30. Основные принципы конструирования питательных сред. Классификация.
Питательные среды (ПС) применяются для искусственного выращивания микроорганизмов. Требования, предъявляемые к ПС:
1) стерильность;
2) достаточное содержание основных органических и зольных элементов;
3) прозрачность;
4) иметь оптимальную рН;
5) достаточная влажность (не менее 60%);
6) наличие факторов роста различного происхождения;
7) изотоничность;
8) вязкость.
Классификация питательных сред
По консистенции: жидкие, полужидкие, плотные
Уплотнители: агар-агар (0,3-2,5%), желатин (10-15%).
По происхождению: естественные (молоко, картофель), искусственные, полусинтетические синтетические
По составу: простые (МПА, МПБ, овощи, молоко);
сложные (1% глюкозы – сахарный агар, 10-20% сыворотки крови – кровяной агар и др.,).
По назначению: основные (простые, сложные)
специальные, в т.ч.
элективные (селективные) - солевой МПА, щелочной МПА;
дифференциально-диагностические (Эндо, Гисса; Плоскирева);
консервирующие;
обогатительные (солевой МПБ).
Агар – полисахарид, добываемый из морских водорослей определенных видов; используется для уплотнения питательных сред в бактериологии по такому же алгоритму, как в быту крахмал или желатин
Натуральные среды готовятся на основе отваров, экстрактов мяса, рыбы, овощей и др. натуральных продуктов
Простые натуральные среды представляют собой такие отвары или экстракты
Сложные натуральные среды получают путем добавления в простые натуральные среды любого вещества (красителя, сахара, антибиотика, крови и т.д.)
Синтетические питательные среды получают, смешивая чистые химические вещества (как правило, соли)
Элективные (селективные, избирательные, обогащения) питательные среды – это среды, содержащие вещества, используемые бактериями определенных видов и не благоприятствующие или даже препятствующие росту других бактерий
Дифференциально-диагностические питательные среды – это среды, позволяющие отличать одни виды бактерий от других по их ферментативной активности или культуральным свойствам
Консервирующие питательные среды – это среды, используемые, например, при доставке патологического материала в бактериологическую лабораторию – так как метаболическая активность на них бактерий сводится практически к нулю, то бактерии сохраняются, но не размножаются
31. Бактериологический метод диагностики.
Культуральный (бактериологический) метод исследования - совокупность способов, направленных на выделение и идентификацию чистых культур микроорганизмов (бактерий) с помощью культивирования на питательных средах. Чистая культура - совокупность микроорганизмов одного вида. Чаще всего чистую культуру получают путем отбора и культивирования изолированной колонии (потомство одной микробной клетки). Этапы метода: 1. Забор материала для исследования. 2. Выделение чистой культуры и ее идентификация. 3. Заключение. Забор материала для исследования. Вид исследуемого материала зависит от цели исследования (диагностика - от больного; эпиданализ - из внешней среды, продуктов питания, больного и (или) бактерионосителя). Выделение чистой культуры: 1. Посев материала (после предварительной микроскопии) на чашку с плотной питательной средой (лучше дифференциально-диагностической или селективной) с целью получения изолированных колоний. Производят его чаще всего методом механического разобщения. В некоторых случаях (например, кровь) материал предварительно засевают в жидкую среду обогащения с последующим пересевом на чашку с агаровой средой. Иногда до посева проводят селективную обработку материала (с учетом свойств выделяемого микроорганизма; например, обработка кислотой или щелочью для выделения устойчивых бактерий). Культивируют при температуре 37°С в течение 18-24 часов. Время культивирования для разных видов бактерий может колебаться. 2. Изучение колоний на чашке с агаром (культуральные признаки), отбор наиболее типичных; б) приготовление мазков из этих колоний с окраской (по Граму или другими методами); а) отсев остатка исследованной колонии на среду накопления и выращивание в термостате при оптимальной температуре. 3. Изучение чистоты культуры, полученной на среде накопления. С этой целью готовят мазок, окрашивают (чаще по Граму), микроскопически изучают морфологическую и тинкториальную однородность. 4. Идентификация чистой культуры. Заключение. По совокупности признаков в сравнении со свойствами эталонных (типовых) штаммов указывается вид выделенного из материала микроорганизма. Оценка метода: достоинства: относительно высокая чувствительность и точность, возможность определить численность микробов в исследуемом материале, а также чувствительность к антибиотикам; недостатки: относительная длительность, метод дорогостоящий.
