Результат:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Виды микрофлоры:

1.___________________________________________________________________________

2.___________________________________________________________________________

Состав микрофлоры кожи:

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Методы санитарно-биологического исследования кожи:

1___________________________________________________________________________

2___________________________________________________________________________

Определение ОМЧ:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Определение кишечной палочки:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 2. Микрофлора ротовой полости

Цель: изучить микрофлору зубного налета.

Препарат

Морфология

Окраска

В резидентную группу входят:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

В факультативную группу входят:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Роль слюны в поддержании постоянствамикрофлоры_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Методы исследования микрофлоры ротовой полости

1.___________________________________________________________________________

2.___________________________________________________________________________

3.___________________________________________________________________________

Работа № 3. Микрофлора желудочно-кишечного тракта

Цель: изучить микрофлору толстого кишечника

Задача:

В бактериологическую лабораторию доставили материал (кал) для исследования на дисбактериоз. Сделаны посевы на дифференциально-диагностические среды: Эндо, Калины, Блоурокка. Сделать вывод о качественном и количественном составе микрофлоры толстого кишечника. Рекомендовать эубиотики при выявлении дисбактериоза.

а) Описать культуральные свойства колоний.

Среда Эндо

Среда Калины

Среда Блоурокка

б) По готовым мазкам, приготовленным из выросших колоний описать морфологические и тинкториальные свойства микроорганизмов. Окраска по Граму.

Со среды Эндо

Со среды Калины

Со среды Блоурокка

Результаты микробиологического исследования кала:

ГОУ ВПО ТюмГМА, Многопрофильная клиника Бактериологическая лаборатория Микробиологическое исследование фекалий на дисбактериоз (ост 91500. 11.0004-2003)

№ пробы первичный, повторный (подчеркнуть)

от « »_ 20 г.

Ф.И.О. пациента Петров П.П.

возраст 24 года

Диагноз

Откуда направлен_

Микроорганизмы	Количество микроорганизмов в 1 г				р. фекалий
	норма до 1 г	Норма от 1 г до 60л	норма старше 60л	У пациентов
Патогенные энтеробактерии	нет	нет	нет
Е. tnli с нормальной ферментативной активностью	10'-10⁸	10'- 10⁸	10'- 10^s	10⁶
Е. coli лактозонегативные	< 10'	< 10⁵	< 10³
Е. coli гемолитические	нет	Нет	нет	10³
Другие условно-патогенные энтеробактерии: а) б) в)	<10⁴	<10⁴	< 10⁴	<10⁴
Неферментирующие бактерии	< 10³	<10⁴	<10⁴
Энтерококки	10⁵-10'	10'-10"	10⁶ - 10'	10⁵
Стафилококк золотистый	нет	Нет	нет
Стафилококки (сапрофитный, эпидермальный) негемолизирующие	<10⁴	<10⁴	<10⁴	≤10³
Бифидобактерии	10¹⁰-10"	10⁹-10¹⁰	10⁸-10"	10⁷
Лактобактерии	10⁶- 10'	10⁷- 10⁸	10⁶-10'	10⁶
Лактострептококки	10⁷- 10⁸	10⁷- 10⁸	10⁷- 10⁸	10⁸
Грибы	≤ 10³	≤10⁴	≤10⁴	≤10⁴
Клостридии	≤ 10³	≤ 10⁵	≤ 10⁶	≤10⁵
Прочие микроорганизмы

Заключение:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

« » 20 г. Врач______________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

в) Объяснить назначение и механизм действия эубиотиков с учетом изменений качественного и количественного состава микрофлоры, классифицировать предложенные препараты. Результаты внести в таблицу.

Эубиотики (пробиотики) - бактериальные препараты, содержащие живые антагонистически действующие микроорганизмы. Их используют для угнетения патогенных и условно-патогенных микробов и лечения дисбактериоза.

Механизм действия пробиотиков (эубиотиков) обусловлен:

1. лечебным эффектом за счет антагонистического действия препаратов на патогенные и условно-патогенные микроорганизмы;

2. иммунотропном действием за счет стимуляции макрофагов, нормализации соотношения Т-хелперов, Т-супрессоров, активации Т-киллеров, индукции интерферона;

3. корригирующим действием за счет стимуляции местных репаративных процессов в кишечнике, обеспечения организма витаминами групп В и К, полноценного переваривания пищи.

Схема описания пробиотиков:

Название препарата…………………

Классификационное положение: пробиотик

Действующее начало: метаболиты - бактериоцины

Получение: методом лиофильной сушки живых представителей нормальной

микрофлоры организма человека

Применение: для коррекции дисбактериоза

Способ применения: перорально

Название
Классификационное положение
Действующее начало
Принцип получения
Применение
Способ применения

Название
Классификационное положение
Действующее начало
Принцип получения
Применение
Способ применения

Название
Классификационное положение
Действующее начало
Принцип получения
Применение
Способ применения

Микрофлора желудка содержит____________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Микрофлора тонкого кишечника содержит____________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Микрофлора толстого кишечника содержит__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Нормальная микрофлора кишечника на 92-95% состоит из____________________________

Облигатная часть микрофлоры кишечника представлена:________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факультативная часть микрофлоры кишечника представлена:________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Транзиторная часть микрофлоры кишечника представлена:________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Методика исследования фекалий_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Пробиотики- это__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа№4. Урогенитальная микрофлора

Цель: изучить микрофлору влагалищного секрета по готовым препаратам-мазкам. Окраска по Граму. Результаты внести в таблицу.

Критерии чистоты влагалища

Степень чистоты влагалища

III

1. палочка Додерлейна

2. кокки

3. Гр- палочки

4. грибы – кандида

5. микоплазмы

6. простейшие

7. клетки плоского эпителия

8. лейкоциты

Микрофлора уретры мужчин представлена_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Микрофлора влагалища представлена_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Степени чистоты влагалища:

1.___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ 2.___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________3.___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________4.___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ СПРАВКА

к Работе №1

Кожа, особенно ее открытые части, обсеменены различными микробами. Так, во время мытья тела человека с кожи смывается от 85 до 120 млн. микроорганизмов. Микрофлора кожи складывается не только из микробов, находящихся на поверхности, но и в глубине кожи (волосяные мешочки, протоки сальных и потовых желез).

На грязной коже многие микробы способны не только сохранять жизнеспособность, но и размножаться. На поверхности чистой кожи микроорганизмы быстро гибнут.

Питание микробов кожи обеспечивается отмершими клетками эпителия, а также выделениями потовых и сальных желез. Неповрежденные кожные покровы для большинства микроорганизмов, в том числе и патогенных, непроходимы. При нарушении же целостности кожных покров, а также при снижении общей резистентности микроорганизмов на коже могут возникать различные заболевания: гнойничковые элементы, инфицированные мацерации, вызванные бактериями, грибками, вирусами.

Микрофлору кожи составляют микроорганизмы как постоянно живущие на ней, так и разнообразная заносная микрофлора, попадающая из внешней среды - из воды, воздуха, почвы, при соприкосновении с грязными объектами внешней среды или полостями организма (рот, кишечник, полость носа и др.).

На поверхности кожи обнаруживаются кокки (стафилококки, стрептококки), чаще непатогенные (сарцины, дифтероиды, бациллы, дрожжевые и дрожжеподобные грибы).

Наиболее часто (80-90%) на коже определяется эпидермальный стафилококк -staphylococcus epidermidis, - золотистый и лимонно- желтый стафилококк.

Санитарно-бактериологическое исследование кожи проводится двумя методами:

посев отпечатков пальцев на чашке с МПА или специальными средами (например, кровяной агар) с последующим макроскопическим и микроскопическим изучением выросших колоний;
посев смывов с рук при помощи тампона, смоченного в стерильном физ. растворе (8-10 мл), ополаскивают его и смывают (1 мл), исследуют на ОМЧ и на наличие кишечной палочки.

Определение общего микробного числа - ОМЧ. 1 мл смыва вносят в стерильную чашку Петри, затем заливают ее 12 - 15 мл расплавленного и остуженного до 45°С МПА, перемешивают, после застывания агара посев инкубируют 24 - 48 часов, при температуре 37°С. Производят подсчет выросших колоний на поверхности чашки и в глубине агара при помощи лупы.

Определение кишечной палочки. Оставшееся количество смыва помещают в пробирку с 5 мл среды Кесслера и помещают в термостат при температуре 43°С, на следующие сутки высеивают на среду Эндо. В случае появления типичных для кишечной палочки колоний производят идентификацию кишечной палочки и делают вывод о фекальном загрязнении кожи.

Среда Кесслера - содержит желчь, генциан фиолетовый, пептон, лактозу - E.coli ферментирует лактозу с образованием газа, скапливающегося в поплавке.

к Работе №2

Микрофлора полости рото-носо-глотки разнообразна и многочисленна, здесь обнаруживается более 100 видов микроорганизмов. Особенно много их локализуется в зубном налете - в 1г сухой массы его содержится около 250 млн. микробных клеток.

В ротовой полости создаются благоприятные условия для жизнедеятельности микроорганизмов - это щелочная реакция слюны, пищевые остатки, термостатная температура и влажность. В различных участках полости рта микрофлора не одинакова. На боковых поверхностях рта микробов мало. Поверхность языка, особенно задней его части, а также задней части носоглотки содержит большое количество микроорганизмов. Здесь преобладают стрептококки, сарцины, спирохеты, веретенообразные палочки, стафилококки и др. Большое разнообразие микрофлоры наблюдается между зубами, в криптах и лакунах миндалин, где из остатков эпителия, детрита и бактерий образуются тонзиллярные пробки, однако преобладают стрептококки и диплококки. Микрофлору полости рта можно разделить на постоянную - резидентную и факультативную.

Резидентную группу составляют стрептококки (Str. Salivarius и др.), непатогенные стафилококки, диплококки, коринебактерии, лактобациллы, вейлонеллы, трепонемы (Тг. Buccalis - наиболее распространённая), дрожжеподобные грибы (Candida aldicans), актиномицеты, микоплазмы, простейшие.

Среди факультативных микроорганизмов встречаются энтеробактерии (роды Escherichia, Klebsiella, энтеробактерии протея), синегнойная палочка, спорообразующие - бациллы, клостридии, а также - пептострептококки и пептококки. Некоторое время в ротовой полости могут персистировать вибрионы, спирохеты, дифтерийная палочка, менингококки и др.

В поддержании количественного и качественного постоянства нормальной микрофлоры полости рта главную роль играет слюна, обладающая антибактериальной активностью за счёт содержания в ней ферментов (лизоцим, лактоферрин, пероксидаза, нуклеаза) и секреторных иммуноглобулинов. Индивидуальные колебания в составе микрофлоры полости рта зависят от возраста, гигиенических навыков, диеты, общей резистентности организма и резистентности слизистых оболочек, наличие дефектов зубов.

Нормальная микрофлора полости рта обеспечивает её защиту за счёт конкуренции, антагонизма по отношению к патогенным микроорганизмам, таким как дифтерийный возбудитель, патогенные стафилококки и стрептококки, менингококки, условно-патогенные и патогенные грибы. В случае же нарушения микрофлоры, то есть возникновение дисбактериоза, патогенные и условно-патогенные микробы могут вызывать заболевания органов полости рта или обеспечивать так называемую нисходящую инфекцию, т.е. миграцию микроорганизмов из полости рта в глотку, гортань, желудок, трахею, бронхи, лёгкие.

Полученный материал используют:

а) для микробиологического исследования - готовят препараты-мазки, красят по Граму, по Леффлеру, по Нейссеру, по Циль-Нильсену, микроскопируют, по морфологическим свойствам определяют возбудителей (патогенные и условно-патогенные стрептококки, стафилококки, дифтерийная палочка, менингококки, туберкулёзная палочка и др.);

б) для микробиологического посева и последующей идентификации микроорганизмов.

Ход исследования:

а) стерильной палочкой взять материал из межзубного пространства;

б) приготовить препарат-мазок; окрасить по Граму (препарат № 1);

в) приготовить препарат - мазок, окрасить по Бурри - Гинсу, отметить наличие капсулы (препарат № 2);

г) микроскопировать;

д) результаты внести в таблицу.

к Работе №3

Микрофлора желудка немногочисленна, здесь встречаются сардины, кислотоустойчивые и спорообразующие бактерии, дрожжевые грибы. Но иногда через желудок проходят патогенные микроорганизмы.

Микрофлора тонкого кишечника также не многочисленна (благодаря действию ферментов), в этой полости обнаруживаются лактобактерии, дрожжевые и дрожжеподобные грибы.

Микрофлора толстого кишечника: в толстом кишечнике регистрируется самая разнообразная по составу микрофлора.

Биомасса микроорганизмов, заселяющих кишечник взрослого человека, составляет 2,5-3 кг и включает в себя до 450 видов.

Нормальная микрофлора кишечника на 92-95% состоит из строго анаэробных видов, остальная часть - аэробы.

Вся микрофлора кишечника подразделяется на:

1) облигатную её часть - это микроорганизмы, постоянно входящие в состав нормальной микрофлоры и играющие очень важную позитивную роль в макроорганизме;

2) факультативная часть, к которой относятся микроорганизмы, достаточно часто встречающиеся у здоровых людей, но иногда, в случаях снижения общей резистентности организма человека, эти микробы могут быть условно-патогенными и выступать в качестве этиологических факторов заболеваний;

3) транзиторная часть микрофлоры, которая носит случайный характер, представители этой микрофлоры неспособны к длительному пребыванию, персистированию в кишечнике. В этой группе могут быть, в небольших количествах, и возбудители инфекционных заболеваний.

К резидентной микрофлоре относятся как условно-патогенные, такие как представители семейства энтеробактерии (протеи, серрации, клебсиеллы и др.), стафилококки, простейшие (псевдомонада, кишечная амеба), энтеровирусы, так и патогенные микроорганизмы, такие как, атипичные эшерихии (лак-), гемолитические стафилококки, вирулентные дрожжеподобные грибы.

Микробиологическое исследование фекалий производится с целью определения состояния нормальной микрофлоры или для исключения дисбактериоза кишечника, показания для него разнообразны - предоперационное обследование больных, кишечные инфекции неясной этиологии, дисфункции кишечника после антибиотикотерапии, уточнение диагноза и др.

Методика микробиологического исследования фекалий с целью определения нормальной микрофлоры и исключения дисбактериоза кишечника.

Забор фекалий производится стерильной стеклянной палочкой в стерильную взвешенную посуду, забирают теплые нативные фекалии, доставляют в лабораторию не позднее чем через 2 часа

Исследуемые фекалии помещают в тиогликолевый буфер (способствующий сохранению как аэробный, так и анаэробной микрофлоры), затем готовят десятикратное разведение надосадочной жидкости в физиологическом растворе и высеивают на элективные и дифференциально-диагностические среды, соответственно группам выделяемых микроорганизмов, как аэробов, так и анаэробов. Посевы на факультативные анаэробы инкубируют в обычном термостате при 37°С

Из выросших подозрительных колоний выделяют чистую культуру микроорганизма, проводят полное изучение всех свойств (культуральных, морфологических, биохимических, патогенных и др.), идентифицируют до вида, подвида, типа.

Идентификацию проводят как для выделенных патогенных и условно-патогенных возбудителей, так и представителей нормальной микрофлоры кишечника.

Одновременно на чашках подсчитывают количество выросших колоний определённого рода, вида и производят определение микроорганизмов в 12 г фекалий, при подсчёте учитывают посевную дозу и разведения в буфере, из которых сделан высев.

Количество обнаруженных микроорганизмов выражают в десятичных логарифмах.

Полученные результаты сравнивают со справочными данными и делают заключение о состоянии микрофлоры кишечника.

Характеристика культуральных и морфологических свойств представителей нормальной микрофлоры кишечника человека.

1. Энтерококки (род Enterococcus), аэробы. В настоящее время определяют 2 вида энтерококков - 1) Str. fecalis и 2) Str. faecium.

Культивирование энтерококков проводится на среде Калины. Среда Калины - это ДДС для энтерококков, готовится на основе 1,5% ПМА, содержит глюкозу, дрожжевой диализат, молоко, полимиксин, краску кристаллический фиолетовый (водный раствор). На этой среде 2 вида энтерококков различаются по культурным свойствам - первый вид даёт мелкие или средних размеров колонии яркие, красно-вишнёвые, второй вид -розовые, розовато-серые колонии. Морфологические свойства энтерококков - в мазке видны короткие цепочки Гр+ кокков, иногда вытянутой формы или единичные кокки.

2. Бифидобактерии.

Это Гр+ палочки, строгие анаэробы. Занимают доминирующее положение в облигатной микрофлоре кишечника здорового человека, обладают высокой антагонистической активностью. Своё название получили из-за характерного разветвления на конце палочек - бифиркаций. Культивирование проводится на специальной питательной среде Блоурокка, в пробирках в анаэробных условиях. Среда Блоурокка готовится следующим образом - к печёночному отвару добавляют пептон, поваренную соль, мясопептонный агар, лактозу, солянокислый цистеин, среду стерилизуют и регенерируют кипячением в течение 40-45 минут.

Культуральные свойства бифидобактерии: На среде Блоурокка, в толще среды, бифидобактерии дают характерный придонный рост - в виде "точек с хвостиками" или маленьких комочков. Морфологические свойства бифидобактерии.

В мазке регистрируются характерные Гр+ палочки с разветвлёнными или утолщёнными концами, расположенные в виде римских пятёрок или скоплений, напоминающих китайские иероглифы.

к Работе №4

Микрофлора урогенитальной системы

Почки, мочеточники и моча в мочевом пузыре в норме стерильны. На наружных половых органах мужчин и женщин обнаруживаются микобактерии смегмы (Mykobakterium smegmalis) непатогенные, иногда патогенные стафилококки, микрококки, коринебактерии, микоплазмы, но пейзаж микроорганизмов однообразен, включает 2-3-4 вида. Уретра женщин обычно стерильна. Уретра мужчин имеет микрофлору -немногочисленную - непатогенные кокки, сапрофита, дрожжи. Микрофлора влагалища разнообразна, но не постоянна, зависит от многих причин, в том числе и от функции яичников, от возраста и общей резистентности организма, а также от уровня гликогена в клетках эпителия влагалища и рН влагалищного секрета. Сразу после рождения женщины происходит заселение влагалища лактобактериями, затем появляется кокковая флора. В зрелом возрасте, кроме лактобактерий и непатогенных кокков, появляются непатогенные стрептококки, клебсиеллы, бактероиды, анаэробы, микоплазмы, дрожжевые грибки, грибы Candida. Но основным и важнейшим представителем нормальной микрофлоры влагалища является Вас. vaginalis (палочка Додерлейна), влагалищная палочка. Влагалищные палочки имеют двоякую форму - одни из них крупные, грамположительные, с резко обрубленными концами, другие - тонкие, изящные, с заострёнными концами, располагаются по одиночке или попарно. Микроорганизмы неподвижны, спор не образуют, капсул не имеют, факультативные анаэробы. Наилучшей средой для культивирования является печёночный бульон с добавлением 2% виноградного сахара и кусочков печени или сахарный бульон, образуют S- и R- формы колоний. Обладают довольно выраженной биохимической активностью. В некоторых случаях, в микрофлоре влагалища появляются и вызывают заболевания такие микробы как патогенные или условно-патогенные стафилококки, стрептококки, синегнойные палочки, клебсиеллы, хламидии, а также микробные ассоциации. Хламидии, вызывающие распространённое в настоящее время хламидиоз, не являются представителем нормальной микрофлоры влагалища. Обнаружение хламидии в соскобе или мазке всегда говорит о патологическом процессе, даже в том случае, если у женщины нет клиники - в этом случае имеет место персистенция- до начала появления клинической болезни.

Поражения органов урогенитального тракта, вызванные микоплазмами, хламидиями, клебсиеллами, сложны как в диагностике, так и в лечении. Трудности в диагностике вызваны особенностями строения и культивирования микроорганизмов - так, микоплазмы и хламидии размножаются внутриклеточно, а клебсиеллы имеют капсулу и требуют особых методов окраски.

Микробиологическое изучение микрофлоры влагалища включает 2 метода исследования - микроскопическое и микробиологическое, с выделением чистой культуры возбудителей.

Микроскопическое исследование состоит в определении степени чистоты влагалищного секрета (схема Гейрлина) в препарате-мазке или соскобе, взятым стерильным тампоном или специальным инструментом.

1 / 21 2 > Следующая >>>

Соседние файлы в папке тема №3

#
10.03.201639.22 Кб43занятие №10.docx
#
10.03.201654.29 Кб29занятие №11.docx
#
10.03.201633.51 Кб87занятие №12.docx
#
10.03.201630.49 Кб30занятие №13.docx
#
10.03.201688.46 Кб44занятие №9.docx