5. Подготовка глубокозамороженной спермы к осеменению

Материал и оборудование: глубокозамороженная сперма, водяная баня (биологический термостат, оттаива-тель), микроскопы, термостолики, предметные и покровные стекла, 2,9%-ный раствор натрия лимоннокислого, термометр, пипетки, корнцанг, пинцет, тампоны спиртовые, салфетки.

Оттаивание глубокозаморожеякой спермы в различной расфасовке – в необлицованных гранулах, соломинках (пайэтах), облицованных гранулах (капсулах, пилеттах), пакетах, является ответственной операцией, которая требует определенных навыков и строгого выполнения целого ряда правил.

До начала оттаивания необходимо подготовить все инструменты, водяную баню (биологический термостат, оттаиватель спермы), микроскоп с термостоликом к работе.

Температура воды в водяной бане (биологическом термостате) должна быть в пределах 40-42 ⁰С.

6. Оттаивание глубокозамороженной спермы быка

Оттаивание спермы быка с необлицованных гранулах объемом 01-0 2 мл. В гнездо штатива помешают простерилизованный флакон или ампулу с 2,9%-ным раствором натрия лимоннокислого (1 мл). Ампулу предварительно вскрывают, исключая при этом попадание стекла внутрь. Вскрыть ампулу необходимо в расширенной части, для обеспечения свободного прохождения гранулы. Выдерживают флакон (ампулу) с раствором натрия лимоннокисло-го в водяной бане не менее 3-х минут при температуре 40-42⁰С.

Стерильный корцанг или пинцет вносят в горловину сосуда Дьюара и охлаждают в парах азота. Охлажденным корцангом или пинцетом берут гранулу из канистры (тубы, контейнера) и быстро переносят в подготовленный для оттаивания флакон или ампулу. Не вынимая из воды, круговыми движениями покачивают флакон или ампулу до полного растворения гранулы. Процесс таяния обычно продолжается 7-8 секунд. После этого флакон (ампулу) со спермой вынимают из воды и ставят на стол. Температура в помещении лаборатории должна быть не менее +20⁰С.

Нельзя помещать при оттаивании во флакон (ампулу) больше одной ранулы.

Оценивают подвижность спермиев под микроскопом в раздавленной капле.

Оттаивание гранул спермы объемом 0 5 мл. Для осеменения коров и телок может поступать сперма замороженная в гранулах объемом 0,5 мл, не требующая при оттаивании дополнительного внесения 2,9%-ного раствора натрия лимоннокислого. Для оттаивания такой спермы необходимо стерильным, предварительно охлажденным пинцетом или корцангом взять из сосуда Дьюара две гранулы (доза спермы) и поместить их в стерильный стеклянный флакон, подогретый на водяной бане (биологическом термостате) до 40-42 ⁰С. Флакон с гранулами, не вынимая из воды осторожно вращают круговыми движениями до полного таяния гранул, после чего флакон переносят на ла-бораторный стол при комнатной температуре (не менее +20 ⁰C).

Время таяния двух гранул объемом 0,5 мл составляет 1,5-2 минуты.

Нельзя в один флакон помещать более двух гранул.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ

1. Оцените визуально свежеполученную сперму быка, барана, хряка, жеребца.

2. Дайте комплексную оценку по густоте и активности свежеполученной спермы быка.

3. Дайте оценку активности размороженной спермы быка.

4. Определите процентного отношения нормальных

и патологических форм спермиев спермы быка.

5. Определите концентрацию спермиев в сперме быка и хряка.

6. Определете интенсивности дыхания спермиев быка.

7. Опишите влияние различных факторов внешней среды на спермии.

8. Опишите и проведите размораживание спермы быка.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Акушерство, гинекология и биотехника размножения животных/ А.П.Студенцов, В.С. Шипилов, и др. – М.:КолосС, 2005.

2. Практикум по акушерству, гинекологии и биотехнике размножения животных/ В. Я. Никитин, М. Г. Миролюбов и др. - М.: КолосС, 2004. 3. Козло Н.Е. Воспроизводство животных/ Н.Е. Козло. -М.: Колос, 1984.

4. Турков, В.Г. Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных/В.Г. Турков.- Иваново, 1999.

5. Полянцев, Н.И. /Ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных/Н.И.,Полянцев, В.В.,Подберезный. – Феникс: –Ростов-на-Дону,2001.

СОДЕРЖАНИЕ

Введение …………………………………………………………………………………3

1. Оценка качества эякулята…………………………………………………………….4

1.1. Оценка качества эякулята по внешним показателям ………………………….…4

1.2. Определение густоты и подвижности спермиев …………………………………5

1.3. Определение процентного отношения нормальных и патологических форм спермиев …………………………………………………………………………………8

1.4. Определение концентрации спермиев в сперме производителей ……………..10

1.5. Определение интенсивности дыхания спермиев………………………………..16

1.6. Определение абсолютной выживаемости спермиев…………………………….17

2. Микробиологическое исследование эякулята ………………………………….…18

2.1. Определение содержания микробов в 1 см³ эякулята…………………………..18

2.2. Определение коли-титра …………………………………………………………19

3. Влияние на спермии физических и химических факторов……………………….20

4. Разбавление эякулята и его обработка …………………………………………….21

4.1. Состав сред для спермы производителей сельскохозяйственных животных………………………………………………………………………………………21

4.2. Приготовление синтетических сред……………………………………………...24

5. Подготовка глубокозамороженной спермы к осеменению……………………….25

6. Оттаивание глубокозамороженной спермы быка ………………………………...25

Список использованной литературы ………………………………………………..27

Содержание …………………………………………………………………………….28

31