Количественное определение аскорбиновой кислоты

Метод количественного определения аскорбиновой кислоты основан на ее редуцирующих свойствах, в частности способности восстанавливать йодат калия до свободного йода, количество которого определяют титриметрически по реакции с крахмалом.

Ход работы. 2-10 г растительного материала измельчают, растирают в фарфоровой ступке с 40 мл дистиллированной воды в течение 10 минут и полностью переносят в мерную колбу на 100 мл. Ступку ополаскивают водой, которую сливают в ту же колбу. Общий объем в мерной колбе доводят до 100 мл дистиллированной водой и фильтруют раствор в сухой стаканчик или колбу.

В конические колбочки емкостью 100 мл наливают 10 мл фильтрата, 1 мл 2% раствора HCI, 0,5 мл 1% раствора KI и 2 мл 0,5% раствора крахмала. Смесь доводят водой до 20 мл, перемешивают и титруют из микробюретки 0,01N раствором йодата калия до устойчивого синего окрашивания. Все операции по определению аскорбиновой кислоты следует проводить быстро (в течение 10 минут). Параллельно осуществляют контрольное титрование смеси реактивов, при этом вместо 10 мл фильтрата в пробу вносят 10 мл воды.

Вычисляют результаты по разности количества 0,01N раствора йодата калия, затраченного на титрование контрольной и опытной проб. Например, если разница при титровании составляет 2 – 1 = 1 мл 0,01N раствора йодата калия, то количество аскорбиновой кислоты равно 1  0,088 = 0,088 мг в 10 мл или 0,88 мг в 100 мл вытяжки (исходя из того, что 1 мл 0,01N йодата калия соответствует 0,088 мг аскорбиновой кислоты). Далее производят расчет количества витамина С в 100 г продукта, учитывая навеску растительного материала.

Контрольные вопросы

1. Что такое витамины? Какова их биологическая роль?

2. По какому принципу классифицируются витамины? Какие классы витаминов при этом выделяют? Перечислите витамины, относящиеся к каждому из указанных Вами классов.

3. Дать понятие «авитаминозы» и «гиповитаминозы». Каковы причины их возникновения?

4. Что является источниками витаминов?

5. Как можно оценить витаминную обеспеченность организма?

6. В состав каких коферментов входят тиамин, рибофлавин, пиридоксин, ниацин? В каких реакциях метаболизма участвуют эти коферменты?

7. С помощью каких качественных реакций можно обнаружить присутствие тиамина, рибофлавина, ниацина, пиридоксина, аскорбиновой кислоты? В чем заключается механизм данных реакций?

8. Какие свойства аскорбиновой кислоты составляют основу метода ее количественного определения? В чем заключается принцип этого метода?

ЖИРОРАСТВОРИМЫЕ ВИТАМИНЫ

Качественные реакции на витамин А (ретинол)

Наиболее богаты витамином А печень морских рыб, крупного рогатого скота и свиней, яичный желток, молочные продукты, морковь, томаты, свекла, салат. В овощах витамин А содержится в виде провитаминов – каротинов, которые в организме превращаются в ретинол. Суточная потребность в витамине А – 1-2,5 мг ретинола или 2-5 мг каротина.

Витамин А и его производные (ретиналь, ретиноевая кислота) регулируют рост и дифференцировку клеток развивающегося организма (эмбриона, молодого организма), деление и дифференцировку быстропролиферирующих тканей (хряща, костной ткани, эпителиальных клеток кожи и слизистых, сперматогенного эпителия и плаценты, что делает его необходимым для осуществления нормальной репродуктивной функции). Окисленная форма ретинола – цис-ретиналь – принимает участие в акте зрения в качестве небелкового компонента родопсина.

Наиболее ранними признаками недостаточности ретинола является нарушение темновой адаптации (сумеречная или ночная слепота – гемералопия или никталопия). При гиповитаминозе возникают также уменьшение массы тела, остановка роста (в молодом возрасте), пролиферация и ороговение эпителия (фолликулярный гиперкератоз), сухость кожи и слизистых, слущивание эпителия, нарушение репродуктивной функции, сухость конъюктивы глаза (ксерофтальмия), помутнение и размягчение роговицы (кератомаляция).

Ход работы. 1. На сухое часовое стекло наносят 5 капель масляного раствора ретинола ацетата в хлороформе и 1 каплю концентрированной серной кислоты, в результате чего образуется красно-фиолетовое или красно-бурое окрашивание.