пробирки, вата, антисептическое средство, одноразовый скарификатор. Объект исследования ― кровь человека.
Ход работы
Камеру Горяева предварительно подготовить путем притирания покровного стекла к боковым выступающим граням камеры до появления цветных (ньютоновских) колец. В каплю свежей крови погрузить кончик меланжера (смесителя) для лейкоцитов с белой бусинкой в расширении (см. рисунок 1) и набрать кровь до метки 0,5 без пузырьков и быстро, пока кровь не свернулась, перенести кончик меланжера в раствор уксусной кислоты, подкрашенной метиленовым синим. Раствор уксусной кислоты набрать до метки 11, при этом кровь разводится в 20 раз. После этого взять заполненный меланжер, зажать его концы 1 и 3 пальцами и в течении 1 мин его встряхивать. После тщательного перемешивания крови, удалив предварительно 1−2 капли заполнить счетную камеру.
При необходимости разведение такой степени может быть выполнено другим способом, например, смешиванием 0,1 мл крови с 2,0 мл 5% уксусной кислоты в пробирке. Содержимое пробирки в этом случае следует тщательно перемешать.
Заполнив камеру, поместить ее под микроскоп и приступить к подсчету. Лейкоциты удобнее считать при малом увеличении. Подсчет производить в 25 больших квадратах, что составляет 400 маленьких квадратиков. При подсчете пользоваться правилом Егорова: лейкоциты, лежащие на правой и нижней границах (линиях) данного квадрата не учитываются.
Формула для вычисления количества лейкоцитов в 1 мм3 крови:
N = B ×4000×20 , 400
где: N ― искомое число лейкоцитов;
В ― число лейкоцитов в 25 больших (400 малых) квадратах; 4000 ― множитель для получения содержания лейкоцитов в 1 мкл крови; 400 ― число маленьких квадратиков в 25 больших квадратах; 20 ― степень разведения крови.
Для перевода количества лейкоцитов в единицы СИ, полученную величину умножить на 106 и выразить в N×109. Сравнить найденное количество лейкоцитов в крови испытуемого с нормой.
Лабораторная работа 4.2. Определение скорости свертывания крови по Альтгаузену
(Самостоятельная работа студентов под контролем преподавателя)
Существует целый ряд методов для определения времени свертывания крови, при использовании которых получаются различные цифровые дан-
11
ные. Нормальные показатели скорости свертывания крови при использовании данного метода 5–6 мин при комнатной температуре.
Цель работы: освоить методику и определить время свертывания крови по Альтгаузену.
Для работы необходимы: секундомер, одноразовый скарификатор, антисептическое средство, вата, предметные стекла. Объект исследования ― кровь человека.
Ход работы
Предметное стекло согреть до температуры тела и нанести на него 2–3 капли крови, взятой из пальца по известной методике. Через каждые полминуты проводить через кровь скарификатором, пока заиглой не потянется первая нить фибрина. Этовремяобозначаетсякакначалопроцессасвертываниякрови.
В выводе сравнить полученный результат с нормой.
ЗАНЯТИЕ 5. ГРУППОВЫЕ СВОЙСТВА КРОВИ. СОЭ. ГЕМОЛИЗ ЭРИТРОЦИТОВ
Лабораторная работа 5.1. Определение группы крови
(Самостоятельная работа студентов под контролем преподавателя)
Групповая принадлежность крови определяется содержанием агглютиногенов (А и В) в эритроцитах и агглютининов (α и β) в плазме крови.
Цель работы: освоить методику определения группы крови и определить групповую принадлежность крови испытуемого.
Для работы необходимы: предметное стекло, стеклянные палочки, стандартные сыворотки I, II, III групп, вата, антисептическое средство, одноразовый скарификатор. Объект исследования ― кровь человека.
Ход работы
Предметное стекло поместить на белую бумагу и нанести (не смешивая) по капле стандартной сыворотки I, II и III групп. Рядом с каплями стандартных сывороток поместить на предметное стекло небольшие капельки полученной из пальца крови (примерно 1/3 от капли сыворотки). Тщательно размешать, соединив чистой сухой отдельной стеклянной палочкой капли крови и сыворотки, пока смесь не примет равномерного розового цвета.
Реакция агглютинации наступит через 1–5 мин (рисунок 4). При наличии агглютинации капля становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в виде комочков.
1. Отсутствие агглютинации в каждой из трех смешанных капель сывороток позволяет отнести исследуемую кровь к 0(I) группе.
12
2. Если агглютинация произошла в каплях сывороток I и III групп, то исследуемая кровь принадлежит к A(II) группе.
Рисунок 4 — Схема определения групп крови
3.Если агглютинация произошла в каплях сывороток I и II групп, то исследуемую кровь принадлежит к B(III) группе.
4.При наличии агглютинации в каплях сывороток I, II и III групп, исследуемая кровь принадлежит к AB (IY) группе.
Отметить групповую принадлежность исследуемой крови.
Лабораторная работа 5.2. Определение резус-фактора (Rh) крови
(Самостоятельная работа студентов под контролем преподавателя)
В эритроцитах 85% людей, кроме агглютиногенов А и В, содержится особый антиген, называемый резус-фактором (Rh). При переливании ре- зус-положительной крови резус-отрицательному реципиенту, у последнего на резус-фактор вырабатываются антитела, которые при повторной гемотрансфузии резус–положительной крови вызовут агглютинацию эритроцитов донора, приводящую к реакции несовместимости крови.
Цель работы: освоить методику определения резус-фактора и определить резус-принадлежность исследуемой крови.
Для работы необходимы: стандартная антирезус-сыворотка и контрольная сыворотка (не содержащая антирезус антител), предметное стекло, стеклянная палочка, свежая кровь, вата, антисептическое средство, одноразовый скарификатор. Объект исследования ― кровь человека.
Ход работы
На предметное стекло нанести одну каплю стандартной антирезуссыворотки с одной стороны (например, справа), и с другой стороны стекла —
13
каплю контрольной сыворотки. На стекло рядом с каждой сывороткой поместить по одной капле исследуемой крови (размер капли должен быть вдвое меньше, чем капля сыворотки). Затем чистой сухой стеклянной палочкой перемешать каплю крови с каплей стандартной антирезус– сыворотки, образуя общую каплю. Подобным образом чистой сухой стеклянной палочкой перемешать кровь со стандартной сывороткой. Наблюдать за реакцией, покачивая предметное стекло с каплями. Для большей уверенности в результате исследования: наличие агглютинации или ее отсутствия можно добавить в обе пробы по капле физиологического раствора. При наличии агглютинации эритроциты склеиваются в виде комочков.
Если исследуемая кровь резус-положительная, то в пробе со стандартной антирезус сывороткой будет наблюдаться агглютинация эритроцитов (в контроле ее быть не должно). Если кровь резус-отрицательная, агглютинация отсутствуетвобеихпробах. Анализможновыполнитьвпробирке.
В выводе отметить Rh-принадлежность испытуемой крови.
Лабораторная работа 5.3. Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) по Т. П. Панченкову
(Самостоятельная работа студентов с участием лаборанта)
Предотвращенная от свертывания цитратом натрия кровь при отстаивании разделяется на верхний светлый слой (плазма) и нижний красный слой (эритроциты).
Цель работы: освоить методику определения СОЭ и определить ее величину для исследуемой крови.
Для работы необходимы: прибор Панченкова, 5% раствор цитрата натрия, одноразовый скарификатор, часовое стекло для смешивания крови с антикоагулянтом, вата, антисептическое средство. Объект исследования ― кровь человека.
Ход работы
Капилляром из прибора Панченкова (рисунок 5) набрать 5% раствор цитрата натрия до метки Р и выпустить его на часовое стекло.
Проколоть палец, погрузить в каплю крови кончик капилляра и, наклоняя, набрать кровь до метки К. Кровь выдуть на часовое стекло и смешать с цитратом натрия. Тотчас набрать кровь второй раз до метки К и эту порцию также выдуть на часовое стекло. Быстро перемешать кровь на часовом стекле, набрать в капилляр смесь до метки 0 (К) и закрыть пальцем верхний конец капилляра, чтобы его содержимое не вытекало. Упереть нижний конец капилляра в нижнюю резиновую полоску прибора Панченкова и затем вставить верхний конец в резиновую полоску сверху.
14
Рис. 5. Прибор Панченкова для определения СОЭ:
А — общий вид; Б — капилляр, В — часовое стекло
На лабораторных занятиях с целью освоения методики определения СОЭ можно использовать донорскую кровь, которая уже содержит антикоагулянт. В этом случае можно сразу набрать в капилляр кровь до метки 0 (К) и поместить капилляр в прибор Панченкова.
Отметить время и ровно через час измерить высоту столбика прозрачной плазмы.
Записать величину СОЭ в мм/ч.
Сравнить полученные показатели СОЭ с нормой.
Лабораторная работа 5.4. Изучение различных видов гемолиза
(Самостоятельная работа студентов с участием лаборанта)
Гемолизом называется разрушение эритроцитов с выходом гемоглобина в плазму крови. Гемолизированная кровь прозрачна и имеет специфический красный цвет («лаковая кровь»).
Цель работы: освоить методику и изучить различные виды гемолиза. Для работы необходимы: штатив с пятью пробирками, пипетки, физиологический раствор, дистиллированная вода, 5% раствор аммиака, 0,1% раствор НСI, цитратная кровь, вата. Объект исследования ― кровь человека.
Ход работы
В штатив поставить 5 пробирок, в каждую из которых поместить по 2–3 капли крови. В первую и пятую пробирки добавить по 3 мл физиологического раствора, во вторую ― 3 мл дистиллированной воды, в третью ― 3 мл 0,1% раствора НСl, в четвертую ― 3 мл 5% раствора аммиака. Разбавленную кровь в пятой пробирке заморозить в холодильнике. Затем пробирку вынуть и содержимое оттаять в горячей воде.
15
Рассмотреть все пробирки, сравнить результат. Необходимо определить наличие или отсутствие гемолиза. Описать механизм гемолиза в каждой пробирке. В выводе отметить наблюдаемые виды гемолиза.
ЗАНЯТИЕ6. ОСМОТИЧЕСКАЯРЕЗИСТЕНТНОСТЬ ЭРИТРОЦИТОВ
Лабораторная работа 6.1. Изучение осмотической резистентности эритроцитов
(Самостоятельная работа студентов с участием лаборанта)
Осмотическая резистентность ― способность эритроцитов противостоять понижающемуся осмотическому давлению.
Цель работы: освоить методику и определить границы осмотической резистентности эритроцитов.
Для работы необходимы: штатив с 8 пробирками, растворы хлорида натрия, убывающей концентрации от 0,85 до 0,3%, донорская кровь, пипетки, вата. Объект исследования ― кровь человека.
Ход работы
Пробирки последовательно пронумеровать и поставить в штатив. Пипеткойналитьвпробиркипо3 млраствораNaCl впорядкеуказанномвтаблице1.
Таблица 1 — Концентрация раствора NaCl, %
№ пробирки |
Концентрация |
№ пробирки |
Концентрация |
|
раствора NaCl, % |
раствора NaCl, % |
|||
|
|
|||
1 |
0,85 |
5 |
0,45 |
|
2 |
0,70 |
6 |
0,40 |
|
3 |
0,60 |
7 |
0,35 |
|
4 |
0,50 |
8 |
0,30 |
Затем с помощью пипетки добавить в каждую пробирку по 3−4 капли крови. Через5 миннаблюдатьрезультаты―наличиеилиотсутствиегемолиза.
Записать, в какой из пробирок и при какой концентрации раствора NaCl отмечаются первые признаки гемолиза, при какой концентрации кровь полностью гемолизирована.
Определить верхнюю и нижнюю границы резистентности эритроцитов и в выводе сравнить данные с нормой.
16
ЗАНЯТИЕ 7. ИТОГОВОЕ ЗАНЯТИЕ ПО РАЗДЕЛУ «ФИЗИОЛОГИЯ КРОВИ»
Контрольные вопросы
1.Понятие о системе крови. Основные функции крови.
2.Количество крови у человека. Кровь циркулирующая и депонированная. Гиповолемия и гиперволемия, их виды. Последствия кровопотери. Гематокрит, его величина и изменения при различных видах гипер- и гиповолемий. Диагностическое значение.
3.Плазма крови, ее состав и свойства. Белки плазмы крови, их характеристика, количество и функции. Онкотическое давление плазмы крови, его величина и физиологическое значение.
4.Физико-химические свойства крови. Осмотическое давление, факторы, его определяющие, величина. Гипер-, гипо- и изотонические (физиологические) растворы. Вязкость и относительная плотность крови, факторы их определяющие, величина и физиологическое значение.
5.Кислотно-основноесостояниекрови. Активнаяреакция(рН) крови. Буферныесистемыкрови. Щелочнойрезерв. Ацидоз, алкалоз, ихвидыипроисхождение.
6.Эритроциты, особенностиихстроения, свойства, состав, функции, количество. Эритроцитоз. Анемия. Гемоглобин, егостроение, свойства, функциииколичество. Соединениягемоглобина. Разновидностигемоглобина, ихотличительныесвойства.
7.Гемолиз, его виды. Осмотическая резистентность эритроцитов, ее величина. Диагностическое значение. Скорость оседания эритроцитов (СОЭ), факторы влияющие на ее величину. Диагностическое значение.
8.Лейкоциты, их классификация, свойства и функции. Лейкоцитарная формула, ее диагностическая значимость. Лейкоцитоз, его виды.
9.Тромбоциты, их строение, свойства, количество и функции. Сосу- дисто-тромбоцитарный гемостаз, его фазы.
10.Коагуляционныйгемостаз. Плазменныефакторысвертываниякрови. Факторысвертываниякровиформенныхэлементов. Фазыкоагуляционногогемостаза.
11.Фибринолиз, факторы его обеспечивающие. Противосвертывающие механизмы. Антикоагулянты, классификация, физиологическая роль.
12.Группы крови. Система АВО. Факторы, определяющие групповую принадлежность крови. Биопроба. Резус-фактор. Сущность анти-Д- профилактики. Основные принципы переливания крови.
13.Лимфа и лимфообращение. Основные функции лимфатической системы. Лимфа, ее состав и свойства. Лимфообразование. Движение лимфы. Лимфоузлы, их функции.
14.Регуляциигемопоэзаисистемыкрови. Нейрогуморальныемеханизмы.
15.Кровезамещающие растворы и основные требования, предъявляемые к ним. Солевые растворы. Коллоидные растворы. Препараты крови. Их положительные и отрицательные свойства.
17
ФИЗИОЛОГИЯ СЕРДЕЧНОСОСУДИСТОЙ СИСТЕМЫ
ЗАНЯТИЕ 8. КРОВООБРАЩЕНИЕ. ФИЗИОЛОГИЯ СЕРДЦА
Лабораторная работа 8.1. Электрокардиография
(Самостоятельная работа студентов под контролем преподавателя)
Электрокардиография ― метод регистрации биоэлектрической активности сердца. Электрический потенциал, генерируемый сердечной мышцей, можно зарегистрировать от поверхности тела. Электрокардиограмма (ЭКГ) обычно состоит из трех направленных вверх положительных зубцов P, R, T, и двух направленных вниз отрицательных зубцов Q, S (рисунок 6).
Рисунок 6 — Схема электрокардиограммы
В ней различают пять интервалов: P-Q, QRS, S-T, Q-T, R-R. Зубец Р ― предсердный комплекс ЭКГ; он является алгебраической суммой потенциалов, возникающих в правом и левом предсердиях при их возбуждении. QRST ― желудочковые потенциалы, они отражают процессы возбуждения желудочков. О состоянии сердца судят по амплитуде зубцов (измеряется от изолинии до вершины) и длительности интервалов.
При электрокардиографии используется метод биполярных и униполярных отведений. Для проведения данной работы применяются три стандартных биполярных отведения, при которых регистрируется разность потенциалов между конечностями ― от правой и левой руки (I отведение), правой руки и левой ноги (II отведение), левой руки и левой ноги (III отведение) (рисунок 7).
Цель работы: освоить методику, произвести запись и дать характеристику ЭКГ.
Для работы необходимы: электрокардиограф ЭК1ТЦ-01, электроды, электродная паста или 1,0% раствор NaCl, марля или фильтровальная бумага, клей, антисептическое средство. Объект исследования ― человек.
18
Рисунок 7 — Схема отведений при электрокардиографии
ихарактер полученных при этом кривых:
А— стандартные отведения, Б — запись ЭКГ в 3-х стандартных отведениях
Ход работы
1.Наложение электродов. Пациента уложить на кушетку. Обработать антисептическим средством электроды и участки тела в местах наложения электродов. Смазать электроды электропроводящей пастой или смочить прокладки 1,0% раствором NaCl. Наложить электроды согласно схеме: красный ― правая рука, желтый ― левая рука, зеленый ― левая нога, черный ― индифферентный, накладывается на правую ногу.
2.Записать ЭКГ. ЭКГ, зарегистрированную на всех отведениях, вклеить
впротокол опыта.
3.Отметить зубцы и интервалы соответствующими обозначениями.
4.Определить частоту сокращений и ритм сердца ― по длительности интервалов R-R. Сравнить с нормой.
5.Измерить амплитуду зубцов P, Q, R, S, T.
6.Измерить длительность зубцов и интервалов определив цену 1 мм, (с учетом 1 мм = 0,04 с, исходя из скорости движения ленты 25 мм/с).
На основании проведенного анализа ЭКГ в выводе охарактеризовать функциональное состояние сердца испытуемого.
Лабораторная работа 8.2. Экстрасистола
(Самостоятельная работа студентов) Виртуальный эксперимент на изолированном сердце лягушки
Цель работы: демонстрация нарушений ритма сердечных сокращений при внеочередном возбуждении.
Для работы необходима: компьютерная программа «Inter NICHE», раздел «Сердце».
Ход работы
Открыть в компьютере d:\ Inter NICHE (F) LUPRAFISIM. После появления заставки LuPraFi-Sim, войти в версию на русском или английском языке
19
(для иностранных студентов). Через содержание открыть «Разделы». Открыть раздел «Сердце», выбрать эксперимент «Воздействие электрических стимулов насердечнуюдеятельность» ивыполнитьвсоответствииспрограммой.
Технология эксперимента
«Приготовление препарата изолированного сердца лягушки»
Лягушка обездвиживается декапитацией с последующим разрушением спинного мозга.
Вскрывается грудная клетка, сердце изолируется после пересечения приносящих и выносящих магистральных сосудов. Сердце фиксируется в миографе, на верхушку накладывается серфин, с помощью которого осуществляется соединение с регистрирующим устройством.
На экране монитора наблюдаем механограмму работы сердца. Курсор устанавливаем на кнопку «Стимуляция». Левой клавишей мыши наносим электрические стимулы. Обратить внимание на фазу сердечного цикла, во время которой внеочередной электрический стимул вызывает экстрасистолу.
Зарисовать схему установки для выполнения эксперимента. Объяснить, почему во время фазы сокращения сердца не возникает экстрасистола. Объяснить происхождение компенсаторной паузы. Зарисовать экстрасистолу и компенсаторную паузу.
Лабораторная работа 8.3. Нарушение деятельности проводящей системы сердца
(Самостоятельная работа студентов) Виртуальный эксперимент на изолированном сердце лягушки
Цель работы: демонстрация изменений координации сократительной активности отделов сердца при нарушении распространения возбуждения по проводящей системе сердца.
Для работы необходима: Компьютерная программа «Inter NICHE», раздел «Сердце».
Ход работы
Открыть в компьютере d:\ Inter NICHE (F) LUPRAFISIM. После появ-
ления заставки LuPraFi-Sim, войти в версию на русском или английском языке (для иностранных студентов). Через содержание открыть «Разделы». Открыть раздел «Сердце», выбрать эксперимент «Наложение лигатур Станиуса» и выполнить в соответствии с программой:
1.Наблюдатьнаэкранемониторазанормальнойработайсердцалягушки.
2.При наложении первой лигатуры вокруг синусо-предсердного желобка, с цельюотделенияганглияРемакаотостальнойчастисердцалягушки, наблюдаем заизменениемвсокращениисердца. Обратитьвнимание, чтовенозныйсинуссокращаетсявсинусовомритме, апредсердияижелудочкинесокращаются.
20