2. Микробиологическое исследование эякулята

Микробиологическое исследование эякулята проводят один раз в квартал. Для микробиологического исследования в лабораторию направляют 1 мл эякулята. Если для транспортировки требуется более двух часов, то материал в пробирке перевозят в термосе со льдом. Промежуток времени от взятия спермы до посева её должен превышать более шести часов. В лаборатории из спермы делают разбавления 1: 10, 1: 100 и 1: 1000. Для этого в каждую пробирку вводят 4,5 мл стерильного изотонического раствора натрия хлорида. В первую пробирку добавляют 0,5 мл неразбавленной спермы. После перемешивания из первой пробирки во вторую вносят 0,5 мл. В третью пробирку из 2-ой 0,5 мл.

Микробиологическим исследованием устанавливают содержание микробов в 1 см³ эякулята, наличие грибов, коли-титр.

2.1. Определение содержания микробов 1 см3 эякулята

Материал и оборудование: эякулят разбавления 1: 100, стерильные чашки Петри, МПА с 1% раствором глюкозы, стерильные палочки Дригальского, стерильные пипетки на 1 см³, термостат, водяная баня.

Посевы делают на четыре чашки Петри. Для этого на среду наносят стерильной пипеткой 0,5 см³ разбавленной 1: 100 спермы и равномерно покрывают ею всю поверхность. После посева чашки Петри помещают на 48 часов в термостат при температуре 37,5 ⁰С (0,5 ⁰С). Если сперма слабо за-грязненная, то колонии подсчитывают по всей поверхности чашки. При сильной загрязненности поверхность чашки разделяют на несколько секторов, подсчет колоний производят только в одном секторе. Количество микробов в 1 см³ эякулята (С) вычисляют по формуле:

С = - (N×Д)/(V×S), где:

N–количество подсчитанных колоний; Д – степень разбавления спермы;

Ч – количество посеянной спермы (см³);

S – площадь сектора, на которой проводили подсчет колоний (1/4, 1/2 и т.д. из площади чашки Петри).

Вычисление содержания микробов в 1 см³ эякулята основывается на арифметическом среднем четырех чашек. При этом учитывают только те результаты, разница между которыми не более 20%. Определение вида и патогенности изолированных микробных штаммов производится общепризнанными методами. Эякулят быка считают годным, если он не содержит патогенных и потенциально патогенных микробов, а содержание апатогенных микробов в 1 см³ не превышает 5000.

Быков, в эякуляте которых обнаружено более пяти тысяч апатоген-ных микробов в 1 см³ или найдена си негнойная палочка, повторно исследуют не менее трех раз с интервалом 6-10 дней. Если и при этих исследованиях будет установлена та же микрофлора и в тех же или несколько меньших (до 30%) количествах, таких производителей считают бактерионосителями, от них прекращают использовать сперму, и проводят соответствующее лечение. При отсутствии лечебного эффекта производителей выбраковывают.

2.2. Определение коли-титра

Материал и оборудование: разбавленная сперма (1: 10, 1: 100, 1: 1000), стерильные пипетки, среда Бумера, термостат, среда Эндо.

Из каждого разбавления спермы делают стерильной пипеткой посевы (по 1 см³) в среду Бумера. Посевы инкубируют в течение 18-24 часов при температуре 43-44⁰С.

При росте кишечной палочки среда становится желтой и мутной, и в бродильной трубке накапливается газ. Из таких пробирок делают посевы на среду Эндо. Эти посевы инкубируют в термостате в течение суток. Если выросли колонии микробов с характерным ростом колоний кишечной палочки (ярко красный цвет), тогда делают мазки и окрашивают по Граму.

Пригодными к применению считают эякуляты быка, коли-титр которых не более 1: 10.