Техника подсчета лейкоцитарной формулы

Лейкоцитарной формулой называется процентное соотношение отдельных видов лейкоцитов в крови. Подсчет лейкоцитарной формулы проводится в окрашенных мазках крови с помощью иммерсионной системы микроскопа.

Техника подсчёта лейкограммы.

Подсчет лейкоцитарной формулы производится всегда в тонком месте ближе к концу мазка, где хорошо видна структура клеток ( где эритроциты лежат отдельно, а не сложено в монетные столбики – это признак толстого слоя).

Различные виды лейкоцитов в зависимости от своего удельного веса неравномерно распределятся по поверхности мазка : более крупные формы – нейтрофилы, эозинофилы, базофилы и моноциты распределяются по периферии преимущественно вдоль верхнего и нижнего краев мазка. Подсчет лейкоцитарной формулы производится всегда по одной системе : половину клеток считают в верхней, другую половину клеток в нижней части мазка, не заходя за самый край и середину; счет ведут по зигзагу: подвигают препарат на 3-4 поля зрения вдоль края мазка, потом 3-4 поля зрения под прямым углом к середине, затем параллельно раю и возвращаются к краю мазка и считают все лейкоциты.

При большом количестве лейкоцитов в 1 мкл крови или при неизменной лейкоцитарной формуле следует подсчитывать не менее 200 лейкоцитов в мазках крови, число отдельных лейкоцитов делят на 2 и получают процентное соотношение лейкоцитов.

Принцип морфологической дифференциации клеток крови в окрашенных мазках.

При дифференциации различных видов лейкоцитов в окрашенных мазках- крови отмечают морфологические признаки:

1. величина клеток;

2. характер ядра ( его структура, форма, окраска, хроматиновое строение, наличие или отсутствие нуклеол в ядре)

3. характер цитоплазмы ( ее цвет, наличие зернышек, вакуолей, фагоцитарных элементов);

4. соотношение между величиной ядра и величиной цитоплазмы (ядерно-цитоплазменное соотношение);

5. характер зернистости;

Лимфоциты, моноциты и промиелоциты могут содержать азурофильную зернистость (розовато-фиолетового цвета),которая называется неспецифической.

Для гранулоцитов характерна специфическая зернистость в цитоплазме.

Различают:

1. Эозинофильную зернистость – это однородная по цвету, форме и величине, крупная, равномерно заполняющая всю цитоплазму, в зрелых клетках она имеет кирпично-розовый цвет (кетовая икра) в молодых эозинофильных лейкоцитах – коричневый или буро-синий оттенок.

2. Базофильная зернистость чаще фиолетового цвета, реже черного, неоднородная по величине и форме, неравномерно располагается на ядре и в цитоплазме, крупная.

3. Нейтрофильная зернистость специфична нейтрофилам. Она – пылевидная розовато-фиолетового цвета, обильная, но не всегда равномерно заполняет цитоплазму.

Клиническое значение.

Лейкоцитарная формула дает представление только об относительных величинах отдельных видов лейкоцитов в % и не отражает истинного количества их в 1 мкл крови. По процентному соотношению вычисляют абсолютное число, то есть , сколько каждого вида клеток в 1 мкл крови. Для этого необходимо знать количество лейкоцитов в 1 мкл крови (абсолютное содержание в крови количества лейкоцитов, подсчитанное в камере Горяева или автоматическим методом).

Например:

100 – 3

6000 – х; х=(6000*30)/100=1800 лимфоцитов в 1 мкл крови.

Практически абсолютное содержание лейкоцитов в 1 мкл. высчитывается путем умножения 2-х первых цифр общего количества (подсчитанное в камере Горяева или автоматическим счётчиком) лейкоцитов данного вида в % (подсчитанных в мазках крови).

Существуют нормы абсолютных чисел отдельных видов лейкоцитов.

Нормы абсолютных чисел количеств лейкоцитов.

Эозинофилы: 100-300 в 1 мкл

Базофилы: до 60 в 1 мкл

Нейтрофилы: палочкоядерные 60-300 в 1 мкл., сегментоядерные 2200 – 4200 в 1 мкл.

Лимфоциты: 1200 – 3000 в 1 мкл

Моноциты: 90-600 в 1 мкл

При исследовании лейкоцитарной формулы учитывается так же индекс сдвига ядер нейтрофилов, то есть соотношение между количеством сегментированных и несегментированных нейтрофилов. В норме он определяется: индекс сдвига=палочкоядернын : сегментоядерные =0,06.

При ряде патологических состояний отмечается ядерный сдвиг нейтрофилов «влево», то есть повышение в крови незрелых нейтрофилов. В этом случае индекс сдвига подсчитывается по формуле: (миелоциты + юные + ю.палочкоядерные)/сегментоядерные. Показатель ядерного сдвига ниже 0,05 указывает на сдвиг «вправо», то есть уменьшение количества нейтрофилов палочкоядерных и преобладание в переферической крови зрелых старых сегментоядерных нейтрофилов. Наиболее характерно для инфекционных или гнойно-воспалительных процессов, причём выраженность нейтрофилёза и характер ядерного сдвига и тяжесть процессов является важнейшим критерием в прогнозе заболевания.

Нейтрофилы	Нейтрофилы	Эозинофилы	Базофилы	Лимфоциты	Моноциты
Палочкоядер- ные	Сегменто- ядерные
1- 6 %	45-70%	0 – 5 %	0 – 1%	18 – 40%	2 – 9%

Нейтрофилез (нейтрофилия) – увеличение содержания нейтрофилов выше 6,0* 10 в 1 мкл крови. Нейтрофильный лейкоцитоз сопровождает обычные бактериальные инфекции, интоксикации, заболевания, протекающие с некрозом ткани. Иногда наблюдаются лейкемоидные реакции – изменения крови активного характера, напоминающие лейкозы (лейкемии) по степени увеличения числа лейкоцитов или по морфологии клеток. Высокий нейтрофильный лейкоцитоз с омоложением состава лейкоцитов(сдвиг влево вплоть до промиелоцитов и миелобластов) может возникать при острых бактериальных пневмониях и других тяжелых инфекциях, остром гемолизе, при злокачественных опухолях.

Эозинофилия - повышение уровня эозинофилов крови выше 4,0* 10 в 1 мкл. Эозинофилия сопутствует аллергии, внедрению чужеродных белков и других продуктов белкового происхождения.

Базофилия – увеличение содержания базофилов в периферической крови, наблюдается наиболее часто при хроническом язвенном колите, некоторых кожных поражениях.

Моноцитоз – увеличение числа моноцитов выше 7,0*10 в 1 мкл у взрослого. Моноцитоз является признаком хронического моноцитарного лейкоза, но может отмечаться и при других патологических состояниях , например, при подострых и хронических бактериальных инфекциях (легочный туберкулез, бруцеллез, сифилис, малярия, язвенный колит и др.)

Лимфоцитоз – увеличение числа лейкоцитов выше 4,0 – 10 в 1 мкл крови. Сопровождают вирусные, хронические бактериальные инфекции, лимфолейкоз.

Лейкимоидные реакции лимфатического типа отмечаются наиболее часто при инфекционном мононуклеозе, остром инфекционном лимфоцитозе, туберкулезе, сифилисе, бруцеллезе.