- •Министерство сельского хозяйства российской федерации
- •1. Оценка качества эякулята
- •1.1. Оценка качества эякулята по внешним показателям
- •1.2. Определение густоты и подвижности спермиев
- •1.3. Определение процентного отношения нормальных и патологических форм спермиев
- •1.4. Определение концентрации спермиев в сперме производителей
- •1.5. Определение интенсивности дыхания спермиев
- •1.6. Определение абсолютной выживаемости спермиев
- •2. Микробиологическое исследование эякулята
- •2.1. Определение содержания микробов 1 см3 эякулята
- •2.2. Определение коли-титра
- •3. Влияние на спермии физических и химических факторов
- •4. Разбавление эякулята и его обработка
- •4.1. Состав сред для спермы производителей сельскохозяйственных животных
- •4.2. Приготовление синтетических сред
- •5. Подготовка глубокозамороженной спермы к осеменению
- •6. Оттаивание глубокозамороженной спермы быка
1. Оценка качества эякулята
1.1. Оценка качества эякулята по внешним показателям
Материалы и оборудовиние. Свежеполученная сперма, спермоприём-ники градуированные, пробирки, мерные цилиндры, салфетки, спиртовые тампоны.
Взятый эякулят подвергают макроскопической оценке. Сперму оценивают визуально по объёму, цвету, консистенции, запаху.
Объём. Объём эякулята быка и барана определяют с помощью гра-дуированного спермоприёмника, пробирки, а эякулят жеребца и хряка мен-зуркой или мерным цилиндром. Объём эякулята в одноразовом спермопри-ёмнике определяют путём взвешивания. Масса 1 г спермы соответствует 1 мл (таблица 1).
Таблица 1 – Объем эякулята у самцов с.-х. животных
Объем эякулята | ||
Производитель |
в среднем |
колебание |
Баран Бык Хряк Жеребец |
1,0 – 2,0 4,0 – 5,0 200 – 400 50 – 100 |
0,5 – 3,5 1 – 15 100 – 1000 20 – 200 |
Если производитель выделяет слишком мало спермы, это свидетельствует не только о нарушении рефлекса эякуляции, но и о серьёзных погрешностях в кормлении, содержании, эксплуатации.
Цвет. Сперму осматривают при хорошем освещении. У быка и барана нормальная сперма белого цвета с желтоватым оттенком. У хряка и жеребца – молочно-белая с сероватым оттенком.
Розовый и красный цвет спермы означает, что в неё попала кровь. Зеленоватый цвет указывает на наличие гноя. Интенсивно жёлтое окрашивание отмечается при попадании мочи.
Консистенция. Нормальная сперма барана имеет сметанообразную консистенцию, быка – сливкообразную, у хряка и жеребца – водянистую. Консистенция должна быть однородной. Наличие хлопьев, примесей свиде-тельствует о низком качестве спермы.
Запах. Нормальная сперма не имеет особого запаха. Иногда сперма быка может иметь слабый запах парного молока, а барана – жиропота.
Наличие гнилостного запаха указывает на патологические процессы в половых органах производителя.
Если внешние признаки эякулята имеют отклонение от нормальных показателей, то такую сперму бракуют и для работы не используют. Производитель должен быть всесторонне исследован и подвергнут соответствующему лечению. Ему необходимо создать особый режим содержания и использования.
1.2. Определение густоты и подвижности спермиев
Материалы и оборудование. Свежеполученная сперма, микроскопы, стеклянные палочки, пипетки, термостолики (столики Морозова), 2,9%-ный раствора натрия лимоннокислого, салфетки, спиртовые тампоны, предметные и покровные стекла.
Определение густоты спермы. Густота спермы зависит от количества спермиев в эякуляте и степени разбавления спермы секретами придаточных половых желез. Оценку густоты производят под микроскопом в раздавленной капле.
Подготовка микроскопа к работе. На малом увеличении (объектив 8, окуляр 15) устанавливают равномерное освещение поля зрения.
Спермии лучше просматривать в неярком свете. Для этого прикры-вают диафрагму и опускают конденсор микроскопа. На предметный столик микроскопа помещают термостолик или обогревательный столик Морозова. В обогревательный столик предварительно наливают горячую воду (60 – 65 С). Через боковое отверстие в обогревательном столике измеряют температуру. К моменту оценки она должна составлять 40-42°С.
Приготовление препарата. На чистое обезжиренное предметное стекло стеклянной палочкой или пипеткой наносят каплю исследуемой спермы и накрывают покровным стеклом, таким образом, чтобы под стеклом не образовались пузырьки воздуха.
Свежеполученная сперма очень чувствительна к температурным колебаниям. Чтобы не допустить температурного шока спермиев предметное стекло должно быть тёплым, а температура воздуха в лаборатории не менее 20 С.
В зависимости от насыщенности спермиями неразбавленная сперма может иметь следующие оценки: густая (Г), средняя (С), редкая (Р).
Сперму считают густой, когда все поле зрения микроскопа заполнено спермиями. Между отдельными спермиями почти не видно промежутков. В густой сперме трудно различить движение отдельных спермиев.
Средняя сперма – в поле зрения заметны промежутки между спермиями, хорошо различимо движение отдельных спермиев.
Редкая сперма – спермии размещены в поле зрения микроскопа так, что между отдельными спермиями имеются промежутки, значительно боль-ше размера самих спермиев.
Неразбавленная сперма производителей сельскохозяйственных животных в зависимости от густоты содержит в 1 мл следующее количество спермиев (таблица 2):
Таблица 2 - Концентрация спермиев
Концентрация спермиев в млрд/мл | |||
Производитель |
густая (Г) |
средняя (С) |
редкая (Р) |
Баран |
>2 |
1 – 2 |
<1 |
Бык |
>1 |
0,6 – 1 |
<0,6 |
Хряк |
>0,2 |
0,1 – 0,2 |
<0,1 |
Жеребец |
>0,25 |
0,15 – 0,25 |
<0,15 |
Олигоспермия – слишком малое количество спермиев в эякуляте.
Аспермия – отсутствие спермиев в сперме.
К использованию допускается: сперма барана – только густая, сперма быка, хряка, жеребца – густая и средняя.
Определение подвижности спермиев. Оценку качества спермы по подвижности спермиев проводят под микроскопом в раздавленной капле, как правило, после определения густоты.
Различают следующие виды движения спермиев: прямолинейно – по-ступательное (нормальное), манежное и колебательное (не нормальное), кро-ме того, спермии могут быть неподвижными.
Прямолинейно – поступательное движение (ППД) характеризуется правильным линейным перемещением спермиев в поле зрения. Только спермии, обладающие прямолинейным поступательным движением способны двигаться самостоятельно в половых путях самки и участвовать в процессе оплодотворения.
Манежное (круговое) движение (М) характеризуется вращением спермия вокруг головки или по небольшому кругу. У млекопитающих такой вид движения считается ненормальным. Манежное движение свидетельствует о неполноценности спермия, дефектах отдельных его частей, оболочки или изменения электрического потенциала.
Колебательное движение (К) – характеризуется слабым движением хвоста спермия, не приводящим к перемещению последнего. Колебательное движение признак неполноценности или наступающей гибели спермия.
Неподвижные спермии (Н) – некроспермия свидетельствует о их гибели.
Подвижность спермиев оценивают по 10-ти бальной системе. Каждый л равен 10% спермиев, обладающих прямолинейно – поступательным движением. Высшую оценку 10 баллов получает сперма, в которой все (100%) спермиев имеют прямолинейно – поступательное движение (ППД). При оценке 9 баллов – 9 спермиев из каждых 10 имеют ППД. Другие виды движения (колебательное, манежное) не учитывают. При оценке спермы по густоте и подвижности спермиев применяют комплексное обозначение. Например, Г – 9, это означает, что исследуемая сперма густая и 90% спермиев обладает прямолинейно – поступательным движением и т.д. В отдельных, особенно густых эякулятах, в момент взятия спермы, не все спермии успевают полностью выйти из состояния неподвижности, про-являя при этом слабое движение. Такую сперму необходимо исследовать после добавления к ней подогретого до 38-40 С 2,9%-ного раствора натрия лимо-ннокислого.
Рисунок 1 - Оценка спермы по густоте
Рисунок 2 - Оценка спермы по подвижности
А – 10 баллов; Б – 8 баллов; В – 6 баллов; Г – 4 балла; Д – 2 балла; Е – Н
(некросперия)