19. Волютиновые зёрна. Химический состав. Функции. Способы окраски.

1. Характерны только для дифтерийной палочки.

2. Располагаются по полюсам и интенсивно прокрашиваются (метахромазия).

3. По химическому составу – полифосфаты.

4. Играют диагностическую и трофическую роль.

5. Выявляются простым методом окраска – Окраска метиленовым синим в течение 20-30 секунд (тёмно-синие зёрна на полюсах светло-голубых тел бактерий) и сложным методом – по Нейссеру.

Окраска по Нейссеру: 1. На фиксированный мазок наносят ацетат синьки Нейссера – 2 минуты, промывают водой. 2. Наносят раствор Люголя на 30 секунд и промывают водой. 3. Везувин на 1 минуту, промывают водой, высушивают, микроскопируют.

Результат: зёрна волютина, имеющие щелочную реакцию, воспринимают синьку и окрашиваются в тёмно-синий цвет. Цитоплазма с кислой рН воспринимает везувин и окрашивается в жёлтый цвет.

20. Простые и сложные методы окраски. Механизм окраски по Граму.

Способы окрашивания микробов делятся на простые и сложные, или дифференциальные.

При простой окраске употребляется только один краситель, чаще всего - фуксин Пфейффера (экспозиция 1-2 мин), или синька Леффлера (экспозиция 3-5 мин). Их относят к группе анилиновых красителей. Сложные, или дифференциальные способы окраски бактерий основаны на особенностях физико-химического строения микробной клетки, и применяются для детального изучения структуры клетки, также для дифференциации данного микроба от других. Способность микробов воспринимать красители называется тинкториальными свойствами.

Окраска по Граму (механизм)

Этап	Продолжительность	Результат
		Грамположительные	Грамотрицательные
Генциановый фиолетовый	1 – 2 минуты	Синие	Синие
Раствор Люголя	1 – 2 минуты	Синие	Синие
Этиловый спирт с последующим промыванием водой	½ минуты	Синие	Бесцветные
Водный фуксин	1 – 2 минуты	Синие	Красные

Простые		Сложные (основные)
Метод	Цель	Метод	Цель
Окраска метиленовым синим	Изучение: формы бактерий их расположения в мазке	Окраска по Граму (основной метод окраски в бактериологии)	Определение типа строения клеточной стенки
		Окраска по Цилю-Нильсену	Выявление: - кислотоустойчивых бактерий (микобактерий) - спор
		Окраска по Нейссеру	Выявление включений волютина и идентификация по их наличию коринебактерий
Окраска водным фуксином		Окраска по Бурри-Гинсу	Выявление капсул
		Окраска по Морозову	Выявление: жгутиков трепонем вирусов натуральной и ветряной оспы
		Окраска по Здрадовскому	Выявление хламидий
		Окраска по Романовскому-Гимзе	Выявление: риккетсий спирохет простейших

Грамхарактеристика основных форм бактерий

• Шарообразные формы бактерий - кокки грамположительны (Гр+), за исключением гонококка, менингококка и катарального микрококка.

• Цилиндрические формы: спорообразующие палочки - бациллы и клостридии – Гр+.

• Неспорообразующие (собственно бактерии) – грамотрицательны (Гр-), за исключением актиномицетной линии бактерий. В последнюю входят: коринебактерии, в т. ч. возбудитель дифтерии; микобактерии – возбудители туберкулёза, микобактериозов и актиномикоза.

• Актиномикотическая друза окрашивается по Граму смешанно: аморфный центр - Гр+, периферия - Гр-.

• Извитые формы: вибрионы, спириллы, спирохеты – Гр-.

• Риккетсии, хламидии - Гр-.

• Микроорганизмы с дефектами или не имеющие КС–Гр-.