МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
УЧРЕЖДЕНИЕ ОБРАЗОВАНИЯ «ГОМЕЛЬСКИЙГОСУДАРСТВЕННЫЙМЕДИЦИНСКИЙУНИВЕРСИТЕТ»
Кафедра нормальной физиологии
РУКОВОДСТВО К ПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ
ПО НОРМАЛЬНОЙ ФИЗИОЛОГИИ
Учебно-методическое пособие
Гомель
ГоГМУ
2008
УДК 612 (076.5) ББК 28.073
Р 85
Авторы:
Э. С.Питкевич, Э. М. Заика, В. А. Мельник, Н. И. Штаненко, С. Н. Мельник
Рецензент ―
заведующая кафедрой патологической физиологии Гомельского государственного медицинского университета, кандидат медицинских наук, доцент Т. С. Угольник
Р85 Руководствокпрактическимзанятиямпонормальнойфизиологии:
учеб.-метод. пособие / Э. С. Питкевич, [идр.]; подред. проф. Э. С. Питкевича. — Гомель: УО «Гомельский государственный медицинский уни-
верситет», 2008. — 128 с. ISBN 978-985-506-149-7
Настоящее учебно-методическое пособие включает лабораторные работы по всем разделам нормальной физиологии для студентов медицинских вузов. Материалы пособия изложены в соответствии с действующими программами по нормальной физиологии для студентов высших медицинских учебных заведений, утвержденных Министерством здравоохранения Республики Беларусь. В конце пособия располагаются базовые константы физиологических систем в Международной системе физических единиц (СИ).
Утверждено и рекомендовано к изданию Центральным учебным научнометодическим советом УО «Гомельский государственный медицинский университет» 11 апреля 2008 г., протокол № 5.
|
УДК 612 (076.5) |
|
ББК 28.073 |
ISBN 978-985-506-149-7 |
© Учреждение образования |
|
«Гомельский государственный |
|
медицинский университет», 2008 |
2
ВВЕДЕНИЕ
Данное учебно-методическое пособие представляет собой материал для проведения лабораторных занятий по всем разделам нормальной физиологии для студентов медицинских вузов. Материалы пособия изложены в соответствии с действующими программами по нормальной физиологии для студентов высших медицинских учебных заведений, утвержденных Министерством здравоохранения Республики Беларусь.
Пособие состоит из введения, основной части, которая разделена на 36 лабораторный занятий и содержит материал по физиологии крови, сер- дечно-сосудистой, дыхательной и пищеварительной систем, физиологии выделения, обмена веществ и энергии, терморегуляции, возбудимых тканей, общей и частной физиологии ЦНС, физиологии желез внутренней секреции, анализаторов и высшей нервной деятельности. В конце пособия располагаются базовые константы физиологических систем в Международной системе физических единиц (СИ). В пособие включены материалы для самостоятельной работы студентов. В конце каждого раздела расположены контрольные вопросы к итоговому занятию.
Изучение методик лабораторных работ, включенных в пособие, позволит закрепить и облегчить более эффективное усвоение студентамимедиками полученных теоретических знаний и освоить некоторые важные клинико-диагностические методы исследования.
3
Ф И З И О Л О Г И Я К Р О В И
ЗАНЯТИЕ 1. ВВОДНОЕ ЗАНЯТИЕ ИНСТРУКТАЖ ПО ТЕХНИКЕ БЕЗОПАСНОСТИ
Лабораторная работа 1.1. Методика забора крови из пальца
(Самостоятельная работа студентов под контролем преподавателя)
При заборе крови следует помнить о возможной ее инфицированности вирусом СПИДа, гепатита В и связанным с этим повышенным риском заражения, которому подвергаются лаборанты, проводящие серологические и клинические исследования. Поэтому при проведении анализа крови нужно руководствоваться правилами о профилактике СПИДа у медицинского персонала, занятого забором крови и ее исследованием.
Цель работы: освоить методику получения крови из пальца.
Для работы необходимы: одноразовый скарификатор, антисептическое средство, вата, предметные стекла. Объект исследования — человек.
Ход работы
1.Пациент должен сидеть напротив проводящего забор крови, рука (лучше левая) находится на столе.
2.Забор крови осуществляют из концевой фаланги 4-го пальца, что предотвращает распространение воспалительного процесса в случае его возникновения на кисть.
3.Кожа пальца дезинфицируется и обезжиривается антисептическим средством, остаткиантисептикаудаляютсясповерхностикожисухимватнымтампоном.
4.Открыть пакет с одноразовым скарификатором необходимо со стороны, противоположной колющей поверхности.
5.Прокол кожи делают в подушечке пальца в центральной точке, скарификатор погружают на всю глубину режущей поверхности.
6.Первую каплю крови снимают сухой ватой, тщательно вытирают палец (кожа должна быть сухой).
7.Следующаякаплякровидолжнаиметьвыпуклыйменискинерастекаться поповерхностикожи, изэтойипоследующейкапелькровьберетсядляанализа.
8.После забора крови место укола обрабатывается антисептическим средством.
Лабораторная работа 1.2.
Изучение свежего препарата крови под микроскопом
(Самостоятельная работа студентов с участием лаборанта)
Кровь состоит из жидкой части ― плазмы и взвешенных в ней клеток (форменных элементов): эритроцитов (красных кровяных телец), лейкоцитов (белых кровяных телец) и тромбоцитов (кровяных пластинок).
4
Цель работы: изучить особенности свежего препарата крови.
Для работы необходимы: капля свежей крови, микроскоп, предметные и покровные стекла, одноразовый скарификатор, вата, антисептическое средство. Объект исследования ― кровь человека.
Ход работы
Для рассмотрения свежего препарата крови под микроскопом каплю крови поместить на предметное стекло, накрыть покровным, выбрать поле для наблюдения с нетолстым слоем крови. Поле зрения занимают эритроциты, расположенные чаще всего в виде «монетных столбиков». Сделать рисунок, оформить вывод о закономерности расположения эритроцитов в свежем препарате крови.
ЗАНЯТИЕ 2. ФУНКЦИИ И СВОЙСТВА КРОВИ
Лабораторная работа 2.1. Определение гематокрита
(Самостоятельная работа студентов с участием лаборанта)
Гематокритом называют выраженное в процентах отношение объема форменных элементов к объему цельной крови.
Существует несколько методик определения гематокрита. Все они основаны на центрифугировании предотвращенной от свертывания крови, набранной в капилляр и измерении столбиков крови и осевших эритроцитов.
Цель работы: освоить методику определения гематокрита и определить его величину в исследуемой крови.
Для работы необходимы: гематокритный капилляр, центрифуга, одноразовый скарификатор, вата, антисептическое средство. Объект исследования ― кровь человека.
Ход работы
Выполнить прокол пальца по известной методике. Заполнить гематокритный капилляр не менее чем на 2/3 ее объема. Запломбировать концы трубочки пластилином и поместить в центрифугу (не менее двух капилляров во взаимно противоположных ячейках). Крышку центрифуги плотно закрутить. После центрифугирования измерить линейкой столбик набранной крови в трубочке. Измерить столбик эритроцитов в мм, вычислить процентное соотношение. За 100% принять длину столбика всей набранной крови, за Х ― длину столбика эритроцитов. Найденное значение Х% будет соответствовать показателю гематокрита крови. Для перевода гематокрита, выраженного в % в единицы системы СИ полученную величину умножить на 0,01.
В выводе сравнить полученный показатель гематокрита с нормой.
5
Лабораторная работа 2.2. Подсчет количества эритроцитов
(Самостоятельная работа студентов с участием лаборанта)
Цель работы: освоить методику и определить количество эритроцитов в исследуемой крови.
Для работы необходимы: микроскоп, счетная камера Горяева, меланжер для эритроцитов, 3% раствор хлорида натрия, покровные стекла, автоматическая пипетка, пробирки, одноразовый скарификатор, вата, антисептическое средство. Объект исследования ― кровь человека.
Ход работы
Перед началом работы необходимо рассмотреть счетную камеру под микроскопом, найти малые квадратики и большие квадраты сетки (рисунок 1). Камеру предварительно необходимо подготовить путем притирания покровного стекла к боковым выступающим граням камеры до появления цветных (ньютоновских) колец. В каплю свежей крови, полученной из пальца, погрузить кончик меланжера (с красной бусинкой в расширении) для эритроцитов и набрать кровь до метки 0,5, следя, чтобы в капилляр не попали пузырьки воздуха. Быстро, пока кровь не свернулась, перенести кончик меланжера в 3% раствор хлорида натрия и набрать его до метки 101, т.е. развести кровь в 200 раз. После этого взять заполненный меланжер (смеситель), зажать его концы 1 и 3 пальцами и в течение 1 мин встряхивать. После тщательного перемешивания крови, удалив предварительно 1–2 капли, нанести небольшую капельку на сетку камеры.
При необходимости такое же разведение может быть выполнено другим способом. Например, 0,02 мл крови смешать с 4 мл 3% NaCl в пробирке. Содержимое пробирки в этом случае тщательно перемешивается.
Рисунок 1 — Приборы для подсчета форменных элементов крови:
а― счетная камера Горяева вид сверху, б ― вид сбоку;
в― смесители для подсчета эритроцитов и г ― лейкоцитов, д ― сетка счетной камеры
6
Заполнив камеру, поместить ее под микроскоп и, если форменные элементы расположены равномерно (что является показателем хорошего перемешивания крови), приступить к подсчету. Считать эритроциты удобнее при большом увеличении.
Необходимо подсчитать число эритроцитов в 5 больших квадратах, расположенных в разных местах сетки, например, по диагонали. Во избежание двухкратного подсчета клеток, лежащих на границе между малыми квадратиками, руководствоваться правилом Егорова, согласно которому, относящимися к данному квадратику считаются эритроциты, лежащие как внутри квадратика, так и на его левой и верхней границе. Эритроциты, лежащие на правой и нижней границе для данного квадратика не учитываются.
Формула для вычисления количества эритроцитов в 1 мм3 крови:
N = A×4000 ×200 , 80
где: N ― искомое число эритроцитов;
А ― число эритроцитов в 80 маленьких квадратиках (или в 5 больших); 4000 ― множитель для получения содержания эритроцитов в одном мм3 крови; 200 ― степень разведения эритроцитов.
Для перевода полученного количества эритроцитов в единицы СИ, подсчитанное количество эритроцитов умножить на 106 и выразить в N х 1012/л. Зарисовать фрагмент сетки камеры Горяева с маленькими и большими квадратами.
В выводе сравнить количество подсчитанных эритроцитов с нормой.
ЗАНЯТИЕ 3. ФИЗИОЛОГИЯ ЭРИТРОЦИТОВ
Лабораторная работа 3.1. Определение количества гемоглобина в крови по способу Сали
(Самостоятельная работа студентов с участием лаборанта)
Определение содержания гемоглобина в крови производится колориметрическими способами, один из которых (гематиновый метод Сали) основан на образовании устойчивого раствора коричневого цвета при взаимодействии гемоглобина с соляной кислотой. Принцип колориметрического способа заключается в том, что если исследуемый раствор путем разбавления довести до окраски, одинаковой со стандартным раствором, то концентрация растворенных веществ в обоих растворах будет одинакова. В стандартном растворе гемоглобина содержится 167 г/л.
Цель работы: освоить методику определения гемоглобина и найти содержание гемоглобина в исследуемой крови.
7
Для работы необходимы: гемометр Сали, капилляр с меткой 0,02 мл, 0,1 нормальный раствор соляной кислоты, дистиллированная вода, свежая кровь, пипетка, стеклянная палочка, вата, антисептическое средство, одноразовый скарификатор. Объект исследования ― кровь человека.
Ход работы
В среднюю пробирку гемометра налить 0,1 нормальный раствор соляной кислоты до нижней кольцевой метки. Из пальца обычным способом набрать в капилляр (рисунок 2) кровь без пузырьков до метки.
Рисунок 2 ― Гемометр Сали и капилляр. (Пояснение в тексте)
Излишек крови можно удалить из капилляра прикладыванием ваты или фильтровальной бумаги к кончику капилляра. Выдуть кровь на дно пробирки из капилляра так, чтобы верхний слой кислоты остался неокрашенным. Не вынимая капилляр, промыть его раствором соляной кислоты из верхнего слоя пробирки гемометра. После этого содержимое пробирки перемешать стеклянной палочкой и поставить в гемометр на 5–10 мин. Это время необходимо для полного превращения гемоглобина в солянокислый гематин.
Затем к содержимому пробирки прибавить по каплям дистиллированную воду, каждый раз перемешивая раствор стеклянной палочкой до тех пор, пока цвет полученного раствора не станет одинаковым с цветом стандартного раствора боковых ампул гемометра. Цифра, стоящая на уровне нижней границы мениска полученного раствора отражает содержание гемоглобина в исследуемой крови в грамм-процентах (г%).
Перевод полученных данных в единицы системы СИ (в г/л) производят путем умножения измеренного количества гемоглобина в г% на 10. Зарисовать гемометр и капилляр. В выводе сравнить с нормой полученное содержание гемоглобина в исследуемой крови.
8
Лабораторная работа 3.2. Определение гемоглобина крови гемоглобинцианидным (фотоэлектроколориметрическим) методом
(Самостоятельная работа студентов с участием лаборанта)
Цель работы: освоить методику определения гемоглобина крови гемоглобинционидным методом и определить содержание гемоглобина в исследуемой крови.
Для работы необходимы: фотоколориметр, пипетки на 0,02 мл и 5,0 мл, пробирки, кюветы толщиной 1 см, приготовленный трансформирующий раствор из набора, вата, антисептическое средство, одноразовый скарификатор. Объект исследования ― кровь человека.
Ход работы
Приготовить опытную пробу. Для этого к 5 мл приготовленного трансформирующего раствора добавить 0,02 мл полученной из пальца цельной крови. Разведение крови в этом случае составит 251. Полученный раствор тщательно перемешать, выдержать 5–10 минут, а затем перенести в кювету фотоэлектроколориметра.
Приготовить кювету с трансформирующим раствором. Для этого отмерить 5 мл трансформирующего раствора и перенести его в аналогичную кювету (как для разбавленной крови).
Совместно с лаборантом произвести измерение согласно инструкции прибора. Измерения проводятся не менее 3 раз и затем вычислить среднюю арифметическую.
Расчет содержания гемоглобина в исследуемой крови произвести по формуле:
Hb(г/ %) = EEстоп ×C ×K ×0,001,
где: Еоп ― экстинкция опытной пробы; Ест ― экстинкция стандартного раствора (определяется однократно для одного
набора из 200 проб); С ― концентрация гемоглобинцианида (59,8 мг/%);
К ― степень разведения крови (в 251 раз).
Ввыводесодержаниегемоглобинависследуемойкровисравнитьснормой. Перевести количество гемоглобина вединицы СИ. Для этогополученные
поформулезначенияумножитьна10 ивыразитьрезультаты вг/л.
Лабораторная работа 3.3. Определение цветового показателя крови
Цветовой показатель (ЦП) отражает насыщенность эритроцитов гемоглобином.
Цель работы: освоить методику и рассчитать ЦП крови.
9
Для работы необходимы: данные количества эритроцитов и содержания гемоглобина в крови, полученные при выполнении лабораторной работы 2 занятия 2 и лабораторной работы 1 занятия 3.
Ход работы
У испытуемого определяют количество эритроцитов и гемоглобина в крови. Расчет цветового показателя производят по формуле:
ЦП = Hb(г/ л) ×3 ,
A
где: А ― число эритроцитов в 1 мкл (первые три цифры).
ЦП можно определить по номограмме (рисунок 3).
Рисунок 3 — Номограмма для определения величины цветового показателя:
а ― шкала величин цветового показателя, б ― шкала процентного содержания гемоглобина по Сали, в ― число эритроцитов в одном мкл.
Полученную величину цветового показателя сравнить с нормой.
ЗАНЯТИЕ4. ФИЗИОЛОГИЯЛЕЙКОЦИТОВ. СВЕРТЫВАНИЕКРОВИ
Лабораторная работа 4.1. Подсчет количества лейкоцитов
(Самостоятельная работа студентов с участием лаборанта)
Цель работы: освоить методику и определить количество лейкоцитов в исследуемой крови.
Для работы необходимы: микроскоп, счетная камера Горяева, меланжер для подсчета лейкоцитов, 5% раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовым синим, покровные стекла, автоматическая пипетка,
10