4. Количественное определение белка в моче по методу Робертса-Стольникова.

_{При наличии в моче белка, открытого качественными реакциями, его количество определяют методом Робертса-Стольникова. В основе метода лежит проба Геллера – денатурация белка азотной кислотой. Экспериментально установлено, что при наслаивании на азотную кислоту, растворы, содержащие 0,0033% белка, дают белое колечко в промежутке между второй и третьей минутами после наслаивания. Если колечко появляется непосредственно после наслаивания раствора белка на азотную кислоту, то путем последовательного разведения исследуемого материала достигают такого максимального разведения, при котором появляется кольцо между второй и третьей минутами. Умножая разведение на 0,0033%, получаем процентное содержание белка в моче.}

_{Ход работы. В пробирку налить 1 мл концентрированной азотной кислоты с хлористым натрием (реактив Ларионовой) и наслаивать на нее осторожно из пипетки равный объем мочи. Моча, благодаря меньшему удельному весу, наслаивается на кислоту. На границе двух жидкостей при наличии белка появляется белое кольцо, толщина и быстрота появления которого зависят от количества белка. Если колечко появилось сразу после наслаивания мочи, то нужно вновь повторить эту реакцию с мочой, сделав разведение в 10, 20 раз, при необходимости - в 30 раз и т.д., добиваясь, чтобы белое колечко денатурированного белка, появилось между второй и третьей минутами после наслаивания.}

_{Расчет. Колечко появилось через 2 минуты после наслаивания, когда моча была разведена в 40 раз. Следовательно, содержание белка в моче составляет 0,0033 × 40 = 0,132%.}

5. Качественное определение кетоновых тел.

_{В нормальной моче кетоновые тела (ацетон, ацетоуксусная и -гидроксимасляная кислоты) содержатся в небольших количествах (0,02-0,05 г/сут, или 20-50 мг) и обычными качественными реакциями не обнаруживаются. Повышенная экскреция их с мочой (кетонурия) наблюдается при сахарном диабете (до 10-50 г/сут), голодании, инфекционных заболеваниях (туберкулезе и др.)}

_{Проба с нитропруссидом натрия (Легаля) на ацетон}

_{При взаимодействии ацетона с нитропруссидом натрия в щелочной среде появляется оранжево-красное окрашивание. После подкисления концентрированной уксусной кислотой оранжево-красное окрашивание переходит в вишневое.}

_{В пробирку налить 1 мл мочи и добавить 2 - 3 капли свежеприготовленного раствора нитропруссида натрия и 3 - 4 капли 10% раствора едкого натра. После развития оранжево-красной окраски прилить несколько капель концентрированной уксусной кислоты и отметить изменение цвета раствора в вишневый.}

_{Проба Либена на ацетон}

_{Проба основана на образовании йодоформа СНI3 при взаимодействии ацетона с I2 в щелочной среде.}

_{К 1 мл мочи добавить 3 - 4 капли 10% раствора КОН и по каплям - раствора йода в йодистом калии (раствор Люголя) до появления мути (слабо-желтый кристаллический осадок йодоформа) при наличии ацетона, обладающего специфическим «больничным» запахом.}

_{СНз-С-СН3 + 2I2 + 4NаОН — СНI3 + CH3COONa + 3NaI + 3Н2О}

_

_О

_{К 1 мл мочи добавить 4 - 5 капель 5% раствора FеСl3. Наблюдается вишнево-красное окрашивание за счет комплексного соединения железа с енольной формой ацетоуксусной кислоты, постепенно бледнеющее при стоянии вследствие самопроизвольного декарбоксилирования ацетоуксусной кислоты:}

_{СНз-С-СН2СООН — СН3-С-СН3 + СО2}

_{ }

_{О О}