Метод раздавленной капли

1. На предметное стекло наносят пипеткой или петлей каплю культуры и покрывают ее покровным стеклом. !Чтобы не образовалось пузырьков воздуха, покровное стекло подводят ребром к краю капли и резко опускают его

2. Для предохранения от высыхания препарат помещают во влажную камеру

3. Микроскопируют в темном поле при увеличении объектива 40Х

Препарат можно поместить во влажную камеру для предохранения от высыхания

Метод висячей капли

1. Для приготовления препарата необходимы стекло с лункой, покровное стекло, вазелин. Края лунки покрывают тонким слоем вазелина (рис. № 10)

2. На покровное стекло наносят каплю культуры и осторожно накрывают покровное стекло стеклом с лункой так, чтобы капля оказалась в центре

3. Склеившиеся стекла быстро переворачивают покровным стеклом вверх. Капля находится в герметической камере и сохраняется долгое время

Микроскопия сначала при увеличении 8Х. Находят край капли, а затем переводят на большое увеличение 40Х (рис. № 11).

Рис. №10. Техника приготовления препарата висячая капля

Рис. №11. Лептоспира в темном поле

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №6

Зачетное занятие с замером навыков по теме:

«Морфология микроорганизмов»

Перечень манипуляций к зачету:

- подготовить препарат и окрасить его по методу Грама. Значение метода

- подготовить препарат и окрасить его по методу Ожешко. Значение метода

- подготовить препарат и окрасить его по методу Бурри-Гинса. Значение метода

- подготовить препарат, окрасив его по методу Циля-Нильсена (1999г). Значение метода

- подготовить препарат висячая капля, значение методики

- подготовить препарат раздавленная капля, значение методики

- промикроскопировать готовые препараты, окрашенные различными методами: по Граму, Ожешко, Бурри-Гинсу, Циля-Нильсену.

Вопросы к зачету:

- назовите основные формы бактериальных клеток,

-перечислите основные и дополнительные структуры прокариотической клетки, их функции,

- укажите состав и строение жгутиков, группы бактерий по расположению жгутиков,

- назовите строение и функции нуклеоида у прокариот,

- укажите, что собой представляет спора и ее значение для бактерий, расположение спор в клетке (примеры микробов).

Тестовые задания для самоконтроля

1. Расставьте этапы приготовления препарата в нужном порядке:

а) окрашивание

б) фиксация

в) приготовление мазка

г) высушивание

2. Укажите соответствие между возбудителем и методом его окраски:

1. стафилококк а) по Граму

2. микобактерия туберкулеза б) Циля - Нильсену

3. пневмококк в) Бурри - Гинсу

4. бацилла сибирской язвы г) Ожешко

3. Простой метод окраски:

а) по Нейссеру

б) метиленовым синим

в) по Граму

г) по Романовскому - Гимзе

4. Хранителем наследственной информации у прокариот является:

а) нуклеоид

б) спора

в) включения

г) капсула

5. Окраска по методу Бурри отличается от метода Бурри-Гинса:

а) по времени окрашивания

б) отсутствия фуксина Пфейффера

в) разные разведения туши

г) мазок фиксируется в пламени горелки

6. При окраске препарата методом Циля-Нильсена (инструкция 1999г.) используется:

а) 0,5% НС1

б) 0,9% NaCl

в) 5% Н₂SО₄

г) 25% Н₂SО₄

7. К спорообразованию способны:

а) стафилококки

б) бациллы

в) сарцины

г) кишечная палочка

8. В методике окраски по Бурри-Гинсу используется черная тушь, разведенная в

а) 2 раза

б) 5 раз

в) 10 раз

г) 100 раз

9. Укажите соответствие:

Метод окраски: Цель метода:

1. метод Ожешко а) обнаружение капсулы

2. метод Бурри б) определение кислотоустойчивости

3. метод Циля-Нильсена в) отношение к Граму

4. метод Грама г) определение споры

10. При изучении подвижности используется микроскопия: а) фазово-контрастная

б) темнопольная

в) электронная

г) люминисцентная

11. Гонококки - это шаровидные бактерии, в мазках выглядят как:

а) диплококки

б) сарцины

в) микрококки

г) тетракокки

12. При окраске по Граму используется следующий краситель:

а) фуксин Циля

б) метиленовый синий

в) бриллиантовый зеленый

г) генциановый фиолетовый

13. Спору у бактерий можно выявить, окрасив препарат:

а) метиленовым синим

б) методом Ожешко

в) методом Грама

г) по Бурри-Гинсу

14. Флагеллин - это белок, входящий в состав:

а) оболочки

б) капсулы

в) цитоплазмы

г) жгутиков

15. Укажите соответствие:

Вид микроскопии: Цель применения:

1) Световая обычная микроскопия а) для изучения живых неокрашенных

препаратов

2)Фазово-контрастная микроскопия б) для изучения окрашенных препаратов

16. Перетрихи - имеют следующее расположение жгутиков на клетке:

а) по всей поверхности

б) на обоих концах

в) пучок на одном из концов

г) один жгутик на конце клетки

17. Виды фиксации:

1) физический а) пламя горелки, б) смесь Никифорова,

2) химический в) ацетон, г) спирт

18. Предметное стекло с лункой используется:

а) в методе Циля-Нильсена

б) изучение подвижности

в) изучения на наличие капсулы

г) при обнаружении споры

19. Дополнительной структурой бактерий является:

а) нуклеоид

б) ЦПМ

в) капсула

г) рибосомы

20. Препарат из нативного материала готовится при окраске:

а) Грама

б) Бурри - Гинса

в) Ожешко

г) Циля-Нильсена

21. Бактерии штопорообразной формы называют:

а) спирохеты

б) спириллы

в) вибрионы

г) бруцеллы

22. Негативные методы окраски используются при методе:

а) Бурри-Гинса

б) Циля-Нильсена

г) Ожешко

д) Нейссера

23. В состав клеточной стенки бактерий входит:

а) крахмал

б) муреин

в) альбумин

г) пилин

24. Методы изучения микроорганизмов:

а) серологические

б) бактериологические

в) аллергические

г) все ответы верны

ОТВЕТЫ НА ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ

1. в, г, б, а

2. 1 – а

2 – б

3 – в

4 - г

3. б

4. а

5. б

6. г

7. б

8. в

9. 1 – г

2 – а

3 – б

4 – в

10. б

11. а

12. г

13. б

14. г

15. 1- б

2 –а

16. а

17. 1- а

2 – б, в, г

18. б

19. в

20. г

21. а

22. а

23. б

24. г

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Алешукина А.В. Медицинская микробиология: Учебное пособие. – Ростов н/Д: Феникс, 2003 г.

2. Бакулина Н.А., Краева Э.Л. Микробиология. М., «Медицина», 1976

3. Микробиология /Под ред. Ф.К. Черкес. – М.: Медицина, 1986 г.

4. Основы микробиологии, вирусологии, иммунологии: Учебник / А.А.Воробьев, Ю.С. Кривошеин, А.С. Быков и др. Под ред. А.А. Воробьева и Ю.С. Кривошеина. – М.: Мастерство; Высшая школа, 2001 г.

5. Прозоркина Н.В., Рубашкина Л.В. Основы микробиологии, вирусологии, иммунологии: Учебное пособие для средних специальных медицинских учебных заведений. – Ростов н/Д: Феникс, 2002 г.

6. Руководство для малого практикума по микробиологии, П.А.Чиров, З.И.Остроухова, Е.И.Тихомирова, Изд-во СГУ, 1998 г.

7. Сбойчаков В.Б. Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований: учебник для средних медицинских учебных заведений / В.Б. Сбойчаков. – СПб.: СпецЛит, 2007г.

ПРИЛОЖЕНИЕ №1

Техника безопасности в кабинете (лаборатории) микробиологии

Правила работы со спиртовкой

1. Заправленную спиртовку хранят плотно закрытой притертым колпачком, чтобы предотвратить испарение спирта с фитиля

2. При зажигании спиртовки нужно снять колпачок и поджечь фитиль спичкой. При этом нельзя сдвигать держатель фитиля, т.к. пламя проскочит внутрь спиртовки, что вызовет сильную вспышку и разбрызгивание горящего спирта

3. Нельзя зажигать спиртовку от другой уже горящей спиртовки, т.к. при этом может сдвинуться держатель фитиля и вылиться спирт

4. Нельзя дуть на пламя, чтобы погасить спиртовку. Для этого следует аккуратно закрыть спиртовку колпачком.

5. Необходимо следить за тем, чтобы спиртовка не перегревалась. Это ведет к испарению спирта и опасности взрыва

6. При длительном нагревании лучше пользоваться двумя спиртовками

7. Не следует при работе наклонять голову над спиртовкой, т.к. при накоплении паров спирта под держателем фитиля может происходить самопроизвольное вспыхивание

Правила пользования ручным химическим пенным огнетушителем

ОХП -10

В случае возникновения пожара необходимо:

1. Для приведения огнетушителя в действие – ручку верхней части корпуса поворачивают на 180^о и переворачивают огнетушитель вверх дном

2. Струю пены следует направлять не в центр пламени, а под минимальным углом к поверхности горения в нижнюю часть пламени, последовательно сбивая и оттесняя его от краев к центру

3. При тушении огня ОХП – 10 необходимо обесточить все помещения с помощью рубильника, т.к. химическая пена в составе огнетушителя обладает высокой электропроводностью

4. ОХП – 10 применяют для тушения крупных очагов возгорания, когда другие средства малоэффективны

Правила работы с живой культурой

1. Главное при посеве живой культуры – это оградить посев от посторонних микробов и распространение культуры микроорганизма с питательной среды или материала во внешнюю среду

2. Работать следует быстро, но без резких движений, усиливающих колебания воздуха

3. Во время посевов нельзя разговаривать, перемещаться по лаборатории

4. Вся посуда и оборудование, подвергшиеся обсеменению во время работы с культурой, обрабатываются на месте путем фломбирования в пламени спиртовки или сброса в емкость с дез. средством

5. По окончанию посевов рабочие поверхности столов подвергаются дезинфекции, обрабатываются руки

6. Лабораторная посуда с посевами помещается в термостат: пробирки в штативе, а чашки Петри переворачивают дном вверх

7. Использование материалов и средств личной гигиены, раздражающих кожу рук, запрещается

Правила работы с нагревательными приборами

1. При работе с электроплитками склянки с огнеопасными жидкостями следует держать на расстоянии не менее 1 м от рабочего места

2. Работать на неисправном и незаземленном оборудовании категорически запрещается

3. При временном прекращении работы, даже на непродолжительное время, источники нагревания выключать

4. Нельзя нагревать толстостенную стеклянную посуду, мерную посуду, неградуированные цилиндры. Фарфоровую посуду (стаканы, выпарительные чашки) можно нагревать на открытом пламени или водяной бане

5. Стеклянную посуду с плоским дном нагревать на открытом пламени или электроплитке с открытой спиралью нельзя

ПРИЛОЖЕНИЕ №2

Правила работы в микробиологической лаборатории

1. Работа с заразным материалом требует особой тщательности и соблюдения правил личной и общественной безопасности при ее выполнении

2. В помещении лаборатории необходимо строго соблюдать чистоту и порядок. На рабочем столе не должно быть никаких посторонних предметов. Запрещается прием пищи, излишние разговоры, суета

3. Работа обязательно проводится в халате, шапочке, сменной обуви

4. Каждый студент имеет в лаборатории свое постоянное рабочее место

5. Материал для работы принимает дежурный по бригаде у лаборанта и раздает студентам в присутствии преподавателя

6. В начале занятия необходимо записать в тетрадь дату, номер, тему занятия, план выполняемой работы. В процессе работы делаются записи и зарисовки в дневник

7. Все предметы, использованные при работе с живой культурой, обезвреживаются

8. В конце занятия студенты сдают весь материал дежурному по бригаде, а он лаборанту или преподавателю

9. В конце занятия студент должен:

- привести в порядок свое рабочее место

- сдать микроскоп, материал дежурному

- вымыть руки дез. раствором, а затем мылом

- представить преподавателю для подписи дневник

Анна Вадимовна Палиенко

Руководство для студентов отделения 060110 «Лабораторная диагностика»

к практическим занятиям

по курсу «Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований»

раздел «Морфология микроорганизмов»