1. Гемофилы

2. Методы культивирования, состав питательных сред Основные принципы культивирования бактерий.

Универсальным инструментом для производства посевов является бактериальная петля. Кроме нее, для посева уколом применяют специальную бактериальную иглу, а для посевов на чашках Петри — металлические или стеклянные шпатели. Для посевов жидких материалов наряду с петлей используют пастеровские и градуированные пипетки. Первые предварительно изготовляют из стерильных легкоплавких стеклянных трубочек, которые вытягивают на пламени в виде капилляров. Конец капилляра сразу же запаивают для сохранения стерильности. У пастеровских и градуированных пипеток широкий конец закрывают ватой, после чего их помещают в специальные пеналы или обертывают бумагой и стерилизуют.

При пересеве бактериальной культуры берут пробирку в левую руку, а правой, обхватив ватную пробку IV и V пальцами, вынимают ее, пронося над пламенем горелки. Удерживая другими пальцами той же руки петлю, набирают ею посевной материал, после чего закрывают пробирку пробкой. Затем в пробирку со скошенным агаром вносят петлю с посевным материалом, опуская ее до конденсата в нижней части среды, и зигзагообразным движением распределяют мате риал по скошенной поверхности агара. Вынув петлю, обжигают край пробирки и закрывают ее пробкой. Петлю стерилизуют в пламени горелки и ставят в штатив. Пробирки с посевами надписывают, указывая дату посева и характер посевного материала (номер исследования или название культуры).

Посевы «газоном» производят шпателем на питательный агар в чашке Петри. Для этого, приоткрыв левой рукой крышку, петлей или пипеткой наносят посевной материал на поверхность питательного агара. Затем проводят шпатель через пламя горелки, остужают его о внутреннюю сторону крышки и растирают материал по всей поверхности среды. После инкубации посева появляется равномерный сплошной рост бактерий. Искусственные питательные среды, их классификация. Требования, предъявляемые к питательным средам.

Питательной средой в микробиологии называют среды, содержащие различные соединения сложного или простого состава, которые применяются для размножения бактерий или других микроорганизмов в лабораторных или промышленных условиях.

Питательные среды готовят из продуктов животного или растительного происхождения. Большое значение имеет наличие в питательной среде ростовых факторов, которые катализируют метаболические процессы микробной клетки (витамины группы В, никотиновая кислота и др.).

Искусственные среды готовят по определенным рецептам из различных настоев или отваров животного или растительного происхождения с добавлением неорганических солей, углеводов и азотистых веществ.

В бактериологической практике чаще всего используют сухие питательные среды, которые получают на основе достижений современной биотехнологии. Для их приготовления используют экономически рентабельное непищевое сырье: утратившие срок годности кровезаменители (гидролизин—кислотный гидролизат крови животных, аминопептид — ферментативный гидролизат крови; продукты биотехнологии (кормовые дрожжи, кормовой лизин, виноградная мука, белколизин). Сухие питательные среды могут храниться в течение длительного времени, удобны при транспортировке и имеют относительно стандартный состав.

По консистенции питательные среды могут быть жидкими, полужидкими, плотными. Плотные среды готовят путем добавления к жидкой среде 1,5—2% агара, полужидкие — 0,3— 0,7 % агара. Агар представляет собой продукт переработки особого вида морских водорослей, он плавится при температуре 80—86 °С, затвердевает при температуре около 40 °С и в застывшем состоянии придает среде плотность. В некоторых случаях для получения плотных питательных сред используют желатин (10—15%). Ряд естественных питательных сред (свернутая сыворотка крови, свернутый яичный белок) сами по себе являются плотными.

По целевому назначению среды подразделяют на основные, элективные и дифференциально-диагностические.

К основным относятся среды, применяемые для выращивания многих бактерий. Это триптические гидролизаты мясных, рыбных продуктов, крови животных или казеина, из которых готовят жидкую среду — питательный бульон и плотную — питательный агар. Такие среды служат основой для приготовления сложных питательных сред — сахарных, кровяных и др., удовлетворяющих пищевые потребности патогенных бактерий.

Элективные питательные среды предназначены для избирательного выделения и накопления микроорганизмов определенного вида (или определенной группы) из материалов, содержащих разнообразную постороннюю микрофлору. При создании элективных питательных сред исходят из биологических особенностей, которые отличают данные микроорганизмы от большинства других. Например, избирательный рост стафилококков наблюдается при повышенной концентрации хлорида натрия, холерного вибриона — в щелочной среде и т. д.

Дифференциально-диагностические питательные среды применяются для разграничения отдельных видов (или групп) микроорганизмов. Принцип построения этих сред основан на том, что разные виды бактерий различаются между собой по биохимической активности вследствие неодинакового набора ферментов.

Особую группу составляют синтетические и полусинтетические питательные среды. В состав синтетических сред входят химически чистые вещества: аминокислоты, минеральные соли, углеводы, витамины. В полусинтетические среды дополнительно включают пептон, дрожжевой экстракт и другие питательные вещества. Эти среды чаще всего применяют в научно-исследовательской работе и в микробиологической промышленности при получении антибиотиков, вакцин и других препаратов.

В последние годы в целях экономии питательных сред и ускоренной идентификации некоторых микроорганизмов (энтеробактерии, стафилококки, стрептококки и др.) применяются так называемые микротест-системы (МТС). Они представляют собой полистироловые пластины с лунками, в которых содержатся стерильные дифференциально-диагностические среды. Стерилизацию МТС проводят УФ-облучением. Микротест-системы особенно удобны при массовых бактериологических исследованиях в практических лабораториях.

Требования, предъявляемые к питательным средам.

Любая питательная среда должна отвечать следующим требованиям: содержать все необходимые для размножения микроорганизмов вещества в легкоусвояемой форме; иметь оптимальные влажность, вязкость, рН, быть изотоничной и по возможности прозрачной. Каждую питательную среду стерилизуют определенным способом в зависимости от ее состава.

3. Дисбактериоз Классификация дисбактериозов.Эубиоз (от греч. еu – хорошо и bios – жизнь) – состояние динамического равновесия между компонентами экосистемы «внешняя среда – макроорганизм – микрофлора» и связанное с ним состояние здоровья.Дисбактериоз (от греч. dys – приставка, означающая отрицание, и bacteria) – изменения количественного и качественного состава нормальной микрофлоры. Дисбактериоз приводит к состоянию нарушенного функционирования составных частей экосистемы «внешняя среда – макроорганизм – бактериальная микрофлора», в результате чего развивается заболевание, усугубляется болезнь и даже может наступить смерть макроорганизма.

Иногда используется более широкое понятие дисбиоз, характеризующее нарушение равновесия между макроорганизмом и всеми группами микроорганизмов, населяющих его, включая вирусы, грибы, простейшие, гельминты. Под это понятие подпадают такие широко распространенные заболевания, как рота- и энтеровирусные заболевания, вирусные гепатиты, грипп, ОРВИ и другие вирусные инфекции, туберкулез, микозы, описторхоз, лямблиоз, гельминтозы и т. д.

В настоящее время условно выделяют четыре степени кишечного дисбактериоза:

1-я степень, илилатентная, компенсированная форма – наблюдаются незначительные количественные изменения в аэробной части микрофлоры, увеличение или уменьшение количества эшерихий.

2-я степень (субкомпенсированная форма) – наряду с количественными, наблюдаются качественные изменения эшерихий, снижается количество бифидобактерий, увеличивается количество условно-патогенных бактерий, псевдомонад, грибов.

3-я степень – значительно снижен уровень бифидо- и лактобактерий, резко изменено количество эшерихий. Создаются условия для развития условно-патогенной флоры. Тяжесть клинических симптомов, кишечные дисфункции, а также степень декомпенсации нарастают.

4-я степень – бифидофлора резко снижена или отсутствует, значительно уменьшено количество лактофлоры, значительные количественные и качественные изменения эшерихий, растет число условно-патогенных микробов в различных ассоциациях. Функциональные расстройства со стороны различных органов желудочно-кишечного тракта могут сопровождаться деструктивными изменениями кишечной стенки, что чревато развитием бактериемии и сепсиса. Микрофлора может выявляться в других органах и биологических средах, которые в норме стерильны (кровь, моча и др.), появляются дополнительные очаги инфекции.

Основные причины дисбактериоза.

Широкое распространение дисбактериозов в первую очередь обусловлено ухудшением экологической ситуации, широким неконтролируемым применением антибиотиков, стрессами, ростом иммунодефицитных состояний, снижением качества продуктов питания. Причины дисбактериоза условно подразделяют на две группы – экзогенные (внешние) и эндогенные (внутренние).

Экзогенные причины:

• Ухудшение экологического состояния антропогенного генеза; воздействие ксенобиотиков (промышленных и бытовых загрязнителей, биохимически чужеродных соединений, пестицидов, гербицидов, нитратов, нитритов, стимуляторов роста и т. д.)

• Воздействие радиации, в том числе в малых дозах; избыточное ультрафиолетовое облучение

• Несбалансированное питание (дефицит пищевых волокон, микро- макроэлементов, избыток консервированных и рафинированных продуктов, недостаток витаминов и т. д.)

• Неадекватное использование антибиотиков

• Кишечные инфекции как бактериальной, так и вирусной этиологии (сальмонеллез, шигеллез, иерсиниоз, кампилобактериоз, рота- и энтеровирусные заболевания и т. д.)

• Высокая степень урбанизации и связанная с ней высокая вероятность передачи и быстрого распространения различных инфекционных заболеваний

• Физический и эмоциональный стресс («медвежья болезнь»)

• Резкая смена климатических и географических поясов («диарея путешественника»), сезонные колебания

• Химио- и гормонотерапия; лечение цитостатиками и иммунодепрессантами; регулярное употребление слабительных раздражающего действия

• Гиподинамия

• Злоупотребление алкоголем

Эндогенные причины:

• Возраст (младенческий и старческий)

• Хронические воспалительные заболевания ЖКТ, особенно с секреторной недостаточностью; стойкие дискинезии ЖКТ

• Аномалии строения ЖКТ, врожденные и приобретенные вследствие травм, заболеваний и операций

• Иммунодефицитные состояния различного происхождения, хронические инфекции

• Заболевания обмена веществ (в том числе сахарный диабет, атеросклероз и другие)

• Аллергии, особенно связанные с ЖКТ

• Онкологические заболевания