Исходный материал

1. Лизис: 0,3 М NaCl+ 0,015 М цитратNa+ 0,1 М ЭДТА + 0,1 М трис-НСl(рН 8) + 2 %-ныйSDS
↓
2. Депротеинизация: 1 М NaCl+ смесь хлороформа и изоамилового спирта (24:1)
↓
	Центрифугирование
↓			↓
Денатурированные белки, часть полисахаридов			Нуклеиновые кислоты, часть полисахаридов
			↓
		3. Осаждение спиртом: 96 % этанол (2 объема)
↓				↓
Раствор (часть полисахаридов, олигонуклеотиды)				Осадок (нуклеиновые кислоты, полисахариды)
				↓
4. Обработка РНКазой: (0,015 М NaCl+ 0,015 М цитратNa) +NaClдо 0,15 М, РНКаза, 1-2 часа, 37°C
↓
5. Депротеинизация
↓
6. Осаждение изопропанолом: 3 М ацетат Na + 0,001 М ЭДТА (рН 7) (0,1 объем) + изопропанол
↓			↓
Раствор (полисахариды, олигонуклеотиды)			Осадок (ДНК)
			↓
			7. Переосаждение спиртом
			↓
			ДНК

Для более эффективной очистки ДНК и увеличения выхода ее из ткани используют различные дополнительные приемы. Один из них - применение сильного катионного детергента бромистого цетилтриметиламмония (цетавлона). Использование цетавлона для очистки ДНК основано на том, что при его взаимодействии с полианионами (в том числе с нуклеиновыми кислотами) образуются нерастворимые в воде комплексы. Эти комплексы растворимы в солях, когда концентрация соли превышает некоторое критическое значение, зависящее от природы соли, структуры и молекулярного веса нуклеиновой кислоты. Критическая концентрация соли, при которой осаждаются соответствующие цетавлоновые комплексы, для ДНК выше, чем для РНК, полисахаридов и белков. На основании этих общих соображений цетавлон может быть применен на любых стадиях выделения ДНК, начиная с добавления его в лизирующую смесь. Достоинством методов, использующих цетавлон при очистке ДНК, служат относительная простота и быстрота выделения, а также высокая эффективность очистки. Недостаток заключается прежде всего в относительно небольшом выходе (не более 30—40 мг/кг свежего материала) и некоторой нестандартности методики.

Весьма перспективным оказалось использование при работе с растительными объектами хроматографии на гидроксилапатите (ГАП). Принцип хроматографической очистки и разделения ДНК на ГАП основан на том, что однонитчатые и двунитчатые молекулы нуклеиновых кислот и молекулы белков неодинаково прочно связываются с частицами фосфата кальция и поэтому смываются с колонки ГАП при разных концентрациях фосфатного буфера.

Далее в общих чертах описываются процедуры получения экстрактов из различных тканей.

Ткани животных

Ткань разрезают на кусочки, удаляют, насколько это возможно, соединительную ткань и жир. Разрезанную ткань помещают в лопастной гомогенизатор, добавляют 2-3 объема холодного экстрагирующего буфера в расчете на 1 г ткани. Смесь гомогенизируют в течение 30 с. Гомогенизацию повторяют, если остались куски неразрушенной ткани. В процессе доведения рН до нужного значения перемешивают гомогенат 10 - 15 мин, а затем переносят его в центрифужные пробирки. Центрифугируют при 5000—10000 g в течение 60 мин (2·10⁵— 3·10⁵ g·мин). Экстракт сливают через фильтр «Мirасlоth» (Сhiсорее Мills, Inс., N. J.), марлю или стеклянную вату с целью удаления частиц жира и других крупных частиц.