- •Vміністерство освіти і науки україни
- •Лабораторна робота № 1 органи, тканини і клітини імунної системи
- •Загальні відомості
- •Морфологія та функції крові.
- •Розміри та кількість формених елементів крові людини
- •Центральні і периферійні органи імунної системи.
- •Завдання на виконання:
- •Загальні відомості
- •Показники гемограми та лейкоцитарної формули здорової людини гемограма
- •Лейкоцитарна формула
- •Завдання на виконання:
- •Контрольні запитання:
- •Загальні відомості
- •Завдання на виконання:
- •Лейкоцитарна формула крові щурів
- •Контрольні запитання:
- •Лабораторна робота № 4 кількісне визначення антитіл методом локального гемолізу в гелі
- •Загальні відомості
- •Біологічні властивості т-залежних і т-незалежних антигенів
- •Гель, що мiстить антитiла
- •Завдання на виконання:
- •Контрольні запитання:
- •Лабораторна робота № 5 дослідження фагоцитарної ланки імунітету (початок). Вивчення кисеньзалежної бактерицидності фагоцитів в нст-тесті
- •Загальні відомості
- •Завдання на виконання:
- •Контрольні запитання:
- •Загальні відомості
- •Завдання на виконання:
- •Контрольні запитання:
- •Лабораторна робота № 7 імунодіагностика. Підбір імунокоригуючих препаратів
- •Загальні відомості
- •Препарати природного походження
- •Тимічні препарати
- •Препарати імуноглобулінів
- •Препарати лізатів мікроорганізмів (вакцинуючі імунотропні препарати)
- •Синтетичні імупотропні засоби
- •Рекомбінантні імунотропні препарати
- •Завдання на виконання:
- •Контрольні запитання:
- •Лабораторна робота № 8 підсумкове заняття
- •Завдання на виконання:
- •Рекомендована література
- •Підготовка скляного посуду
- •Підготовка пластикового посуду
- •Рецепти приготування реактивів, барвників, поживних середовищ лабораторна робота №2.
- •Лабораторна робота №3.
- •Лабораторна робота №4.
- •Лабораторна робота №5.
- •Лабораторна робота №6.
- •Лабораторна робота №7.
- •Основи імунології лабораторний практикум
Завдання на виконання:
Завдання №1. Вивчення поглинальної здатності фагоцитів.
1. До пробірки з антикоагулянтом (0,2 мл 2% розчину натрію лимоннокислого або 0,2 мл гепарину в концентрації 50 од/мл) вносять 0,1 мл крові, ретельно перемішують.
2. Додають 0,05 мл зависини тест-мікробної культури. Як тест-мікроб використовують добову агарову культуру Е. соlі (або іншу придатну мікробну культуру) у фізіологічному розчині в концентрації 500 млн мікробних тіл в 1 мл (5×108 кл/мл).
3. Витримують у термостаті за 37°С упродовж 30 хв.
4. Центрифугують при 2000 – 3000 об/хв 15 хв до розшарування рідини на верхній (плазма), нижній (еритроцити) та середній (лейкоцити) шари.
5. Пастерівською піпеткою відсмоктують середній шар і роблять мазок.
6. Мазок підсушують на повітрі 2 – 3 год.
7. Фіксують фарбою-фіксатором Мая-Грюнвальда упродовж 2 – 3 хв. Фарбу змивають дистильованою водою, мазки підсушують на повітрі та залишають до наступного заняття.
Завдання №2. Вивчення перетравлювальної здатності фагоцитів.
1. До пробірок №1 та №2 вносять 0,2 мл антикоагулянту(0,2 мл 2% розчину натрію лимоннокислого або 0,2 мл гепарину в концентрації 50 од/мл).
2. До пробірки №1 з антикоагулянтом вносять 0,1 мл крові, 0,2 мл середовища 199 і 0,1 мл 0,1% розчину нітросинього тетразолію (спонтанний НСТ-тест).
3. До пробірки №2 з антикоагулянтом вносять 0,1 мл крові, 0,2 мл середовища 199 і 0,1 мл 0,1 зависини E. coli знешкодженої нагріванням (1 млрд кл/мл) (стимульований НСТ-тест).
4. Проби ретельно перемішують.
5. Проби інкубують у термостаті за 37ºС упродовж 30 хв.
6. Після закінчення інкубування до пробірки №1 додають 3,0 мл дистильованої води для гемолізу еритроцитів. Добре перемішують.
7. Після закінчення інкубування до пробірки №2 додають 0,2 мл 5% розчину формаліну. Ретельно перемішують. Пробу залишають на 10 – 15 хв за кімнатної температури. Через 15 хв додають 3,0 мл дистильованої води. Пробу добре струшують.
8. Проби центрифугують при 1500 об/хв упродовж 5 – 7 хв.
9. Надосадову рідину зливають, до осаду додають 0,1 мл фіз. розчину і вміст пробірки виливають на знежирене предметне скло.
10. Мазок підсушують на повітрі і залишають до наступного заняття.
11. Оформити протокол заняття, зробити висновки.
Контрольні запитання:
Які клітини крові належать до фагоцитувальних клітин?
Які Вам відомі механізми оксигензалежного та оксигеннезалежного знищення мікроорганізмів?
Охарактеризуйте основні етапи фагоцитозу.
Для яких імунологічних досліджень використовується НСТ-тест?
ЛАБОРАТОРНА РОБОТА № 6
ДОСЛІДЖЕННЯ ФАГОЦИТАРНОЇ ЛАНКИ ІМУНІТЕТУ
(ЗАКІНЧЕННЯ). ВИЗНАЧЕННЯ ПОГЛИНАЛЬНОЇ ЗДАТНОСТІ ФАГОЦИТІВ
Мета роботи: вивчити явище фагоцитозу, визначити активності нейтрофільних гранулоцитів (закінчення).
План:
1. Поняття про комплімент
2. Шляхи активації комплементу: класичний та альтернативний.
3. Біологічна активність комплементу.
4. Фагоцити і комплімент.
5. Поняття про імунну відповідь.
6. Етапи розвитку імунної відповіді організму.
7. Первинна та вторинна імунна відповідь.
8. Взаємодія клітин при імунній відповіді.
9. Участь фагоцитів в імунній відповіді.
Матеріали та обладнання: мазки виготовлені під час виконання лабораторної роботи №5, етиловий спирт, метанол, 0,1%-ий спиртовий розчин нейтрального червоного барвника на ацетатному буфері, фарба Романовського-Гімзе, фарба Мая-Грюнвальда, світловий мікроскоп, імерсійне масло.