Лабораторная диагностика газовой гангрены

Газовая гангрена - полиэтиологическая травматическая раневая инфекция, которая проявляется омертвением тканей и газообразованием в них, интенсивным отеком и выраженной токсемией.

Возбудителями являются грам+ спороносные палочки рода Clostridium. Основные возбудители: Cl. perfringens (серовар А), Cl. novgi (серовар А), Cl. septicum, Cl. histolyticum, Cl. sordelli. Ведущий возбудитель - Cl. perfringens.

Материалом для исследования служит раневое отделяемое, некротизированная ткань, кровь.

МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ.

Материал плотный измельчают, центрифугируют и из осадка готовят препараты с окраской по Граму и по Гинса-Бурри. Можно поставить пробу на подвижность (придавленная капля). Возбудители газовой гангрены подвижные (кроме Cl. perfringens), не имеют капсулы (кроме Cl. perfringens), спорообразование в животном организме не происходит.

Бактериологический метод исследования.

1 этап. Обработанный материал в нативном состоянии и после 10-20 минутного прогревания при 80 С засевают на питательные среды: Китта-Тароцци, обезжиренное молоко, Вильсон-Блера, агар Цейколера. Жидкие среды регенерируют (кипятят) и заливают вазелиновым маслом. Чашки выращивают в анаэростате. Посевы просматривают ежедневно в течение 7 дней.

2 этап. Изучение роста на средах. Наиболее характерны изменения сред при росте Cl. perfringens. Помутнение и образование пузырьков газа на среде Китта-Тароцци наступает через 6 часов, молоко свертывается через 2-3 часа. К этому же времени наступает почернение с разрывами среды Вильсон-Блера. Другие возбудители указанные среды изменяют позже и менее типично.

На среде Цейсслера (через 24-48 часов) Cl. perfringens образуют серые крупные дисковидные колонии с зоной гемолиза. На среде Вильсон-Блера - колонии черного цвета. Из отдельных колоний делают мазки по Граму и их отсевают на среду Китта-Тароцци (для накопления чистой культуры).

Можно выделять культуру и другими методами (метод Фортнера, Вейнберга, трубочки Вейона).

3 этап. Изучение выделенной культуры:

а) мазок по Граму;

б) мазок по Ожешко;

в) проба на подвижность;

г) определение ферментативных свойств (в том числе лецитиназной активности);

д) реакция нейтрализации на белых мышах для определения типа токсина;

е) антибиотикограмма.

Биологический метод исследования.

Морских свинок заражают подкожно суспензией материала. Животные погибают при картине экспериментальной газовой гангрены (местный отек с газообразованием, расплавление подкожно-жировой клетчатки). Посевом органов можно выделить культуру.

Экспресс-метод:

а) данные микроскопии препаратов;

б) реакция иммунофлуоресценции;

в) учет роста на средах с посевом нативного материала через 3-6 часов (для определения Cl. perfringens); г) определение антигена в материале методом встречного иммуноэлектрофореза.

Бактерии рода Clostridium (главным образом Cl. perfringens типа А) могут вызывать клостридиальные гастроэнтериты и некротические энтериты. Микробиологический диагноз устанавливают изоляцией культуры клостридий из испражнений, рвотных масс, остатков пищевых продуктов по такой же схеме, что и при анаэробной газовой инфекции с учетом массивности содержания бактерий в материале. В фильтрате материала определяют (пробой нейтрализации) экзотоксин при септической форме, возбудитель выделяют из крови.