3. Влияние на спермии физических и химических факторов

Материал и оборудование: сперма, микроскопы, предметные и покровные стекла, глазные пипетки, пипетка на 1 мл, термостолик, лед в чашке, горячая вода, 2,9% раствор натрия цитрата, 0,9% и 3% раствор натрия хлорида, дистиллированная вода, раствор калия перманганата 1: 3000, 2%-ный раствор формалина, 96%-ный спирт, 5%-ная настойка йода, вата, марлевые салфетки, фильтровальная бумага.

Действие высокой и низкой температуры. Определяют подвижность спермиев в свежеполученной сперме. Помещают препарат на обогревательны-й столик с температурой 50-65 ⁰С и определяют подвижность спермиев. Вначале наблюдается усиление подвижности, а потом под влиянием высокой температуры спермин быстро погибают.

На другое предметное стекло наносят каплю спермы. Оценивают подвижность. Помещают стекло на 1-2 минуты на лед. Протирают препарат фильтровальной бумагой и проверяют подвижность при температуре 18-20 ⁰С. Все спермии остаются неподвижными. При подогревании препарата до 40 ⁰С у части спермиев подвижность восстанавливается, а остальные спермии остаются неподвижными в результате гибели от температурного шока.

Влияние гипертонического раствора. После предварительной оценки подвижности, к капле свежеполученной спермы добавляют каплю 3%-ного (гипертонического) раствора натрия хлорида, капли перемешивают, накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом. Под влиянием гипертонического раствора спермин быстро погибают.

Влияние гипотонического раствора. На предметное стекло наносят каплю, спермы и определяют подвижность. На другое предметное стекло на-носят рядом капли спермы и дистиллированной воды. Капли, не смешивая, накрывают покровным стеклом и на границе слияния капель проводят наблюдение за спермиями.

Под влиянием дистиллированной воды (гипотоническая среда) про-исходит набухание головки спермиев, закручивание хвоста, гибель спермиев.

Влияние изотонического раствора. К капле свежеполученной спермы добавляют каплю 2,9% раствора натрия лимоннокислого. При определении подвижности отмечают активное движение спермиев.

Действие антисептиков. В свежеполученной сперме определяют подвижность. Затем к капле спермы нанесенной на предметное стекло добавляют каплю антисептика (раствор калия перманганата 1: 3000, 2%-ный раствор формалина, 96% спирт). После смешивания спермы с каплей антисептика препарат накрывают покровным стеклом и под микроскопом наблюдают. Через сколько минут наступает гибель спермиев. Если вокруг капли со спер-мой нанести в виде кольца 5% раствор йода, то йод, улетучиваясь, будет окрашивать сперму в желтый цвет. Под микроскопом можно отмечать массовую гибель спермиев от паров йода.

4. Разбавление эякулята и его обработка

Во время эякуляции к спермиям добавляются секреты придаточных половых желез. Электролиты, ферменты и другие, биологически активные вещества, содержащиеся в плазме спермы разрушают липопротеидную оболочку спермиев, возбуждают их, вызывают быстрое расходование запасов питательных веществ, способствуют потере электрического заряда с поверхности спермиев и их агглютинации. Для устранения отрицательного влияния плазмы на спермии и продления срока их жизни вне организма сперму разбавляют синтетическими средами разного состава. Выбор среды зависит от физиологии спермы данного вида животного и от метода ее хранения. Наиболее часто используемые компоненты сред представлены на рисунке.