9. Количественное определение остаточного азота крови.

_{Принцип определения: в результате сжигания безбелкового фильтрата крови азот низкомолекулярных азотистых соединений переходит в состав иона NH4. Количество азота устанавливается по количеству кислоты, необходимой для связывания образовавшегося аммония.}

_{В норме азот остаточный составляет 20— 40 мг%. Увеличение содержания азота остаточного в крови наступает при нарушении функции почек, печени, при усиленном распаде тканей (гангрена, туберкулез, злокачественные опухоли). 10. Количественное определение мочевины в сыворотке крови и моче. Количественное определение мочевины в моче по Рашковану.}

_{Принцип метода. Основан на том, что мочевина с гипохлоритом натрия и фенолом образует продукт зеленого окрашивания.}

_{Ход работы. В пробирку поместить 0,1 мл разведенной в 100 раз исследуемой мочи, добавить 7 мл этилового спирта и прилить 2 мл дистиллированной воды. К полученной смеси прибавить 1 мл 0,035 н раствора НСl, тщательно перемешать, добавить 1 мл 1,2 % NaOCl, вновь тщательно перемешать и сразу же добавить 1 мл 5 % раствора фенола. Содержимое пробирки хорошо перемешать и поместить на 25 мин в термостат при температуре 55-60° С.}

_{Окрашенный в зеленый цвет раствор охладить и колориметрировать на ФЭКе с красным светофильтром в кюветах толщиной 5 мм против воды.}

_{Концентрацию мочевины рассчитать с помощью калибровочного графика с учетом разведения мочи и суточного диуреза (1500-2000 мл).}

_{Принцип в крови Мочевина под действием уреазы разлагается на углекислый газ и аммиак, который в щелочной среде с гипохлоритом натрия и фенолом образует индофенол синего цвета (метод Бертло). Светопоглощение образовавшегося продукта пропорционально содержанию мочевины в образце.}

11. Количественное определение креатинина в сыворотке крови и моче.

_{Количественное определение креатинина в моче по Яффе.}

_{Принцип метода. Метод основан на способности креатинина в щелочной среде взаимодействовать с пикриновой кислотой с образованием пикрата креатинина оранжево-красного цвета.}

_{Ход работы. Приготовить опытную пробу: в цилиндр объемом 100 мл внести 0,5 мл мочи и 3 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты. Смесь тщательно встряхнуть и добавить 0,2 мл 10% раствора едкого натра, выдержать 10 мин при комнатной температуре и довести дистиллированной водой до 100 мл. Приготовить контрольную пробу: к 3 мл раствора пикриновой кислоты добавить 0,2 мл 10% раствора едкого натра и довести объем смеси дистиллированной водой до 100 мл. Приготовить стандартную пробу: к 0,5 мл стандартного раствора (содержит 8,8 ммоль/л, или 1 г/л креатинина) прилить 3 мл раствора пикриновой кислоты и 0,2 мл 10% раствора едкого натра, выдержать 10 мин при комнатной температуре и довести дистиллированной водой до 100 мл. Интенсивность окраски опытной и стандартной проб измерить на ФЭКе против контрольного раствора в кювете с толщиной слоя 10 мм при зеленом светофильтре.}

_{Расчет: концентрация креатинина (моль/сут) = (Еоп/Ест) × 8,8}

_{Норма: 4,4 – 17,6 моль/сут, или 0,5 – 2 г/сут.}

_{Клинико-диагностическое значение. Содержание креатинина в моче зависит от характера питания, увеличиваясь при употреблении мясной пищи. Повышение его экскреции с мочой наблюдается при усиленной мышечной работе, лихорадочных состояниях, пневмонии авитаминозе Е, тиреотоксикозе и др.; понижение экскреции с мочой наблюдается при мышечной атрофии, лейкемии, амилоидозе почек, голодании.}

_{Принцип определения креатинина методом Поппера}

_{В щелочной среде пикриновая кислота взаимодействует с креатинином с образованием оранжево-красной окраски (реакция Яф­фе — образование таутомера пикрата креатинина), которую изме­ряют фотометрически. Определение в сыворотке крови проводят после депротеинизирования, в моче — после разведения водой. Определение не совсем специфично, интерферируют вещества с активной метиленовой группой и некоторые восстанавливающие вещества, например глюкоза, ацетон, ацетоуксусная и пировиноградная кислоты.}