Оценка биоцидной активности дезсредств методом орошения тест-поверхностей

Вводная часть

Настоящее положение устанавливает методику выполнения исследований оценки биоцидной активности дезинфицирующих препаратов в отношении микроорганизмов бактериальной природы.

Средства исследований, вспомогательные материалы, растворы

При выполнении исследований применяют следующие средства исследований и другие технические средства:

-тест-поверхности (размер 3×2 см) из следующих материалов: стекло, металл, резина, дерево, ткань;

-весы равноплечные ручные, ВР-5, ТУ 64-1-2834-80;

-гиря аналитическая, ГА-200 (1 г), ГОСТ 7328-82Е;

-чашки Петри, ГОСТ 25336-82Е;

-пробирки биологические, ГОСТ 25336-82Е;

-пробки резиновые № 12,5, ГОСТ 7852-76;

-пипетки мерные 1,0 и 5,0 см³, ГОСТ 20292-74Е;

-шпатели стеклянные, лабораторного изготовления;

-груша (спринцовка) № 9, ТУ 38-6-82-70;

-резиновая трубка для переливания крови, диаметр 6…7 мм, ГОСТ 3399-76;

-спиртовка, ГОСТ 25336-82Е;

-штатив для пробирок,

-карандаш по стеклу, ТУ 480-4-252-70;

-плотные питательные среды (ППС) (см. приложение);

-разводящая жидкость (см. приложение);

-вода дистиллированная, ГОСТ 6709-72;

-спирт этиловый, ГОСТ 18300-72;

-лопаточка из нержавеющей стали лабораторного изготовления;

-весы лабораторные аналитические, ГОСТ 24104-88Е;

-секундомер;

-раствор нейтрализующей жидкости;

-исследуемый дезинфицирующий раствор;

-культура микроорганизмов;

Метод исследований

Исследования выполняют методом регистрации остаточного количества жизнеспособных микроорганизмов на тест-поверхностях.

Требования безопасности, охраны окружающей среды

Работу с культурами возбудителей проводят в соответствии с «Санитарными правилами по безопасности работы с микроорганизмами 1-2 групп патогенности» (СП 1.2.011-94).

Условия исследований

При проведении исследований соблюдаются следующие условия:

-температура в помещении 20±2⁰С;

-пробирки биологические ( ГОСТ 25336-82Е) и пипетки мерные 1,0 и 5,0 см³ ( ГОСТ 20292-74Е) не должны иметь сколов, трещин и видимых повреждений;

Подготовка к выполнению исследований

При подготовке к выполнению исследований проводят следующие работы:

Подготовка помещения

Для проведения работы создаются стандартные условия проведения эксперимента. Для обеспечения температуры 20±2⁰С и относительной влажности 70…90% используется боксированное лабораторное помещение. Влажность в помещении контролируется с помощью психрометра ПБУ 1М.

Подготовка культур

Рекомендуемая биологическая концентрация культур подготовленных для исследования не менее 1·10⁶ КОЕ/см^-3(гр).

В боксирующее устройство помещают укупорку с препаратом и необходимое для проведения эксперимента имущество (посуда, ампулы, весы, гири и т.д.).

Подготовка тест-поверхностей

Тест-поверхности размером 3×2 см из следующих материалов: стекло, металл, резина, дерево, ткань и др. укладывают в чашки Петри или заворачивают в бумагу и стерилизуют в сухожаровом шкафу или автоклаве 30 мин при температуре 110⁰С.

Выполнение исследований

При проведении исследований выполняют следующие операции:

-отбор необходимого количества препарата;

-экспозицию контаминированных тест-поверхностей после орошения их раствором дезинфицирующего препарата;

-отбор проб с тест-поверхностей;

-анализ содержания жизнеспособных ПБА в пробах с тест-поверхностей.

Анализ жидких препаратов

Расчетное количество стерильных тест-поверхностей поочередно поместите в емкость, содержащую суспензию микроорганизмов. Затем излишки жидкости уберите стерильной фильтровальной бумагой. Тест-поверхности подсушите в течении 20-30 минут при температуре 27⁰С или 37⁰С в зависимости от вида исследуемых микроорганизмов.

Отберите для контроля исходной БК тест-поверхностей два объекта и поместите в широкогорлую пробирку со смывной жидкостью. Исходный уровень контаминации тест-поверхностей должен быть не менее 1×10⁶ КОЕ×см². Произведите помещение тест-поверхностей в раствор исследуемого дезсредства на определенное время.

Отберите по два объекта в широкогорлые пробирки с нейтрализующей жидкостью по истечении заданных экспозиций. Поместите пробирки для встряхивания в шуттель на 5…10 мин с частотой колебаний 60…120 мин^-1. После чего из каждой пробирки отберите пробу и произведите высев на ППС методом последовательных десятикратных разведений.

Анализ содержания жизнеспособных ПБА в пробах осуществите установленным порядком с использованием соответствующих разводящих жидкостей и плотных питательных сред (не менее 5 чашек Петри на одно разведение).

Расчет результатов

БК м/о в пробах вычисляют по формуле:

где: С(БК) - биологическая концентрация, КОЕ×см^-3;

r - количество колоний, выросших на чашках Петри;

v – объем смывной жидкости, мл;

V – объем посевной дозы, мл;

S – площадь исследуемой поверхности , см²;

Сохраняемость м/о после экспозиции определяют по формуле:

,

где: К - количество (доля) жизнеспособных микроорганизмов в процентах, сохранившихся после воздействия на них дезинфектанта;

БК₀ - исходная биологическая концентрация м/о, определенная до воздействия дезинфектанта, млрд.×мл^-1;

БК_i - биологическая концентрация м/о, определенная после воздействия дезинфектанта, млрд.×мл^-1.

Примечание: Дезсредство – 5% раствор перекиси водорода с 0,5% порошка СФ 2У;

Нейтрализующая жидкость – 2% раствор тиосульфата натрия;

Питательные среды – среды для выращивания соответствующего микроорганизма;

Разводящая жидкость – физиологический раствор.