8. Физиология эндокринной системы

8.1. Влияние инсулина на содержание сахара в крови кролика

Поджелудочная железа наряду с внешнесекреторной (выделение поджелудочного сока и ферментов по панкреатическому протоку в двенадцатиперстную кишку) выполняет и внутрисекреторную функцию (синтез и выделение гормонов в кровь). Инкреторная функция поджелудочной железы осуществляется эндокринной тканью, расположенной в ткани железы в виде мелких участков-островков Лангерганса. В поджелудочной железе взрослого человека их насчитывается от 208000 до 1760000. В островках Лангерганса различают три вида клеток: бета-, дельта-, и альфа-клетки. Бета-клетки являются местом образования инсулина, альфа-клетки - глюкогона. В эпителии мелких выводных протоков железы образуется гормон липокаин, участвующий в регуляции липидного обмена. Инсулин и глюкагон участвуют в регуляции углеводного обмена.

Ц е л ь р а б о т ы: убедиться в участии инсулина в регуляции содержания глюкозы в крови.

Д л я р а б о т ы н е о б х о д и м ы: кролик,шприцы на 1,0 и 10,0 мл, инсулин, стерильный 20 % раствор глюкозы, вата, спирт-эфир, ножницы изогнутые, оборудование и реактивы для определения сахара в крови: игла для прокола вены, пипетки на 0,1; 0,2; 2,0 мл, центрифуга, центрифужные пробирки, 1,2 % раствор пикриновой кислоты, водяная баня, 20 % раствор NаОН, фотоэлектроколориметр .

Х о д р а б о т ы

Перед опытом кролика выдерживают 24 часа без пищи. На ухе выстригают шерсть, обрабатывают кожу спирт-эфиром и острой иглой прокалывают краевую вену, предварительно пережав ухо у его корня. Пипеткой набирают 0,2 мл крови и переносят ее в пробирку, куда предварительно было внесено 1,8 мл дистиллированной воды.

Затем кролику вводят инсулин в дозе 4 ед. на 1 кг (подкожно или внутривенно). Через каждые 15 мин на протяжении 1,0-1,5 ч берут кровь для анализа на содержание сахара и наблюдают за состоянием животного. В случаях наступления резких судорог (инсулиновый шок) кролику внутривенно или подкожно вводят 10-15 мл 20 % раствора глюкозы, что сразу вызывает прекращение судорог.

В полученных пробах крови определяют содержание сахара. Для этого пробирку, содержащую 0,2 мл крови и 1,8 мл дистиллированной воды вначале встряхивают, а затем туда вносят 1,0 мл 1,2 % раствора пикриновой кислоты. Пробирку встряхивают до появления коричневого цвета и центрифугируют 5 мин при 1500 об/мин. Отмеряют 1,0 мл центрифугата, переносят его в другую чистую пробирку и добавляют туда 0,1 мл 20 % раствора NаОН. Пробирку помещают в кипящую водяную баню на 5 мин. После охлаждения содержимое пробирки колориметрируют при синем светофильтре на ФЭК-М (кювета 1 мм). Контролем служит дистиллированная вода. Определяют величину экстинкции (ЭК)и по специальной таблице находят концентрацию сахара (в мг%).

Для перевода мг% в ммоль/л полученые результаты в мг% умножают на коэффициент пересчета 0,05551.

Таблица определение содержания сахара в крови по величине экстинкции

ЭК

мг%

ЭК

мг%

Эк

мг%

0.300 63 0.380 114 0.460 200

0.305 66 0.385 118 0.465 207

0.310 69 0.390 122 0.470 214

0.315 72 0.395 127 0.475 221

0.320 75 0.400 131 0.485 236

0.325 78 0.405 136 0.490 243

0.330 81 0.410 141 0.495 250

0.335 84 0.415 146 0.500 257

0.340 87 0.420 152 0.505 264

0.345 90 0.425 157 0.510 271

0.350 93 0.430 163 0.515 278

0.355 96 0.435 169

0.360 99 0.440 175

0.365 102 0.445 181

0.370 105 0.450 187

0.375 109 0.455 194

Полученные результаты записать в протокол и сделать выводы.

Работа 8.2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ САХАРА В КРОВИ КРОЛИКА ПОСЛЕ САХАРНОЙ НАГРУЗКИ

Для оценки фунцкионального состояния инсулярного аппарата поджелудочной железы, являющегося источником инсулина и принимающего участие в регуляции углеводного обмена, применяют пробу с сахарной нагрузкой. Сущность пробы заключается в том, что после сахарной нагрузки динамика утилизации и уровень концентрации сахара в крови зависит от количества инсулина.

Ц е л ь р а б о т ы: освоить методику проведения сахарной нагрузки в эксперименте.

Д л я р а б о т ы н е о б х о д и м ы: кролик, глюкоза в порошке, все необходимые реактивы и оборудование для взятия крови и определения содержания сахара в ней (см. предыдущую работу).

Х о д р а б о т ы:

У кролика, голодавшего 24 часа после обработки операционного поля, из вены уха берут кровь для определения содержания сахара до сахарной нагрузки (лучше брать 2 пробы). Затем животному дают выпить или насильно вливают в рот 5 мл воды с растворенной в ней глюкозой (5 г). После этого берут кровь для анализов через каждые 20 мин в течении 1,0-1,5 ч и в каждой пробирке определяют количество сахара (по методике описанной в предыдущей работе).

Полученные результаты изображают в виде кривой, откладывая по оси абсцисс время, а по оси ординат - количество сахара (в мг% или в ммоль/л).

Сделать заключение о динамике повышения содержания сахара в крови и восстановлении исходного уровня. Объяснить диагностическую ценность пробы с сахарной нагрузкой.

КОНСТАНТЫ ЭНДОКРИННОЙ СИСТЕМЫ

Среда	Гормон	Содержание
К	Адреналин	0 - 6,28 нмоль/л
П	Адреналин	< 0,480 нмоль/л
С	АКТГ (кортикотропин)	16,4 - 32,8 нмоль/л
П	Глюкагон	30 - 210 нг/л
С	Инсулин	16 - 160 ммоль/л натощак
С	Кортизол	230 - 750 нмоль/л
С	Кортикостерон	3,8 - 66,5 нмоль/л
К	Норадреналин	0 - 11,76 нмоль/л
П	Норадреналин	0,615 - 3,239 нмоль/л
П	17-ОКС	0,14 - 0,35 мкмоль/л
С	Паратгормон	42,6 ± 9,31 пмоль/л
С	Тироксин (Т4)	Общий 65 - 155 нмоль/л Свободный 10,3 - 31,0 пмоль/л
С	Трийодтиронин (Т3)	Общий 1,77 - 2,43 нмоль/л Свободный 3,54 - 10,16 пмоль/л
С	Тиреотропный гормон (ТТГ)	128 ± 28 пнмоль/л

Примечание. К-кровь; П-плазма; С-сыворотка