2. Определение общего микробного числа грибов

Испытание проводят двухслойным агаровым методом, используя среду Сабуро. Посевы инкубируют в течение 5 суток при температуре от 20 до 25°С. Через 7 часов и окончательно через 5 суток подсчитывают общее число колоний дрожжевых и плесневелых грибов находят среднее значение их количества и, умножая его на показатель разведения (т.е на 10), вычисляют число грибов в 1 г (мл) образца. В случае, если число колоний грибов на чашке превышает 300, делают ряд дальнейших разведений образцов. На чашке учитывают все колонии грибов, даже если их число меньше 30.

3. Определение санитарно-показательных микроорганизмов

В нестерильных ЛС не допускается наличие бактерий семейства Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus.

Наличие данных групп микроорганизмов определяется путем посева на дифференциально-диагностические среды.

Нормативы:

Сапрофитных бактерий не более 10 000 в 1 гр, плесневых и дрожжевых грибов не более 100, отсутствие БГКП и золотистого стафилококка

Среды м/о	Эндо	Висмут-сульфит агар	Солевой агар с маннитом	Д\д среда для P. aeruginosa
Сем. Enterobacteriaceae	малиновые колонии с металлическим блеском	черные с металл, блеском или зеленовато-бурые, светло-зеленые	-	-
Staphylococcus aureus			желтые колонии с желтой зоной вокруг
Pseudomonas aeruginosa	-	-	-	зеленоватые флюоресцир. колонии

к Работе №3

Лекарственные средства для инъекций и глазные капли должны быть стерильные. Стерильность ЛС достигается соблюдением необходимых санитарно-гигиенических условий изготовления и режима стерилизации.

Для контроля стерильности ЛС применяют тиогликолевую и жидкую среду Сабуро. При этом используют метод мембранной фильтрации или метод прямого посева

1. Метод прямого посева.

Продолжительность инкубации посевов в обеих питательных средах составляет 14 суток. В случае помутнения питательной среды после внесения в нее испытуемого препарата следует в интервале от 3 до 7 суток после посева сделать пересевы на свежие аналогичные среды, инкубировать их при соответствующей температуре 14 суток от начала испытания.

2. Метод мембранной фильтрации.

При определении стерильности ЛС с антимикробным действием и ЛС разлитых в емкости более 100 мл используют этот метод.

Испытуемое ЛС растворяют или суспензируют в соответствующей стерильной жидкости и полученный раствор пропускают через стерильную мембрану, входящую в фильтрационную установку. При фильтрации ЛС с антимикробным действием производят последующее отмывание мембраны от ЛС любым растворителем, не подавляющим рост микроорганизмов (стерильный 0,9% NaCl), 3-5 порциями по 100 мл. После отмывания мембрану разрезают стерильными ножницами пополам и одну половину помещают в колбу со 100 мл тиогликолевой среды, вторую - в колбу со 100 мл среды Сабуро. Питательные среды с помещенными в них фильтратами (от 30 до 35°С - тиогликолевая среда, от 25 до 25°С - среда Сабуро) инкубируют 7 суток. Контроль полноты отмывания фильтрата (параллельно опыту) при испытании антибактериального ЛС в колбу с тиогликолевой средой и погруженную в нее половину фильтра вносят суточную культуру S.aureus, при испытании противогрибкового ЛС в колбу со средой Сабуро и фильтром вносят культуру Candida albicans из расчета 100 микробных клеток на весь объем среды. Инкубация производится при соответствующих температурах и времени. Наличие тест-микроорганизмов в контрольных колбах через 3 суток свидетельствует о достаточной полноте отмывания мембран от ЛС.

Для контроля стерильности условий, в которых проводят испытание, фильтруют растворитель без испытуемого ЛС с последующим воспроизведением операции.

Результат оценивается по появлению мутности, пленки, осадка.

Выявленный рост микроорганизмов подтверждают микрокопированием мазков, окрашенных по Граму. Препарат считают удовлетворяющим требованиям испытания при отсутствии роста микроорганизмов. При обнаружении испытания повторяют на таком же количестве образцов как и в первый раз. В случае роста микроорганизмов при повторном посеве, морфологически сходным с микроорганизмами, выявленными в первичном посеве, испытуемый препарат считают нестерильным.

к Работе №4