- •Министерство сельского хозяйства российской федерации
- •1. Оценка качества эякулята
- •1.1. Оценка качества эякулята по внешним показателям
- •1.2. Определение густоты и подвижности спермиев
- •1.3. Определение процентного отношения нормальных и патологических форм спермиев
- •1.4. Определение концентрации спермиев в сперме производителей
- •1.5. Определение интенсивности дыхания спермиев
- •1.6. Определение абсолютной выживаемости спермиев
- •2. Микробиологическое исследование эякулята
- •2.1. Определение содержания микробов 1 см3 эякулята
- •2.2. Определение коли-титра
- •3. Влияние на спермии физических и химических факторов
- •4. Разбавление эякулята и его обработка
- •4.1. Состав сред для спермы производителей сельскохозяйственных животных
- •4.2. Приготовление синтетических сред
- •5. Подготовка глубокозамороженной спермы к осеменению
- •6. Оттаивание глубокозамороженной спермы быка
4.1. Состав сред для спермы производителей сельскохозяйственных животных
Синтетическая среда для разбавления и хранения спермы быка в течение 72 часов при температуре 2-5 0С (таблица 4):
Таблица 4 - Среда глюкозо-цитратно-желточная
Компоненты |
Количество |
Глюкоза медицинская, безводная, г Натрий лимоннокислый, г Спермосан – 3, тыс. ед. Желток куриных яиц, мл Вода дистиллированная, мл |
3,0 1,4 75,90 20,0 100,0 |
Состав синтетической среды для разбавления и хранения спермы барана в течение 24 часов при температуре 2-5 0С(таблица 5):
Таблица 5 - Среда глюкозо-цитратно-желточная
Компоненты |
Количество |
Глюкоза медицинская, безводная, г Натрий лимоннокислый, г Спермосан – 3, тыс. ед. Желток куриных яиц, мл Вода дистиллированная, мл |
0,8 2,8 50 – 75 20,0 100,0 |
Рисунок 5 - Основные компоненты искусственных сред
Синтетическая среда для разбавления и хранения спермы хряка в течение 72 часов при температуре 16-20 0С(таблица 6):
Таблица 6 - Среда глюкозо-хелатно-цитрато-сульфатная
Компоненты |
Количество |
Глюкоза медицинская, безводная, г Хелатон – 3, г Аммоний сернокислый очищенный, г Натрий лимоннокислый, г Натрий двууглекислый, г Спермосан – 3, тыс. ед. Вода дистиллированная, мл |
4,0 0,26 0,18 0,38 0,05 25 – 30 100,0 |
Синтетическая среда для разбавления и хранения спермы жеребца в течение 48 часов при температуре 2-5 0С (таблица 7):
Таблица 7 - Среда лактозо-хелато-цитратно-желточная
Компоненты |
Количество |
Лактоза, г Натрий лимоннокислый, г Натрий двууглекислый, г Хелатон, г Спермосан – 3, тыс. ед. Желток куриных яиц, мл Вода дистиллированная, мл |
11,0 8,0 89,0 100,0 25 – 30 1,6 100,0 |
Таблица 8 - Синтетическая среда для разбавления и замораживания спермы быка в форме гранул:
Компоненты |
Количество |
Лактоза, г Желток куриных яиц, мл Глицерин, мл Спермосан – 3, тыс. ед. Вода дистиллированная, мл |
11,5 20,0 5,0 50,0 100,0 |
4.2. Приготовление синтетических сред
Материал и оборудование: компоненты сред, колбы, мензурки, ве-сы, пипетки градуированные, фильтроваль-ная бумага, чашки Петри, скальпель, сал-фетки, тампоны, спирт 96%, стеклянные па-лочки, термометры.
Синтетические среды готовят в день разбавления спермы из выпускаемых промышленностью сухих веществ. В стерильную химическую колбу наливают необходимый объем прокипяченной дистиллированной воды и до-бавляют все компоненты, за исключением спермосана – 3, глицерина и желт-ка согласно представленных прописей.
Среду стерилизуют в водяной бане 10 минут с момента закипания во-ды в бане, затем охлаждают до 35-40 0С и добавляют спермосан, глицерин и желток.
Яйцо перед использованием моют, протирают спиртовым тампоном, раскалывают пополам и отделяют белок от желтка. Желток переносят на фильтровальную бумагу, прокалывают и сливают в измерительную мензурку.
После тщательного перемешивания среда должна быть использована в течение 4-х часов. Температура среды и спермы перед разбавлением должка быть одинаковой.
Техника разбавления спермы производителей синтетическими средами
Материалы и оборудование: свежеполученная сперма, свежеприготовленная среда, мензурки, пипетки, термометры, микроскопы, предметные и покровные стекла.
После предварительной оценки сперму разбавляют средой в соотношении 1:1 или 1:2. Через 5-10 минут среда с температурой 25-30 0С небольшими порциями добавляют по стенке в колбу со спермой и осторожно перемешивают.
В зависимости от подвижности и концентрации спермиев сперму бы-ка разбавляют в 20-50 и более раз, чтобы в одной дозе разбавленной спермы для всех способов хранения перед осеменением было не менее 10 млн. спермиев с ППД 4 балла.
Сперму барана разбавляют в 2 (1: 1) – 4 (1: 3) раза с концентрацией в дозе не менее 80 млн. спермиев.
Сперму хряка разбавляют в 2 (1: 1) – 10 (1: 9) раз с концентрацией в дозе не менее 3 млрд. спермиев через 30-60 мин. после взятия и определения ее качества.
Сперму жеребца разбавляют в 4 (1: 3) раза с концентрацией в дозе не менее 3 млрд. спермиев.
Рисунок 6 - Извлечение желтка для искусственной среды